精烏顆粒薄層鑒別方法

李 哲 李 菲 郭華靜2 高 杰 郝娟娟 劉鐵軍

1.神威藥業(yè)集團有限公司，河北 石家莊 051430；2.河北北方學院，河北 張家口 075000

精烏顆粒收載于部頒標準中藥成方制劑第十五冊，由黃精(制)、制何首烏、女貞子(制)、墨旱蓮4味飲片制成[1]，可補肝腎，益精血，壯筋骨，臨床應用于失眠多夢，耳鳴健忘，頭發(fā)脫落及須發(fā)早白等證[2]。精烏顆粒原質(zhì)量標準(部頒標準中藥成方制劑第十五冊WS3-B-3012-98)鑒別一以大黃素對照品進行薄層色譜考察，結(jié)果大黃素Rf值大，且展開劑含有毒性較大的試劑苯，苯對人體的危害巨大，有必要對展開劑進行改進；鑒別二為黃精藥材薄層鑒別，樣品展開后拖尾嚴重，影響結(jié)果判定。為完善精烏顆粒質(zhì)量標準，我們對何首烏、黃精的樣品處理方法及展開條件進行進行優(yōu)化，同時建立墨旱蓮、女貞子的薄層定性鑒別方法。

1 儀器與材料

1.1 儀器 CPA225D分析天平(賽多利斯)、JM-A5002電子天平(余姚市紀銘稱重校驗設備有限公司)、加熱套(北京科偉永興儀器有限公司)，電熱恒溫水浴鍋(北京科偉永興儀器有限公司)，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海申生科技有限公司)。

1.2 材料 何首烏(批號：120934-201410)、女貞子(批號：121041-201404)、黃精(制)(批號：121553-201202)、墨旱蓮(批號：120958-201708)、大黃素(批號：110756-201512)等對照藥材及對照品均為中國藥品生物制品檢定所提供。精烏顆粒(批號：1902131、1902132、1902133，神威藥業(yè)集團有限公司)。乙醇、甲醇、正丁醇、乙酸乙酯、正己烷、甲酸、石油醚(60～90 ℃)均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 何首烏的薄層鑒別

2.1.1 原標準存在問題 該方法展開后大黃素的Rf值太大，斑點在溶劑前沿，不易判定結(jié)果，結(jié)果見圖1。

2.1.2 何首烏鑒別方法優(yōu)化

2.1.2.1 供試品制備方法改進 由于制成的顆粒為無糖顆粒，樣品中不含蔗糖粉，將提取溶劑由乙酸乙酯改成乙醇，其他處理方法不變。

2.1.2.2 展開劑摸索 采用三氯甲烷-甲醇(7∶3)，展距為3.5 cm，取出晾干，再以三氯甲烷-甲醇(20∶1)重新展開7.5 cm[3]。此方法何首烏的分離度低，重復性低，操作繁瑣，需要的展開條件嚴格。其次采用石油醚(30～60 ℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)為展開劑[4]。結(jié)果何首烏的斑點分離度低，雖然進行了分層，但是展開過程中仍然有分層現(xiàn)象；最后以正已烷-乙酸乙酯-甲酸(3∶1∶0.1)展開。結(jié)果何首烏分離度好，斑點清晰，比移值合適。

2.1.3 改進前后的質(zhì)量標準對比 改進后質(zhì)量標準在與對照藥材和對照品相對應的位置，供試品顯相同顏色的熒光斑點，且陰性對照在相對應位置無干擾。結(jié)果見表1、圖2。

表1 改進前后何首烏鑒別方法對比

2.2 黃精的薄層鑒別

2.2.1 原標準中存在問題 由于樣品中輔料蔗糖影響黃精斑點的分離度，致使斑點呈條帶狀，無法判定結(jié)果，結(jié)果見圖3。

2.2.2 黃精鑒別方法優(yōu)化

2.2.2.1 供試品制備方法改進 由于樣品中多糖等成分的影響，致使斑點分離度低，因此供試品處理方法增加精制過程，首先將提取后的濾液用水飽和的正丁醇40 mL分兩次洗滌，最終正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇1 mL溶解，結(jié)果黃精斑點顯色清晰。

2.2.2.2 展開劑摸索 首先嘗試石油醚(60～90 ℃)-乙酸乙酯-甲酸-甲醇(5∶4∶1∶1)，結(jié)果黃精樣品斑點顯色不清晰，樣品的分離度低。且展開劑出現(xiàn)分層現(xiàn)象，導致斑點錯亂，將展開劑進行分層之后重新展開，薄層板出現(xiàn)分層現(xiàn)象，所顯示的斑點依然不明顯。其次考察展開劑石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-甲醇(5∶4∶1)，結(jié)果顯色后黃精斑點出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象；將該展開劑中甲醇換成甲酸，其他條件不變，結(jié)果黃精的Rf值太大，且出現(xiàn)分層現(xiàn)象。將石油醚(60～90 ℃)、乙酸乙酯、甲酸的比例調(diào)整為5∶2∶0.1[5]，結(jié)果樣品分離度好，斑點清晰，但黃精Rf值太??；最終將三者的比例調(diào)整為5∶3∶0.1，結(jié)果黃精的斑點清晰，分離度高。

2.2.3 改進前后質(zhì)量標準對比 改進后質(zhì)量標準在與對照藥材相對應的位置，供試品顯相同顏色的斑點，且陰性對照在相對應位置無干擾。結(jié)果見表2、圖4。

表2 改進前后黃精鑒別方法對比

2.3 墨旱蓮、女貞子鑒別方法摸索

2.3.1 供試品制備方法建立 墨旱蓮、女貞子中有效成分為脂溶性，因此樣品制備過程中先將精烏顆粒加水溶解，過濾后將濾液用乙酸乙酯萃取，揮干溶劑，殘渣分別用無水乙醇-三氯甲烷(3∶2)、甲醇1 mL溶解，結(jié)果甲醇溶解效果較好。

2.3.2 墨旱蓮鑒別展開條件摸索 以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(9∶2∶2∶0.5)的上層溶液展開，結(jié)果墨旱蓮的分離度低，而且出現(xiàn)分層現(xiàn)象。在做何首烏鑒別時，發(fā)現(xiàn)墨旱蓮用何首烏的展開劑的分離度較好，所以將墨旱蓮的展開劑改為何首烏的展開劑。結(jié)果墨旱蓮斑點清晰，分離度好，Rf值合適。

2.3.3 女貞子鑒別展開條件摸索 根據(jù)查閱文獻，考察以環(huán)己烷-丙酮-乙酸乙酯(5∶2∶1)[6]為展開劑，10%硫酸乙醇溶液為顯色劑，結(jié)果顯色依然不清晰，且斑點分離度低；將展開劑換成三氯甲烷-甲醇-甲酸(40∶1∶1)[7-8]，顯色劑不變，結(jié)果斑點顯色清晰，但比移值太小；以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-甲酸(6∶4∶0.1)為展開劑，顯色劑不變，結(jié)果斑點明顯，分離度高。由于在進行黃精的鑒別實驗時，發(fā)現(xiàn)女貞子的顯色更明顯，所以最終顯色劑為5%香草醛的硫酸溶液。

2.3.4 新建墨旱蓮、女貞子薄層鑒別方法 由表3、圖5、圖6可知，墨旱蓮、女貞子質(zhì)量標準在與對照藥材在相對應的位置上，供試品顯相同顏色的熒光斑點和斑點，且陰性樣品無干擾。

表3 新建薄層鑒別方法

3 討論

3.1 精烏顆粒何首烏的薄層鑒別方法研究 精烏顆粒原標準中大黃素鑒別方法展開劑為苯-乙醇，毒性較大，對人體的危害巨大；同時大黃素對照品的Rf值太大，斑點在溶劑前沿，不易判定結(jié)果，因此本實驗對供試品溶液處理方法及展開劑進行優(yōu)化意義重大，改進后的方法以何首烏對照藥材、大黃素對照品同時作為對照，控制指標更全面。樣品的點樣量由10 μL減少到1～3 μL，操作更簡便快捷；最終確定展開劑為正已烷-乙酸乙酯-甲酸(3∶1∶0.1)，樣品斑點清晰，分離度高，陰性樣品無干擾，該方法可用于何首烏的鑒別。

3.2 精烏顆粒黃精的薄層鑒別方法研究 精烏顆粒原標準中黃精鑒別樣品處理方法簡單，由于輔料蔗糖的影響，展開后斑點拖尾嚴重，甚至呈條帶狀，首先對樣品處理方法進行優(yōu)化，增加正丁醇萃取，由圖3、圖4對比結(jié)果可見，方法改進后薄層色譜中各斑點無拖尾現(xiàn)象。其次對展開劑進行摸索，分別考察石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-甲酸不同比例，最終確定比例為5∶3∶0.1時，黃精斑點清晰，分離度高，且陰性對照無干擾，該方法可用于黃精的鑒別。

3.3 精烏顆粒墨旱蓮、女貞子的薄層鑒別方法研究 墨旱蓮、女貞子的鑒別采用同一供試品溶液，簡化了操作流程，節(jié)約檢驗成本。起初二者采用同一展開劑，結(jié)果與墨旱蓮對照藥材相對應斑點的比移值太大，而與女貞子對照藥材相對應斑點的比移值太小，二者不能兼顧，經(jīng)過摸索確定墨旱蓮的展開劑同何首烏鑒別方法。女貞子的展開劑為石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-甲酸(6∶4∶0.1)。

3.4 薄層鑒別方法耐用性研究 本實驗所建立的精烏顆粒4味飲片薄層鑒別方法均經(jīng)過方法學驗證，分別對環(huán)境溫濕度及薄層板耐用性進行考察，環(huán)境溫濕度包括低溫(2 ℃)、常溫(25 ℃)、高溫高濕(溫度40 ℃，濕度75%)三種條件，薄層板耐用性分別考察煙臺江友硅膠開發(fā)有限公司預制G板、青島海洋化工廠分廠預制G板以及青島海洋化工廠硅膠G自制板三種載體，均得到滿意的分離效果，說明新建的薄層鑒別方法耐用性良好。

綜上，改進后精烏顆粒質(zhì)量標準中何首烏，黃精的薄層鑒別方法以及新建的女貞子、墨旱蓮的薄層鑒別方法操作簡便，重現(xiàn)性好，專屬性高，可更全面的評價精烏顆粒的質(zhì)量。