• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    馬鈴薯瘡痂病鏈霉新變種的分離與生物學(xué)特性分析

    2019-11-01 01:21:48馬建榮余永紅黎敬鴻陳力暢何海林
    安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 2019年18期
    關(guān)鍵詞:瘡痂致病性霉菌

    馬建榮 余永紅 黎敬鴻 陳力暢 何海林

    摘要[目的]研究土壤中分離到C9菌株的種類(lèi)歸屬和生物學(xué)特性。[方法]擴(kuò)增C9菌株的16S rDNA序列,并進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育建樹(shù)。檢測(cè)C9菌株對(duì)不同碳源、氮源的利用能力,以及對(duì)不同抗生素、滲透壓的敏感性。利用GC-MS法測(cè)定C9菌株的脂肪酸組分,并擴(kuò)增其脂肪酸合成關(guān)鍵酶——3-酮脂酰ACP合成酶III(FabH)編碼基因,并進(jìn)行序列同源性分析。[結(jié)果]基于C9菌株的16S rDNA序列分析,結(jié)合分析其菌落形態(tài)特征,初步判斷C9菌株為馬鈴薯瘡痂病鏈霉菌(Streptomyces scabies)。但C9菌株的生理生化特征與已報(bào)道的S.scabies菌株有明顯差異,進(jìn)一步盆栽試驗(yàn)結(jié)果顯示C9菌株不能引起馬鈴薯瘡痂病,其染色體上也沒(méi)有擴(kuò)增獲得致病島(PAI)區(qū)域中致病性相關(guān)的基因,說(shuō)明該菌株不具有馬鈴薯瘡痂病致病性,為Streptomyces scabies的一個(gè)新變種。C9菌株的脂肪酸組成測(cè)定結(jié)果顯示其主要合成棕櫚油酸(C?16∶1)和棕櫚酸(C?16∶0),其不飽和脂肪酸總含量達(dá)36.2%,也符合馬鈴薯瘡痂病非致病株的特征。C9菌株基因組中fabH基因序列和編碼的氨基酸序列與Streptomyces scabies都具有極高的一致性。[結(jié)論]C9菌株為馬鈴薯瘡痂病鏈霉菌新變種。C9菌株為進(jìn)一步深入研究馬鈴薯瘡痂病鏈霉菌的基礎(chǔ)代謝機(jī)制或探索其致病機(jī)理提供了良好的材料。

    關(guān)鍵詞馬鈴薯瘡痂病鏈霉菌;?16S rDNA;?脂肪酸組成

    中圖分類(lèi)號(hào)S?182;Q?93文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A

    文章編號(hào)0517-6611(2019)18-0139-04

    doi:10.3969/j.issn.0517-6611.2019.18.037

    開(kāi)放科學(xué)(資源服務(wù))標(biāo)識(shí)碼(OSID):

    Isolation and Biological Characteristics Analysis of a New Variety of Streptomyces Potato Scab

    MA Jian-rong,YU Yong-hong,LI Jing-hong et al (Guangdong Food and Vocational College,Guangzhou,Guangdong 510520)

    Abstract[Objective]To study the biological characteristics and classify the C9 strain isolated from soil.[Method]The 16S rDNA sequence of the C9 strain was amplified and phylogenetical tree was established.The ability of C9 strain to utilize different carbon sources and nitrogen sources,as well as sensitivity to osmotic pressure and different antibiotics,was examined.The fatty acid composition of C9 strain was determined by GC-MS,and the gene encoding the key enzyme for fatty acid synthesis,3-ketoacyl-ACP synthase III (FabH),was amplified and sequence homology analysis was performed.[Results]The C9 strain was classified as Streptomyces scabies based on the 16S rDNA sequence coupled with the colony morphology.However,the physiological and biochemical characteristics of the C9 strain were significantly different from those of the reported S.scabies strains.Moreover,the C9 strain showed no pathogenicity to cause potato scab by the pot tests,and the genes related to pathogenicity in PAI region were not amplified on its chromosome.All the results indicated that C9 strain was a new strain of Streptomyces scabies.The fatty acids composition of the C9 strain was analyzed further.The results showed that the strain mainly synthesized palmitoleic acid (C?16∶1) and palmitic acid (C?16∶0).The total content of unsaturated fatty acid reached 36.2%,which also accorded with the characteristics of non-pathogenic strain of potato scab.Then the key gene of fatty acid synthesis,coding 3-ketoacyl ACP synthase III (FabH),was amplified and analyzed from the C9 strain genome.The results showed that the fabH gene sequence and the coded amino acid sequence were highly consistent with those of Streptomyces scabies.[Conclusion]The C9 strain was a new strain of Streptomyces scabies.The C9 strain provided a good material for further study on the basic metabolic mechanism of Streptomyces scab and its pathogenic mechanism.

    Key wordsStreptomyces scabies;16S rDNA;Fatty acids composition

    馬鈴薯是世界上除水稻、小麥和玉米外的第四大糧食作物,在蔬菜、飼料及工業(yè)原料領(lǐng)域均具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值[1]。但隨著種植面積擴(kuò)大,馬鈴薯相關(guān)的微生物病害逐漸凸顯,其中馬鈴薯瘡痂病(potato common scab)是一類(lèi)重要的土傳病害,嚴(yán)重影響馬鈴薯塊莖的外觀品質(zhì),造成嚴(yán)重的損失[2]。

    馬鈴薯瘡痂病病原菌為鏈霉菌屬(Strptomyces spp.),國(guó)內(nèi)外報(bào)道的主要有S.scabies、S.acidiscabies和S.turgidiscabies,3種菌株生理生化特征差異明顯[2-5]。隨著研究深入,越來(lái)越多的鏈霉菌病原菌被發(fā)現(xiàn),表明馬鈴薯瘡痂病菌種類(lèi)多,分布和組成復(fù)雜。對(duì)我國(guó)不同地區(qū)的瘡痂病原菌分析表明,在分離到的病原菌中除常見(jiàn)的致病菌株外,還發(fā)現(xiàn)S.bobili、S.galilaeus、S.enissocaesilis等新的馬鈴薯瘡痂病菌[6]。黑龍江省不同地區(qū)馬鈴薯瘡痂病病原菌有3種,其中S.scabies為主要病原菌,而且不同病原菌的致病力有明顯差異[7]。因此我國(guó)瘡痂病病原菌種類(lèi)及組成具有明顯的多樣性,不同地區(qū)或同一地區(qū)不同季節(jié)流行不同的病原鏈霉菌,明確特定地區(qū)的病原菌組成對(duì)了解及防治馬鈴薯瘡痂病十分必要,但目前未見(jiàn)對(duì)廣東地區(qū)該病原鏈霉菌的研究[5]。筆者通過(guò)對(duì)土壤中分離到的鏈霉菌進(jìn)行分析,鑒定其中的C9菌株為馬鈴薯瘡痂病鏈霉菌新變種,并分析了該菌株的生理生化?特性。

    1材料與方法

    1.1病原菌的分離

    從廣東省廣州周邊馬鈴薯種植地塊采集土壤,取10 g樣品于90 mL無(wú)菌生理鹽水中,充分振蕩。靜置后去上清液進(jìn)行10倍系列稀釋?zhuān)x10-2、10-2、10-4 3個(gè)稀釋度,分別取0.1 mL涂布于改良高氏1號(hào)平板,30 ℃倒置培養(yǎng)5 d,挑選菌落形態(tài)不同的菌株劃線純化,重復(fù)3次。

    1.2致病性測(cè)定

    選擇健康馬鈴薯種薯經(jīng)75%乙醇溶液浸泡10 min進(jìn)行表面消毒,無(wú)菌操作切取含有芽眼的薯塊,播入裝有滅菌土的花盆中,每盆3塊。栽種60 d后,用待測(cè)菌株孢子稀釋液接種至花盆土壤,置于室溫中繼續(xù)培養(yǎng)30 d后檢測(cè)新生薯塊的發(fā)病情況[8]。

    1.3生理生化特性測(cè)定

    參照《伯杰細(xì)菌鑒定手冊(cè)》[9]和《鏈霉菌鑒定手冊(cè)》[10]中測(cè)定方法,對(duì)該菌株進(jìn)行碳源利用、氮源利用、纖維素利用、淀粉利用和蛋白酶產(chǎn)生能力等分析,并進(jìn)一步利用Biolog微孔板對(duì)多種生理生化特性及敏感性等進(jìn)行測(cè)定。

    1.416S rDNA序列分析與致病相關(guān)基因分析

    病原菌總DNA采用細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒(北京鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)有限公司)的方法提取。PCR擴(kuò)增用引物見(jiàn)表1,擴(kuò)增條件:① 98 ℃預(yù)變性2 min;② 98 ℃變性20 s;③ 56 ℃退火20 s;?④ 72 ℃延伸20 s;⑤ 重復(fù)②~④35個(gè)循環(huán)。將PCR產(chǎn)物用1%瓊脂糖電泳檢測(cè),16S rDNA擴(kuò)增片段送上海生工公司測(cè)序,將得到的序列進(jìn)行Blast比對(duì),并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。

    1.5細(xì)胞脂肪酸組成分析

    在合成V號(hào)培養(yǎng)基中,培養(yǎng)馬鈴薯瘡痂病鏈霉菌,離心收集菌體,按照文獻(xiàn)[11-12]的方法,提取細(xì)菌的脂肪酸,并轉(zhuǎn)化為脂肪酸甲酯(樣品3個(gè)重復(fù))。樣品送華南農(nóng)業(yè)大學(xué)測(cè)試中心進(jìn)行脂肪酸組成GC-MS?分析。

    2結(jié)果與分析

    2.1C9菌株形態(tài)與16S rDNA序列分析

    從馬鈴薯栽種土壤中采樣,稀釋后涂布于高氏1號(hào)培養(yǎng)基,培養(yǎng)后獲得多種單菌落。其中C9菌株菌絲為絲狀,革蘭氏染色陽(yáng)性(圖1 a),培養(yǎng)后期生成灰色孢子,孢子鏈成螺旋狀(圖1 b)。

    為確定C9菌株種屬歸類(lèi),利用細(xì)菌16S rDNA通用引物,以C9菌株的總DNA為模板,擴(kuò)增獲得約1.5 kb的16S rDNA序列(圖2 a),連接T-載體后獲得質(zhì)粒pYYH-1,并送樣測(cè)序獲得16S rDNA全序列。進(jìn)一步將測(cè)序結(jié)果在NCBI中GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)Blast分析,結(jié)果顯示該序列與馬鈴薯瘡痂病鏈霉菌同源性最高。選取與比對(duì)序列相似性大于95%的菌株和已經(jīng)報(bào)道的馬鈴薯瘡痂病鏈霉菌菌株16S rDNA序列,利用MEGA 7.0軟件進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化分析(NJ法)(圖2 b)。結(jié)果顯示C9菌株與馬鈴薯瘡痂病鏈霉菌(Streptomyce scabiei)標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC49173的親緣關(guān)系最近,相似性為?99.7%。這表明C9菌株為馬鈴薯瘡痂病鏈霉菌(Streptomyce scabiei)菌株。

    2.2C9菌株生理生化特性分析

    進(jìn)一步分析C9菌株的生理生化特征,結(jié)果顯示,C9菌株能以葡萄糖、鼠李糖、半乳糖、甘露糖、棉子糖、肌酐、肌醇等作為唯一碳源生長(zhǎng),但不能利用果糖、阿拉伯糖、蔗糖、甘油等為單一碳源生長(zhǎng)。C9菌株能以脯氨酸、甲硫氨酸、甘氨酸等為唯一氮源生長(zhǎng),但不能以組氨酸、天冬氨酸、谷氨酸等為唯一氮源。C9菌株對(duì)青霉素、四環(huán)素、林肯霉素、萬(wàn)古霉素等抗生素以及結(jié)晶紫、四唑紫、鹽酸胍等化合物敏感,同時(shí)該菌株在含有10%NaCl培養(yǎng)基中不能生長(zhǎng),pH<5.5不能生長(zhǎng)。C9菌株產(chǎn)生黑色素和H2S氣體,不產(chǎn)生可溶性色素,產(chǎn)生淀粉酶和纖維素酶,但不產(chǎn)生蛋白酶。綜合分析以上生理生化特性,顯示C9菌株與已報(bào)道的典型馬鈴薯瘡痂病鏈霉菌有明顯差異,說(shuō)明該菌株為新的菌株[2,13-14]。

    2.3C9菌株的致病性分析

    為分析C9菌株是否對(duì)馬鈴薯具有致病性,采用致病性盆栽試驗(yàn),在馬鈴薯種植30 d后觀察新生薯塊發(fā)病情況。結(jié)果顯示,C9菌株不能對(duì)盆栽馬鈴薯致病,未出現(xiàn)瘡痂癥狀(圖3)。

    馬鈴薯瘡痂病病原菌多種多樣,寄主范圍也較廣,但致病因子均存在于染色體上的致病島(PAI)區(qū)域。當(dāng)前報(bào)道的PAI區(qū)域基因主要包括txtA基因、txtB基因、txtC基因、壞死誘導(dǎo)蛋白nec1基因和致病因子tomA基因等[15-17]。為研究C9菌株不能使盆栽馬鈴薯出現(xiàn)瘡痂癥狀的原因,分別擴(kuò)增了該菌株基因組上這幾個(gè)致病相關(guān)的基因,但結(jié)果均未擴(kuò)增到目的基因,說(shuō)明C9菌株可能沒(méi)有相關(guān)的致病因子或致病島PAI,這極可能是該菌株不能引物馬鈴薯致病的重要?原因。

    2.4C9菌株的脂肪酸組成分析

    細(xì)菌采用II型脂肪酸合成機(jī)制合成脂肪酸,每步反應(yīng)都由特定的酶催化完成。而脂肪酸是細(xì)菌細(xì)胞膜的重要組成物質(zhì),具有靈敏度高、成分高度保守和含量穩(wěn)定等特點(diǎn)[18]。目前在細(xì)菌中已發(fā)現(xiàn)300多種脂肪酸,其碳鏈長(zhǎng)度、雙鍵位置和功能團(tuán)組合的不同使其成為有效的分類(lèi)標(biāo)記,而脂肪酸組成和含量與微生物的遺傳變異、耐藥性、致病性等有極為密切的關(guān)系[19]。研究表明,鏈霉菌的脂肪酸組成可以作為馬鈴薯瘡痂病鏈霉菌是否為致病菌的重要評(píng)價(jià)指標(biāo)[20]。

    為此,測(cè)定了C9菌株的脂肪酸組成。結(jié)果顯示,C9菌株的脂肪酸組成較為復(fù)雜,檢測(cè)到約20種不同結(jié)構(gòu)的脂肪酸,包括直鏈飽和脂肪酸、支鏈飽和脂肪酸、直鏈不飽和脂肪酸和環(huán)丙烷脂肪酸等,檢測(cè)到的脂肪酸鏈長(zhǎng)包括12碳到18碳。不同脂肪酸組分含量不同,其中含量最高的棕櫚油酸(C?16:1)占總脂肪酸組分的28.4%,其次是棕櫚酸(C?16:0)占?18.0%。細(xì)菌的支鏈脂肪酸和不飽和脂肪酸在調(diào)節(jié)膜的流動(dòng)性方面發(fā)揮重要作用,C9菌株產(chǎn)生支鏈脂肪酸包括12-甲基十三烷酸(isoC?14:0)、13-甲基十四烷酸(isoC?15:0)和12-甲基十四烷酸(anteisoC?15:0)等,支鏈脂肪酸總含量占比33.6%。不飽和脂肪酸包括棕櫚油酸、順-11-異油酸等,總含量占比36.2%(圖4)。

    2.5C9菌株的3-酮脂酰ACP合成酶III的同源性分?析

    脂肪酸合成是細(xì)菌的基礎(chǔ)代謝,脂肪酸合成相關(guān)的基因簇往往具有一定的保守性。3-酮脂酰ACP合成酶III(FabH)催化脂肪酸合成的起始反應(yīng),其編碼基因是細(xì)菌生長(zhǎng)的必需基因[21]。為進(jìn)一步研究C9菌株的種屬歸類(lèi),以表1中的fabH up和fabH down引物,以C9菌株的總DNA為模板,擴(kuò)增獲得該菌株的fabH基因。測(cè)序結(jié)果顯示,C9菌株的fabH基因與馬鈴薯瘡痂病鏈霉菌(Streptomyces scabies)的fabH基因序列一致性為98.8%,其編碼蛋白的氨基酸序列一致性達(dá)99.7%。這再次證明該研究分離獲得的C9菌株為馬鈴薯瘡痂病鏈霉菌。

    3結(jié)論與討論

    該研究對(duì)從土壤中分離到的一株鏈霉菌C9菌株進(jìn)行了分析。首先分析了該菌株的16S rDNA序列,結(jié)果顯示C9菌株與馬鈴薯瘡痂病鏈霉菌(Streptomyces scabiei)的16S rDNA序列高度同源,結(jié)合菌落形態(tài)特征,初步確定該菌株為馬鈴薯瘡痂病鏈霉菌。

    但進(jìn)一步生理生化分析顯示C9菌株與文獻(xiàn)報(bào)道的馬鈴薯瘡痂病鏈霉菌多種菌株都不完全一致[13-14],提示該菌株可能是一個(gè)新菌株。采用盆栽法檢測(cè)C9菌株對(duì)馬鈴薯的致病性,結(jié)果顯示該菌株沒(méi)有致病性,致病性相關(guān)的PAI基因檢測(cè)結(jié)果也顯示陰性,進(jìn)一步說(shuō)明該菌株不同于文獻(xiàn)報(bào)道的馬鈴薯瘡痂病的致病菌株。

    由于脂肪酸組成可以作為微生物分類(lèi)鑒定的重要指標(biāo),測(cè)定了C9菌株的脂肪酸組成。結(jié)果顯示,與報(bào)道的鏈霉菌相比,該菌株的支鏈脂肪酸相對(duì)較低,不飽和脂肪酸含量相對(duì)較高,其特點(diǎn)符合Kinkel等[20]報(bào)道的馬鈴薯瘡痂病非致病菌。該結(jié)果與盆栽致病性檢測(cè)結(jié)果相吻合,也表明C9菌株為一個(gè)非致病性菌株。基于細(xì)菌脂肪酸合成途徑的保守性,進(jìn)一步擴(kuò)展了C9菌株的脂肪酸合成關(guān)鍵基因——3-酮脂酰ACP合成酶III(FabH),結(jié)果顯示該基因序列與馬鈴薯瘡痂病鏈霉菌(Streptomyces scabiei)的fabH序列具有高度一致性,而兩者編碼的氨基酸序列也幾乎一致,再次證明C9菌株為馬鈴薯瘡痂病鏈霉菌,但該菌株沒(méi)有致病性,為非致病性變種。該研究發(fā)現(xiàn)的C9菌株可作為研究材料,用于馬鈴薯瘡痂病鏈霉菌的基礎(chǔ)代謝研究,同時(shí)還可通過(guò)比較致病株和非致病株的基因組信息研究,探索馬鈴薯瘡痂病鏈霉菌致病的分子機(jī)制。

    參考文獻(xiàn)

    [1]黃鳳玲,張琳,李先德,等.中國(guó)馬鈴薯產(chǎn)業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀及對(duì)策[J].農(nóng)業(yè)展望,2017,13(1):25-31.

    [2]趙偉全,楊文香,李亞寧,等.中國(guó)馬鈴薯瘡痂病菌的鑒定[J].中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué),2006,39(2):313-318.

    [3]張萌,劉伯,于秀梅,等.中國(guó)馬鈴薯瘡痂病菌生物學(xué)特性分析[J].中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué),2010,43(12):2603-2610.

    [4]信凈凈,于秀梅,趙偉全,等.馬鈴薯瘡痂病新致病種Streptomyces galilaeus致病毒素組分分析[J].中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué),2010,43(18):3742-3749.

    [5]張萌,趙偉全,于秀梅,等.中國(guó)馬鈴薯瘡痂病病原菌16S rDNA的遺傳多樣性分析[J].中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué),2009,42(2):499-504.

    [6]楊夢(mèng)平,王瑞仙,杜魏甫,等.云南省馬鈴薯瘡痂病致病鏈霉菌種類(lèi)組成研究[J].植物病理學(xué)報(bào),2018,48(4):445-454.

    [7]邢瑩瑩,呂典秋,魏琪,等.黑龍江省部分地區(qū)馬鈴薯瘡痂病菌種類(lèi)及致病性鑒定[J].植物保護(hù),2016,42(1):26-32,50.

    [8]張海穎,郭鳳柳,許華民,等.河北省張北地區(qū)馬鈴薯瘡痂病的病菌鑒定[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2014,42(10):131-134.

    [9]中國(guó)科學(xué)院微生物所放線菌分類(lèi)組.鏈霉菌鑒定手冊(cè)[M]. 北京:科學(xué)出版社,1978.

    [10]阮繼生, 黃英. 中國(guó)科學(xué)院微生物所放線菌分類(lèi)組編. 放線菌快速鑒定與系統(tǒng)分類(lèi)[M].北京:科學(xué)出版社,2011.

    [11]YU Y H,HU Z,DONG H J,et al.Xanthomonas campestris FabH is required for branched-chain fatty acid and DSF-family quorum sensing signal biosynthesis[J].Sci Rep,2016,6:1-15.

    [12]ZHU L,BI H K,MA J C,et al.The two functional enoyl-acyl carrier protein reductases of Enterococcus faecalis do not mediate triclosan resistance[J].mBio,2013,4(5):1-10.

    [13]張建平,劉佳,哈斯,等.馬鈴薯瘡痂病菌(Streptomyces spp.)的鑒定[J].中國(guó)馬鈴薯,2018,32(5):308-314.

    [14]王丹,姚曉東,李新鳳,等.山西晉城馬鈴薯瘡痂病病原菌鑒定[J].山西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2015,35(5):495-498.

    [15]聶峰杰,陳虞超,鞏檑,等.馬鈴薯瘡痂病致病鏈霉菌分類(lèi)及其致病機(jī)理研究進(jìn)展[J].分子植物育種,2018,16(4):1313-1319.

    [16]李爽,楊美軍,張?jiān)?,?馬鈴薯瘡痂病研究進(jìn)展[J].中國(guó)馬鈴薯,2018,32(4):240-248.

    [17]趙偉全,劉大群,楊文香,等.馬鈴薯瘡痂病菌致病相關(guān)基因的克隆及表達(dá)[J].植物病理學(xué)報(bào),2007,37(4):442-445.

    [18]余永紅,馬建榮,王海洪.細(xì)菌脂肪酸合成多樣性的研究進(jìn)展[J].微生物學(xué)雜志,2016,36(4):76-83.

    [19]劉國(guó)紅,劉波,唐建陽(yáng),等.脂肪酸提取方法對(duì)芽胞桿菌種類(lèi)脂肪酸測(cè)定結(jié)果的影響[J].福建農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2015,30(1):60-64.

    [20]KINKEL L L,BOWERS J H,SHIMIZU K,et al.Quantitative relationships among thaxtomin A production,potato scab severity,and fatty acid composition in Streptomyces[J].Canadian journal of microbiology,1998,44(8):768-776.

    [21]余永紅,馬建榮,苗馨予,等.不同細(xì)菌來(lái)源的3-酮脂酰ACP合成酶Ⅲ生物學(xué)特性分析[J].生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展,2016(10):1004-1012.

    猜你喜歡
    瘡痂致病性霉菌
    揭示水霉菌繁殖和侵染過(guò)程
    不同藥劑配方對(duì)馬鈴薯瘡痂病的影響
    我國(guó)學(xué)者揭示馬鈴薯瘡痂病發(fā)病新機(jī)制
    蔬菜(2019年4期)2019-01-04 21:25:45
    一例高致病性豬藍(lán)耳病的診治
    高致病性藍(lán)耳病的診斷和治療
    霉菌的新朋友—地衣
    地衣和霉菌
    美國(guó)欲選育抗瘡痂病的核桃新品種
    青霉菌柚苷酶的分離純化及酶學(xué)性質(zhì)
    高致病性豬藍(lán)耳病的防控
    日韩欧美国产一区二区入口| 色精品久久人妻99蜜桃| 亚洲中文日韩欧美视频| 国产伦在线观看视频一区| 麻豆一二三区av精品| 在线免费观看不下载黄p国产 | 亚洲无线观看免费| 国产伦人伦偷精品视频| 日韩欧美三级三区| 99在线人妻在线中文字幕| 久久精品综合一区二区三区| 久久久国产精品麻豆| 免费看美女性在线毛片视频| 真人做人爱边吃奶动态| 国产一区在线观看成人免费| 欧美午夜高清在线| 免费高清视频大片| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 国产私拍福利视频在线观看| 淫妇啪啪啪对白视频| 欧美黄色淫秽网站| 日本黄色片子视频| 久久久久九九精品影院| 亚洲国产精品成人综合色| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 欧美大码av| 亚洲男人的天堂狠狠| 很黄的视频免费| 一本久久中文字幕| 可以在线观看的亚洲视频| 性欧美人与动物交配| 国产成人啪精品午夜网站| 欧美中文日本在线观看视频| 三级毛片av免费| 又爽又黄无遮挡网站| 内地一区二区视频在线| 久久国产精品人妻蜜桃| 真人做人爱边吃奶动态| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 午夜免费观看网址| 国产亚洲av嫩草精品影院| 最近最新中文字幕大全电影3| 免费av不卡在线播放| 亚洲欧美日韩无卡精品| 亚洲性夜色夜夜综合| 一进一出抽搐动态| 成人精品一区二区免费| 亚洲成av人片在线播放无| 成年版毛片免费区| 此物有八面人人有两片| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 午夜激情欧美在线| 亚洲成av人片在线播放无| 国产精品影院久久| 日日干狠狠操夜夜爽| 成年女人毛片免费观看观看9| 国产成+人综合+亚洲专区| 免费看a级黄色片| 极品教师在线免费播放| 欧美中文综合在线视频| 少妇高潮的动态图| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 欧美性猛交黑人性爽| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 亚洲成人久久性| 久久精品影院6| 1024手机看黄色片| netflix在线观看网站| 欧美又色又爽又黄视频| 精品免费久久久久久久清纯| 欧美国产日韩亚洲一区| 日本黄色视频三级网站网址| 国产亚洲欧美在线一区二区| 最新在线观看一区二区三区| 亚洲欧美日韩东京热| 亚洲精品日韩av片在线观看 | 国产成人欧美在线观看| 成年版毛片免费区| 岛国视频午夜一区免费看| 亚洲av免费高清在线观看| 天堂网av新在线| 国产极品精品免费视频能看的| 男女床上黄色一级片免费看| 麻豆成人午夜福利视频| 欧美乱色亚洲激情| 搡老岳熟女国产| 99国产精品一区二区蜜桃av| 黑人欧美特级aaaaaa片| 欧美+亚洲+日韩+国产| 中文字幕熟女人妻在线| 色综合欧美亚洲国产小说| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 美女免费视频网站| 国产成人影院久久av| 黑人欧美特级aaaaaa片| 精品人妻偷拍中文字幕| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 最新美女视频免费是黄的| 成年女人看的毛片在线观看| 欧美性猛交黑人性爽| 色视频www国产| 欧美乱色亚洲激情| 黄色女人牲交| 在线观看免费午夜福利视频| 久久久精品大字幕| 在线a可以看的网站| 久久亚洲精品不卡| 欧美一区二区亚洲| 国产97色在线日韩免费| 欧美最新免费一区二区三区 | 国产精品av视频在线免费观看| 欧美在线一区亚洲| 日韩大尺度精品在线看网址| 人人妻人人澡欧美一区二区| 乱人视频在线观看| av女优亚洲男人天堂| 啦啦啦韩国在线观看视频| 亚洲精品亚洲一区二区| 嫩草影院入口| 免费一级毛片在线播放高清视频| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 中亚洲国语对白在线视频| 国产综合懂色| 日本与韩国留学比较| 日日干狠狠操夜夜爽| www.熟女人妻精品国产| 波多野结衣高清无吗| 偷拍熟女少妇极品色| 很黄的视频免费| 欧美精品啪啪一区二区三区| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 露出奶头的视频| 一级毛片高清免费大全| 欧美高清成人免费视频www| 国产毛片a区久久久久| 国产三级中文精品| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 偷拍熟女少妇极品色| 国产亚洲av嫩草精品影院| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 最近视频中文字幕2019在线8| 欧美成人一区二区免费高清观看| 亚洲国产色片| 久久人妻av系列| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 欧美日韩乱码在线| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 国产真人三级小视频在线观看| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 国产成人系列免费观看| 久久6这里有精品| 亚洲五月婷婷丁香| 老司机福利观看| 亚洲最大成人中文| 色在线成人网| 欧美一区二区国产精品久久精品| 精品欧美国产一区二区三| 久久久久精品国产欧美久久久| 成人国产综合亚洲| 欧美av亚洲av综合av国产av| 听说在线观看完整版免费高清| 最近在线观看免费完整版| 一本精品99久久精品77| 在线观看免费视频日本深夜| eeuss影院久久| 国产高清有码在线观看视频| 国产久久久一区二区三区| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 男女之事视频高清在线观看| 国产成人av激情在线播放| 2021天堂中文幕一二区在线观| 亚洲国产精品成人综合色| 午夜精品一区二区三区免费看| 国产精品影院久久| 日本 欧美在线| 免费在线观看日本一区| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 最近在线观看免费完整版| 淫妇啪啪啪对白视频| 两个人的视频大全免费| 日韩av在线大香蕉| 中文字幕av在线有码专区| www日本黄色视频网| 午夜免费激情av| 看黄色毛片网站| 国产不卡一卡二| 亚洲av免费高清在线观看| 成人永久免费在线观看视频| 免费高清视频大片| 日本在线视频免费播放| 日韩成人在线观看一区二区三区| 99在线视频只有这里精品首页| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 国产欧美日韩精品亚洲av| 女人被狂操c到高潮| 亚洲成人免费电影在线观看| 69人妻影院| 淫妇啪啪啪对白视频| 亚洲欧美日韩无卡精品| 51国产日韩欧美| 激情在线观看视频在线高清| 久久久久久国产a免费观看| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 国产高清视频在线播放一区| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 人人妻人人看人人澡| 久久这里只有精品中国| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 国产精品98久久久久久宅男小说| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 校园春色视频在线观看| 欧美又色又爽又黄视频| 欧美色视频一区免费| 亚洲欧美日韩东京热| 国产国拍精品亚洲av在线观看 | 国产免费一级a男人的天堂| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 欧美高清成人免费视频www| 久久久久久久久大av| 免费在线观看成人毛片| 国产高潮美女av| 欧美在线一区亚洲| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 男女床上黄色一级片免费看| 在线播放国产精品三级| 精华霜和精华液先用哪个| 好男人在线观看高清免费视频| 老司机深夜福利视频在线观看| 十八禁网站免费在线| 亚洲精品456在线播放app | av福利片在线观看| 亚洲七黄色美女视频| 99热精品在线国产| 国产91精品成人一区二区三区| 欧美黄色淫秽网站| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 亚洲av免费高清在线观看| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 男女床上黄色一级片免费看| 国产av一区在线观看免费| 婷婷精品国产亚洲av在线| 美女cb高潮喷水在线观看| 国产精品乱码一区二三区的特点| 亚洲av电影在线进入| 欧美大码av| 美女大奶头视频| 麻豆成人午夜福利视频| 成年女人看的毛片在线观看| 欧美成人一区二区免费高清观看| 成人国产综合亚洲| 一夜夜www| 美女被艹到高潮喷水动态| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 亚洲成a人片在线一区二区| 身体一侧抽搐| 免费观看的影片在线观看| 天天一区二区日本电影三级| 乱人视频在线观看| 国产精品野战在线观看| 五月玫瑰六月丁香| 真实男女啪啪啪动态图| 久久99热这里只有精品18| 女人被狂操c到高潮| 久久久久久人人人人人| 欧美成人一区二区免费高清观看| 国产乱人伦免费视频| 舔av片在线| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 热99在线观看视频| 成熟少妇高潮喷水视频| 国产老妇女一区| 精品久久久久久久毛片微露脸| 国产在线精品亚洲第一网站| 国产高清videossex| 日本五十路高清| www.www免费av| 国产伦精品一区二区三区四那| 亚洲美女黄片视频| 欧美日韩乱码在线| 成年女人毛片免费观看观看9| 精品不卡国产一区二区三区| 中文字幕熟女人妻在线| 国产久久久一区二区三区| 一级黄色大片毛片| 日韩欧美三级三区| 成人无遮挡网站| 淫妇啪啪啪对白视频| 91久久精品电影网| 麻豆国产97在线/欧美| 色视频www国产| 国产伦一二天堂av在线观看| 在线观看一区二区三区| 久久久久国内视频| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 久久久久久国产a免费观看| www国产在线视频色| 麻豆久久精品国产亚洲av| 亚洲精品影视一区二区三区av| 无限看片的www在线观看| 久久久国产精品麻豆| 免费观看精品视频网站| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 日本一本二区三区精品| 88av欧美| 天堂网av新在线| 久久久久久久久大av| 亚洲人成网站在线播| 村上凉子中文字幕在线| 欧美色欧美亚洲另类二区| 成人av一区二区三区在线看| av女优亚洲男人天堂| 动漫黄色视频在线观看| 18美女黄网站色大片免费观看| 欧美+日韩+精品| 90打野战视频偷拍视频| 免费av观看视频| 天堂√8在线中文| 制服人妻中文乱码| 97超视频在线观看视频| 久久久久久久亚洲中文字幕 | 午夜福利视频1000在线观看| 在线天堂最新版资源| 欧美黑人巨大hd| 日韩国内少妇激情av| av在线天堂中文字幕| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 国产av不卡久久| 亚洲在线自拍视频| АⅤ资源中文在线天堂| 欧美最黄视频在线播放免费| 国产三级黄色录像| 国产伦精品一区二区三区四那| 一二三四社区在线视频社区8| 国产色爽女视频免费观看| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 午夜福利成人在线免费观看| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 精品午夜福利视频在线观看一区| av国产免费在线观看| 欧美中文日本在线观看视频| 五月伊人婷婷丁香| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 狂野欧美激情性xxxx| 男女午夜视频在线观看| 性欧美人与动物交配| 亚洲美女黄片视频| 91麻豆av在线| 男女下面进入的视频免费午夜| 狂野欧美激情性xxxx| 久久国产乱子伦精品免费另类| aaaaa片日本免费| 91字幕亚洲| 在线观看免费午夜福利视频| 神马国产精品三级电影在线观看| 在线看三级毛片| 国产三级中文精品| 国产中年淑女户外野战色| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 欧美黑人巨大hd| 久久久久免费精品人妻一区二区| 久久久久久久久久黄片| 成人亚洲精品av一区二区| 亚洲 国产 在线| 国模一区二区三区四区视频| 国产v大片淫在线免费观看| 一边摸一边抽搐一进一小说| 内地一区二区视频在线| 国产精品综合久久久久久久免费| 欧美黑人巨大hd| 99热精品在线国产| 婷婷精品国产亚洲av在线| 99久久无色码亚洲精品果冻| 亚洲人成网站在线播| 成年女人看的毛片在线观看| АⅤ资源中文在线天堂| 成人av在线播放网站| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 国产av在哪里看| 欧美日韩乱码在线| 色尼玛亚洲综合影院| 在线观看av片永久免费下载| 免费观看人在逋| 淫妇啪啪啪对白视频| av天堂在线播放| 成人无遮挡网站| 欧美乱码精品一区二区三区| 欧美午夜高清在线| 成年免费大片在线观看| 国产精品久久久久久久电影 | 蜜桃久久精品国产亚洲av| 午夜福利在线在线| 高清毛片免费观看视频网站| 国产亚洲精品av在线| 岛国视频午夜一区免费看| 桃色一区二区三区在线观看| 91久久精品电影网| 中亚洲国语对白在线视频| 国产精品99久久久久久久久| 少妇的逼好多水| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 综合色av麻豆| 久久久久久久亚洲中文字幕 | 婷婷丁香在线五月| 岛国在线观看网站| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 欧美中文日本在线观看视频| 老汉色∧v一级毛片| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| a级一级毛片免费在线观看| 国产三级在线视频| 午夜精品在线福利| 国产黄片美女视频| 听说在线观看完整版免费高清| 高潮久久久久久久久久久不卡| 婷婷六月久久综合丁香| 久久久久性生活片| av在线蜜桃| 国模一区二区三区四区视频| 日韩国内少妇激情av| 久久久久久大精品| 99热这里只有是精品50| 亚洲美女视频黄频| 成人一区二区视频在线观看| 亚洲精品乱码久久久v下载方式 | 精品欧美国产一区二区三| 国产黄片美女视频| 国产精品精品国产色婷婷| 欧美一级a爱片免费观看看| 国产成人系列免费观看| 亚洲人成电影免费在线| 九九在线视频观看精品| 51午夜福利影视在线观看| 中文字幕高清在线视频| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 成人18禁在线播放| 国产精品久久久人人做人人爽| 免费电影在线观看免费观看| 精品日产1卡2卡| 免费av毛片视频| 午夜久久久久精精品| 国产伦精品一区二区三区视频9 | www日本在线高清视频| 变态另类丝袜制服| 亚洲av成人精品一区久久| 国产一区二区激情短视频| 国产伦一二天堂av在线观看| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 国产三级在线视频| 亚洲第一电影网av| 天堂√8在线中文| 在线观看舔阴道视频| 日日干狠狠操夜夜爽| 九九在线视频观看精品| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 欧美av亚洲av综合av国产av| 亚洲天堂国产精品一区在线| 亚洲无线在线观看| 99久久九九国产精品国产免费| 男插女下体视频免费在线播放| 精品人妻偷拍中文字幕| 精品日产1卡2卡| 97超视频在线观看视频| 9191精品国产免费久久| 91久久精品国产一区二区成人 | 一个人观看的视频www高清免费观看| 小说图片视频综合网站| 国产成人aa在线观看| 欧美又色又爽又黄视频| 国产精品久久电影中文字幕| 深夜精品福利| 91九色精品人成在线观看| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 久久精品91蜜桃| 在线免费观看不下载黄p国产 | 嫩草影视91久久| 国产v大片淫在线免费观看| 国产精品一及| 亚洲成av人片在线播放无| 色播亚洲综合网| 三级国产精品欧美在线观看| 最新在线观看一区二区三区| 91麻豆精品激情在线观看国产| 丁香六月欧美| 最近最新中文字幕大全免费视频| 国产午夜福利久久久久久| 免费在线观看成人毛片| 99久久精品热视频| 国产av麻豆久久久久久久| 69人妻影院| 成年女人看的毛片在线观看| 夜夜夜夜夜久久久久| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 国产欧美日韩精品一区二区| 国产高清有码在线观看视频| 精品一区二区三区人妻视频| 狂野欧美激情性xxxx| 日韩欧美三级三区| 一本综合久久免费| 美女cb高潮喷水在线观看| av中文乱码字幕在线| 高清在线国产一区| a级毛片a级免费在线| 亚洲av五月六月丁香网| 久99久视频精品免费| 久久精品国产自在天天线| 亚洲av成人精品一区久久| 免费大片18禁| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 国产69精品久久久久777片| 91麻豆精品激情在线观看国产| 色综合婷婷激情| 最近最新免费中文字幕在线| 男人舔奶头视频| 色尼玛亚洲综合影院| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 色老头精品视频在线观看| 最近在线观看免费完整版| 搡老岳熟女国产| 国产色婷婷99| 亚洲av熟女| 1000部很黄的大片| 91麻豆av在线| 亚洲精品粉嫩美女一区| 成人国产综合亚洲| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 少妇丰满av| 国产精品野战在线观看| 国产精品 国内视频| 久久久久久九九精品二区国产| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 亚洲精品粉嫩美女一区| 精品福利观看| 很黄的视频免费| 午夜免费观看网址| 国产亚洲精品一区二区www| 桃红色精品国产亚洲av| 亚洲国产精品sss在线观看| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 亚洲av第一区精品v没综合| av在线蜜桃| 成熟少妇高潮喷水视频| 久久久久久国产a免费观看| 婷婷精品国产亚洲av| 午夜激情欧美在线| 久久久久久久久大av| 亚洲无线观看免费| 亚洲最大成人手机在线| www日本黄色视频网| 美女被艹到高潮喷水动态| 男女视频在线观看网站免费| 久久欧美精品欧美久久欧美| 精品久久久久久久久久久久久| 精品久久久久久久毛片微露脸| 99视频精品全部免费 在线| 最新在线观看一区二区三区| 天堂动漫精品| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 国产成人av教育| 色综合亚洲欧美另类图片| 91九色精品人成在线观看| 毛片女人毛片| 丁香欧美五月| 成人一区二区视频在线观看| 日本 欧美在线| 男女午夜视频在线观看| 午夜精品一区二区三区免费看| 69av精品久久久久久| 亚洲精品亚洲一区二区| 观看免费一级毛片| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 日韩人妻高清精品专区| 一本精品99久久精品77| 男女之事视频高清在线观看| 精品电影一区二区在线| 亚洲不卡免费看| av在线天堂中文字幕| 亚洲一区二区三区色噜噜| 欧美极品一区二区三区四区| 国产亚洲欧美在线一区二区| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 老司机午夜福利在线观看视频| 国产一区二区激情短视频| 欧美区成人在线视频| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 国产黄a三级三级三级人| 国产精品98久久久久久宅男小说| 成年免费大片在线观看| 哪里可以看免费的av片| 国产乱人伦免费视频| 成年免费大片在线观看| 少妇的逼好多水| 欧美日韩综合久久久久久 | 黄色女人牲交| 欧美+日韩+精品| 亚洲人成电影免费在线| 香蕉av资源在线| 少妇熟女aⅴ在线视频| 在线免费观看不下载黄p国产 | 黄色女人牲交| 国产免费男女视频| 久99久视频精品免费| 国产91精品成人一区二区三区| 天天一区二区日本电影三级| 午夜激情福利司机影院| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 桃色一区二区三区在线观看|