TLR4、SAA水平在新生兒敗血癥中的變化及與心肌、肝功能受損的關(guān)系

程雪蓮

(南陽市中心醫(yī)院兒科，河南 南陽473000)

近年來，新生兒敗血癥的發(fā)生率明顯的上升，特別是在合并有自身免疫力下降的新生兒中，新生兒敗血癥的發(fā)病率具有進一步的上升趨勢[1]。流行病學研究證實，新生兒敗血癥的每年新發(fā)病例數(shù)量可超過10萬新生兒左右[2]。現(xiàn)階段臨床上缺乏對于新生兒敗血癥病情評估的血清學指標，而可靠的評估指標對于疾病的臨床預后的評估或者高危新生兒的隨訪均具有重要的價值。Toll樣受體4(Toll like receptor 4，TLR4)的表達能夠促進自身免疫性損傷，加劇氧化應激功能障礙，提高患者體內(nèi)的重要內(nèi)臟組織的損傷程度[3,4]；淀粉酶A蛋白(amylase A protein，SAA)的高表達，能夠誘導下游炎癥信通路的激活，促進IL-6或者腫瘤壞死因子a的富集，從而促進新生兒敗血癥的病情進展[5]。為了揭示TLR4、SAA水平在新生兒敗血癥中的變化及與心肌、肝功能受損的關(guān)系，從而為臨床上新生兒敗血癥的病情評估提供可靠的血清學參考指標，本次研究選取我院2016年6月～2017年12月確診的敗血癥新生兒90例，揭示了不同指標的血清學變化。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取我院2016年6月-2017年12月確診的敗血癥新生兒90例 (病例組)、90例健康新生兒(對照組)。 病例組，日齡 3～14d，平均 7.7±2.6d，男 48例、女 42例，分娩孕周 36～40周，平均38.4±1.7 周，出生體質(zhì)量 3104.2±177.6g。 對照組，日齡 3～14d，平均 7.2±2.4d，男 50 例、女 40 例，分娩孕周36～40周，平均38.2±1.3周，出生體質(zhì)量3122.3±181.9g。兩組患兒的年齡、性別、分娩孕周、出生體質(zhì)量比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。

納入標準：(1)新生兒敗血癥的診斷標準參考中華醫(yī)學會制定的標準；(2)分娩孕周36～40周；(3)經(jīng)血培養(yǎng)證實為細菌感染性敗血癥；(4)對照組為我院出生的健康新生兒。排除標準：(1)宮內(nèi)窘迫；(2)染色體及出生缺陷；(3)伴有免疫性疾??；(4)合并宮內(nèi)感染。

1.2 檢測方法 所有受試者于清晨抽取空腹靜脈血 8 ml， 其中 2 ml置于 Eppendorf管中在 4℃，3000 r/mi條件下離心10 min，吸取上層血清，-80℃冰箱保存，采用ELISA試劑盒測定SAA的含量；4ml靜脈血用全自動生化分析儀測定ALT、AST、TBIL、GGT；2mL 靜脈血采用免疫發(fā)光法檢測cTnI、cTnT、CK-MB、H-FABP， 配套試劑購自羅氏檢測公司。采用RT-PCR法檢測TLR4mRNA的表達，RNA提取試劑盒購自南京碧云天生物公司，離心機3K15購自德國西格瑪公司。

1.3 統(tǒng)計學方法 統(tǒng)計分析采用SPSS16.0數(shù)據(jù)分析軟件，計量數(shù)據(jù)的正態(tài)分布檢驗采用pp圖和qq圖，計量資料采用()表示，數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析采用t檢驗；計數(shù)資料采用χ2檢驗；相關(guān)性分析采用Pearson線性相關(guān)分析法；P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組新生兒血清SAA、TLR4mRNA水平比較病例組患兒的血清SAA、TLR4mRNA水平顯著的高于對照組(P＜0.05)；見表 1。

2.2 兩組新生兒肝功能指標比較 病例組患兒的血清ALT、AST、TBIL、GGT水平顯著的高于對照組(P＜0.05)；表 2。

表1 兩組新生兒血清SAA、TLR4mRNA水平比較()

表1 兩組新生兒血清SAA、TLR4mRNA水平比較()

組別 n SAA(mg/L)TLR4mRNA(-2△ct)病例組對照組t值P值90 90 73.2±21.8 4.9±1.3 29.670 0.000 1.83±0.42 0.39±0.13 31.072 0.000

表2 兩組新生兒肝功能指標比較()

表2 兩組新生兒肝功能指標比較()

組別 n ALT(IU/L)AST(IU/L)TBIL(μmol/L)GGT(IU/L)病例組對照組t值P值90 90 97.5±23.6 28.3±7.5 26.626 0.000 122.7±29.8 27.6±8.9 29.009 0.000 87.4±18.3 36.2±4.9 25.639 0.000 106.4±28.1 21.6±5.8 28.038 0.000

2.3 兩組新生兒心肌損害指標比較病例組患兒的血清 cTnI、cTnT、CK-MB、H-FABP 水平顯著的高于對照組(P＜0.05)；見表 3。

表3 兩組新生兒心肌損害指標比較()

表3 兩組新生兒心肌損害指標比較()

組別 n cTnI(ng/ml)cTnT(ng/ml)CK-MB(IU/L)H-FABP(ng/ml)病例組對照組t值P值90 90 0.98±0.26 0.24±0.09 26.895 0.000 0.82±0.44 0.11±0.05 15.210 0.000 72.31±24.91 16.88±2.90 20.969 0.000 49.33±13.51 7.40±2.81 28.827 0.000

2.4 敗血癥患兒血清SAA、TLR4mRNA水平與肝功能指標的相關(guān)性 病例組患兒的血清SAA、TLR4mRNA 與血清 ALT、AST、TBIL、GGT 呈顯著的正相關(guān)關(guān)系(P＜0.05)；見表 4。

2.5 敗血癥患兒血清SAA、TLR4mRNA水平與心肌損害指標的相關(guān)性 病例組患兒的血清SAA與血清 ALT、AST、TBIL、GGT 呈顯著的正相關(guān)關(guān)系(P ＜0.05)，TLR4mRNA 水 平 ALT、AST、TBIL、GGT的相關(guān)性無顯著性(P＞0.05)；見表5。

表4 敗血癥患兒血清SAA、TLR4mRNA水平與肝功能指標的相關(guān)性()

表4 敗血癥患兒血清SAA、TLR4mRNA水平與肝功能指標的相關(guān)性()

指標 相關(guān)值 ALT AST TBIL GGT SAA TLR4mRNA r值P值r值P值0.673 0.000 0.722 0.000 0.673 0.000 0.722 0.000 0.583 0.000 0.618 0.000 0.592 0.000 0.629 0.000

表5 敗血癥患兒血清SAA、TLR4mRNA水平與心肌損害指標的相關(guān)性()

表5 敗血癥患兒血清SAA、TLR4mRNA水平與心肌損害指標的相關(guān)性()

指標 相關(guān)值 ALT AST TBIL GGT SAA TLR4mRNA r值P值r值P值0.539 0.000 0.192 0.096 0.618 0.000 0.204 0.083 0.639 0.000 0.087 0.317 0.702 0.000 0.117 0.296

3 討論

在早產(chǎn)兒或者合并有新生兒呼吸窘迫綜合癥的患兒中，新生兒敗血癥的發(fā)生風險均可以顯著的上升[6]。新生兒敗血癥的發(fā)生，具有下列幾個方面的特點[7,8]：(1)新生兒敗血癥的病情進展較為迅猛，短期內(nèi)可導致嚴重的肝腎功能及心肺功能障礙；(2)其對于臨床保守性藥物治療的總體敏感性較低，治療后的多器官功能惡化仍然較為明顯?，F(xiàn)階段臨床上缺乏對于患者臨床預后評估過程中的可靠參考指標，雖然影像學檢查或者常規(guī)生化檢查能夠在一定程度上評估患者的病情轉(zhuǎn)歸，但其評估的靈敏度或者特異度等指標并不理想。例如一項囊括了327例樣本量的新生兒敗血癥的血清學指標分析可見，C反應蛋白(CRP)雖然能夠在一定程度上評估新生兒敗血癥的發(fā)生風險，并評估新生兒敗血癥患者的遠期臨床轉(zhuǎn)歸，但其預測患兒臨床轉(zhuǎn)歸的靈敏度不足35%，預測的一致性率不足40%[9]。

SAA作為血清學非特異性的炎癥時相蛋白，SAA的上升能夠誘導炎癥信號通路MAPK的激活，促進下游炎癥因子如IL-10或者IL-4的顯著釋放，促進了中性粒細胞對于心肌細胞組織的浸潤，增加了心肺功能異常的風險?；A領域的相關(guān)研究證實，SAA還能夠影響患者體內(nèi)的氧化應激指標如谷胱甘肽芳基轉(zhuǎn)移酶的活性，導致氧化應激反應的激活，促進了肝腎上皮細胞的氧化應激性損傷[10]；TLR4的表達能夠通過激活自身的T淋巴細胞免疫，導致自身免疫功能的過度激活，從而參與到感染性疾病或者自身免疫性疾病的發(fā)生過程中。相關(guān)研究也顯示，TLR4能夠在提高炎癥因子的轉(zhuǎn)錄反應速度等方面發(fā)揮作用，促進腫瘤壞死因子又對于新生兒感染部位的組織損傷[11,12]。

本次研究中SAA、TLR4mRNA在新生兒敗血癥患者血清中均明顯的高表達，高于非敗血癥組，差異較為明顯，提示了SAA、TLR4mRNA在促進新生兒敗血癥過程中的作用，薈萃國內(nèi)外的相關(guān)文獻，筆者認為相關(guān)指標對于新生兒敗血癥發(fā)生的影響主要考慮與下列因素有關(guān)[10，13，14]：(1)SAA 的上升能夠誘導中性粒細胞的激活，促進單核細胞對于內(nèi)臟組織器官的損傷，導致感染性病情的進展；(2)TLR4mRNA的上升能夠增加TLR4的轉(zhuǎn)錄翻譯水平，促進T淋巴細胞的自身免疫性損傷過程。李松等[15]研究者探討了新生兒感染性疾病的血清學資料，發(fā)現(xiàn)SAA的上升幅度可超過28%以上，同時在累及器官較多或者感染性病情短期進展速度較快的人群中，SAA的表達可進一步的上升。谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、總膽汁酸(TBIL)等指標是評估患兒肝功能的指標，本次研究中ALT、AST、TBIL等在病例組患兒中均明顯的上升，高于對照組，差異明顯，提示了新生兒敗血癥均存在明顯的肝功能的損傷，這主要考慮與肝臟上皮細胞的炎癥性損傷或者氧化應激損傷過程有關(guān)。肌鈣蛋白I(cTnI)、肌鈣蛋白T(cTnT)、磷酸肌酸同工酶(CK-MB)等是評估患兒心肌細胞損傷的重要指標，在病例組患兒中，心肌酶譜相關(guān)指標均明顯的上升，提示了新生兒敗血癥患兒均存在不同程度的心肌細胞的損傷。相關(guān)關(guān)系分析可見，SAA、TLR4mRNA的表達與新生兒的肝功能指標密切相關(guān)，提示SAA、TLR4mRNA在影響到患兒的肝功能損傷過程中發(fā)揮了重要的作用，這主要由于SAA、TLR4mRNA的高表達能夠影響到肝臟上皮細胞的凋亡程度，促進炎癥信號通路NF-KB的激活有關(guān)；而病例組患兒的血清SAA與肌鈣蛋白I、肌鈣蛋白T、磷酸肌酸同工酶等心肌酶譜指標呈顯著的正相關(guān)關(guān)系，提示了SAA指標與患兒心肌細胞損傷的相關(guān)性，這主要由于SAA蛋白的表達能夠影響心肌細胞膜完整性，促進了心肌細胞的線粒體損傷。