我實驗室衛(wèi)生部臨檢中心室間質(zhì)評結(jié)果分析

方建華，張燕，呂永磊

(河南省紅十字血液中心，河南 鄭州 450012)

衛(wèi)生部臨檢中心的室間質(zhì)評是每個血液中心或中心血站必須參加的一項活動，因為參加的實驗室之多和樣本濃度的多樣性而受到全國用戶的好評。2017年共計437家實驗室參與該室間質(zhì)評活動，衛(wèi)生部臨檢中心對所有室間質(zhì)評樣本均給出了詳細的結(jié)果，便于我們對比分析，找出問題并及時解決。本實驗室多年來一直積極參與衛(wèi)生部臨檢中心的室間質(zhì)評樣本的評價活動，酶免參加的項目包括：HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP。 通過參加室間質(zhì)評活動，可以更加清楚地認識實驗室的血液檢測方法的性能及血篩試劑的客觀評價[1]。本文就2017年參加衛(wèi)生部臨檢中心酶免四項的室間質(zhì)評結(jié)果進行回顧性分析，評價實驗室檢測系統(tǒng)的性能。

1 資料與方法

1.1 室間質(zhì)評項目 檢測項目包括乙型肝炎表面抗原(HBs Ag)、丙型肝炎抗體(抗-HCV)、梅毒抗體和人類免疫缺陷病毒抗體(抗-HIV)4項傳染病免疫學(xué)指標。

1.2 標本來源 2017年我實驗室共收到三次衛(wèi)生部臨檢中心發(fā)放的質(zhì)控樣品，均按要求進行保存，實驗室完全融化平衡至室溫，若有絮狀物離心后混勻取上清液進行加樣。衛(wèi)生部臨檢中心2017年全年共計發(fā)放三次室間質(zhì)評樣本，每次5個樣本，共計15個樣本。標本序號分別為1751～1755、1761～1765、1771～1775。

1.3 試劑、儀器與質(zhì)控品 乙肝表面抗體檢測試劑盒(WT、LZ)，丙肝抗體檢測試劑盒(WT、KH)，人類免疫缺陷病毒抗體檢測試劑盒(WT)，人類免疫缺陷病毒抗原 /抗體檢測試劑盒(BIO-RAD)，梅毒抗體檢測試劑盒(WT、LZ)。Microlab STAR全自動樣本處理系統(tǒng)(瑞士哈美頓)，Microlab FAME全自動酶免分析儀(瑞士哈美頓)，Sunrise酶標儀(瑞士帝肯)，質(zhì)控品為北京康徹思坦生物技術(shù)有限公司提供的酶免四項混合質(zhì)控品。實驗中涉及到的五種廠家的試劑均由漢語拼音縮寫字母標示。

1.4 評價方法 驗證試驗(PT)：合格項目數(shù)/總項目數(shù)×100%=PT得分，PT得分≥80%為合格，PT得分＜80%為不合格。對于室間質(zhì)評的樣本，同本實驗室的待檢標本同時檢測，嚴格按照實驗室標準操作規(guī)程進行操作，檢測結(jié)果由檢測者填寫，最后由專人上報。酶免項目進行兩遍檢測，分為初檢和復(fù)檢。在收到NCCL的反饋結(jié)果后進行分析。

2 結(jié)果

2.1 HBV結(jié)果 2017年三次室間質(zhì)評樣本中共計有4個陽性樣本，其中三個為弱陽性樣本，一個為中等強度的陽性標本。三個弱陽性樣本有兩個已被實驗室所用兩種酶免試劑檢出，但1764號樣本兩種酶免試劑均顯示陰性結(jié)果，衛(wèi)生部臨檢中心給出1764的濃度為0.05IU/ml，在874份實驗結(jié)果中僅有11家將此弱陽性標本檢出。這提示我們所使用的試劑有一定的漏檢風(fēng)險。見表1。

2.2 HCV結(jié)果 2017年三次室間質(zhì)評樣本中共有5個抗-HCV陽性樣本，這與本實驗室兩種酶免試劑的結(jié)果一致。但是兩種酶免試劑的S/Co與均值存在一定的差異，其中WT試劑的S/Co比均值稍低，而KH試劑的S/Co稍高。見表2。

2.3 HIV的結(jié)果 2017年三次室間質(zhì)評樣本中共有4個抗-HIV陽性樣本，這與本實驗室兩種酶免試劑給我的結(jié)果一致。但是兩種酶免試劑的S/Co與均值相比，均稍低。見表3。

表1 2017年衛(wèi)生部臨檢中心HBV反應(yīng)性標本對比結(jié)果

表2 2017年衛(wèi)生部臨檢中心HCV反應(yīng)性標本對比結(jié)果

表3 2017年衛(wèi)生部臨檢中心HIV反應(yīng)性標本對比結(jié)果

2.4 TP的結(jié)果 2017年三次室間質(zhì)評樣本中共有6個抗-TP陽性樣本，這與本實驗室兩種酶免試劑測得的結(jié)果一致。這6個陽性樣本的S/Co均低于均值。見表4。

在抗-TP的樣本中存在一個特殊樣本1751，正確檢測結(jié)果為陰性，本實驗所用的兩種試劑檢出了不同的結(jié)果，其中WT試劑檢出的為陰性，LZ試劑檢出的為陽性，169家使用LZ試劑檢出的均值為1.1，我們實驗室的S/Co為2.0，這與均值結(jié)果一致，由此可見，LZ試劑對于這份標本給出的是生物學(xué)假陽性結(jié)果。

3 討論

2013版室間質(zhì)量評價結(jié)果應(yīng)用指南中規(guī)定，能力驗證是指多個標本周期性地發(fā)送到實驗室進行分析和(或)鑒定，將每一實驗室的結(jié)果與同組的其他實驗室的結(jié)果或指定值進行比較，并將比較的結(jié)果報告給參與的實驗室[2]。此指南指出，在每次室間質(zhì)量評價活動中，實驗室應(yīng)評估評分分布情況。如果所有結(jié)果均在可接受結(jié)果范圍平均值的上方或下方，則可能是校準問題。實驗室應(yīng)評估每個結(jié)果與平均值之間的差距。EQA的目的在于評價實驗室的檢測結(jié)果的準確性，確認實驗室之間的差異并持續(xù)改進檢驗質(zhì)量，也是考核實驗室間所出具結(jié)果是否具有可比性的重要工具之一[3]。

表4 2017年衛(wèi)生部臨檢中心TP反應(yīng)性標本對比結(jié)果

2017年我們在參與衛(wèi)生部臨檢中心的室間質(zhì)評活動中，發(fā)現(xiàn)了我們實驗室存在的兩個問題，第一個為個性問題，1764號HBsAg的弱陽性標本，其濃度為0.05IU/ml，由于試劑靈敏度達不到導(dǎo)致漏檢，這就提示我們所用的酶免乙肝試劑存在一定的漏檢風(fēng)險，但后經(jīng)核酸實驗室檢測，檢測結(jié)果為HBV DNA陽性，Ct值為24，這就說明核酸檢測對弱陽性標本的檢出可以和酶免試劑形成互補；第二個問題是共性問題，觀察表1至表4，除了丙肝KH試劑，其余7種酶免試劑所做的S/Co值均不同程度的低于均值，這就提示我們實驗室存在一定的系統(tǒng)誤差。對此，我們專門從實驗的關(guān)鍵控制點入手，逐步尋找原因，并請教經(jīng)驗的儀器工程師協(xié)助我們調(diào)查原因。最終通過觀察一年來的室內(nèi)質(zhì)控圖，特別分析了2017年三次室間質(zhì)評當天的室內(nèi)質(zhì)控圖，發(fā)現(xiàn)有持續(xù)走低的趨勢，這就提示我們會有漏檢的風(fēng)險，自2017年底我們調(diào)整了酶免試劑室內(nèi)質(zhì)控的濃度，使其達到了2015版血站技術(shù)操作規(guī)程的要求。具體調(diào)整效果還有待于分析2018年室間質(zhì)評的反饋結(jié)果。

對于梅毒的LZ試劑顯示1751號樣本的假反應(yīng)性結(jié)果，這是試劑本身的原因。所謂的生物學(xué)假反應(yīng)性是指針對某一個特定的樣品，排除實驗室操作原因，使用某種試劑反復(fù)檢測認為反應(yīng)性，但該樣品經(jīng)證實為陰性。任何試劑都不可能避免會對某些樣品產(chǎn)生生物學(xué)假反應(yīng)性。EQA中，生物學(xué)假反應(yīng)性的特點是在試劑分組中大部分參評實驗室都出現(xiàn)假生物反應(yīng)性情況。幾乎每次EQA中均會有生物學(xué)假反應(yīng)性樣品，說明日常血液篩查中生物學(xué)假反應(yīng)性的頻率比較高。

楊麗華等對7種HBsAg ELISA檢測試劑的EQA數(shù)據(jù)進行分析，發(fā)現(xiàn)對于0.5、0.3、0.2IU/ml三個低濃度樣本的檢測符合率無明顯差異，但對于0.1IU/ml的樣本的檢測表現(xiàn)有明顯差異，其中進口檢測試劑的符合率明顯優(yōu)于其他試劑[4]。內(nèi)蒙古血液中心對2015年室間質(zhì)評樣本進行分析，針對同一樣本而兩種試劑結(jié)果不一致的情況，對于出現(xiàn)的偏差，實驗室從人員、機器、物料、方法、環(huán)境等方面查找原因，進行逐步分析，最終判定為兩種試劑的靈敏度不同所致結(jié)果不一致[5]。

關(guān)于如何做好室間質(zhì)評樣本的評價活動，我認為對樣本的處理和結(jié)果的分析至關(guān)重要，對此，江蘇血液中心專門探索了血站病毒核酸檢測質(zhì)評樣本混樣檢測的最佳工作模式，為室間質(zhì)評樣本的評價更加真實可靠提供了一種思路[6]。對于室間質(zhì)評的低值陽性標本天津市血液中心的王全慧專門進行了調(diào)查分析，其中2011年的1175號質(zhì)評樣本國產(chǎn)酶免試劑HBsAg報告為陰性，與全國采供血機構(gòu)實驗室使用此國產(chǎn)試劑報告結(jié)果相反，對此他們從人員、機器、物料、方法、環(huán)境等各個環(huán)節(jié)進行了全面分析并逐一排除，最后分析原因可能為人為操作誤差[7]。

實驗室做室間質(zhì)評的樣品和普通的檢測樣品一樣，從接收開始對樣品的狀態(tài)就有規(guī)范詳細的記錄，樣品的前處理非常重要直接影響檢測結(jié)果的準確性，在檢測過程中實驗室的溫濕度環(huán)境控制，儀器的狀態(tài)，試劑的質(zhì)量，是否在效期內(nèi)，室內(nèi)質(zhì)控品濃度的選擇等因素決定檢測結(jié)果的準確性，檢測后對結(jié)果的處理，標本的保存，儀器的維護保養(yǎng)同樣重要[8]。

室間質(zhì)量評價活動的意義，在于有沒有分析其用意并對實驗室的質(zhì)量控制提供一些改進[9-10]，從而使實驗室的能力得到提升。實驗室應(yīng)該參加多種不同的室間質(zhì)評活動，才能獲得更全面的信息，從而掌握整體實驗的發(fā)展趨勢，為提高檢測質(zhì)量，改進檢測方法做好準備[11]。