五味接骨膠囊對(duì)昆明種小鼠毒性的觀察

王彥坤

（河南省通許縣人民醫(yī)院，河南 通許 475400）

五味接骨膠囊是我院制劑室研制的一種中藥制劑，主要成分有馬錢(qián)子、自然銅、地龍、枳殼、雞蛋殼，具有散瘀止痛、接續(xù)筋骨的作用，用于治療跌打損傷、骨折等。五味接骨膠囊中含有馬錢(qián)子（有大毒），為保證臨床用藥安全，我們?cè)诤幽洗髮W(xué)藥物研究所作了急性毒性試驗(yàn)，以急性毒性研究技術(shù)為指導(dǎo)原則［1］，觀察昆明種小鼠灌胃（ig）給予五味按骨膠囊后的毒性反應(yīng)及嚴(yán)重程度。

1 材料與方法

1.1 藥材與藥品

1.1.1 藥材處方馬錢(qián)子［制］，自然銅［制］、地龍、枳殼、雞蛋殼組成，藥材來(lái)源河南禹州市供應(yīng)站，經(jīng)鑒定符合《中國(guó)藥典》一部收載藥材，并對(duì)馬錢(qián)子、自然銅依據(jù)《中藥炮制大全》［2］進(jìn)行炮制，雞蛋殼自制，經(jīng)洗、挑、揀，除去皮洗凈即得。

1.1.2藥品將五味藥材混合均勻，粉碎成80目，裝入0號(hào)膠囊制成五味制劑膠囊，80粒/瓶，每粒0.45 g。本次實(shí)驗(yàn)使用藥品（河南省通許縣人民醫(yī)院制劑室提供，批號(hào)：20140211）。

1.2 試驗(yàn)材料

1.2.1 動(dòng)物動(dòng)物為昆明種小鼠（由河南省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：4100115），體質(zhì)量18～22 g，雌雄各半，在實(shí)驗(yàn)觀察1 w后，隨機(jī)分組?；A(chǔ)飼料由河南省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心飼料廠提供，為全價(jià)營(yíng)養(yǎng)顆粒飼料。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)條件實(shí)驗(yàn)室溫度：（23±3）℃，濕度：（55±10）%，自然光明7：00～19：00，自由飲水（常用自來(lái)水），定量投食，換氣頻率10～15次/h，籠具平均更換1次/3 d，更換后消毒，籠底墊料為刨花木屑，晾曬后消毒使用。

1.3 藥物與試劑

將膠囊內(nèi)藥物4.05 g加入0.5%的羧甲基纖維納（CMC-Na溶液，上?；瘜W(xué)試劑采購(gòu)供應(yīng)站，批號(hào)：710419）中制成濃度為0.405 g/mL混懸藥液備用。

1.4 實(shí)驗(yàn)與分組

1.4.1 預(yù)試驗(yàn)分組取小鼠20只，隨機(jī)分為5組，每組4只，雌雄各半。第1組小鼠灌胃溶積0.2 mL/10 g，4只小鼠均死亡；第2組小鼠灌胃溶積0.18 mL/10 g，3只小鼠死亡。取濃度0.405 g/mL混懸藥液5mL稀釋成0.135 g/mL，備用。第3組小鼠灌胃溶積0.2 mL/10g，1只小鼠死亡；第4組小鼠灌胃溶積0.18 mL/10 g，無(wú)小鼠死亡；第5組小鼠灌胃溶積0.19 mL/10 g，1只小鼠死亡。故4/4死亡最小劑量為8.1 g/kg；0/4死亡最大劑量為243 g/kg。

1.4.2 試驗(yàn)分組取小鼠160只，體質(zhì)量18～22 g，隨機(jī)分為8組，每組20只，雌雄各半。試驗(yàn)前禁食12h，自由飲水。第1～7組為五味接骨膠囊組，相鄰高、低組給藥劑量比值為1∶0.8，則各組給藥劑量分別為：8.1 g/kg、6.48 g/kg、5.184 g/kg、4.1472 g/kg、3.3178 g/kg、2.6542 g/kg、2.1234 g/kg。第8組為0.5%的CMC-Na溶液對(duì)照組。各小鼠灌胃溶積為0.2 mL/10 g。采用低比稀釋法配藥：根據(jù)預(yù)試結(jié)果，小鼠全死劑量Dmas＝8.1 g/kg、k=0.8、n＝20，小鼠體質(zhì)量為18～22 g，每組20只，總體質(zhì)量約為400 g，用藥量為0.2 mL/10g（20 mL/kg）。

1號(hào)藥液濃度＝Dmax/用藥量=8.1 g/kg/20 mL/kg=0.405 g/mL。

每組藥液量=每組小鼠總體質(zhì)量×用藥量=400 g×20 mL/kg=8 mL（最少8 mL，為配藥方便并留有余地，取10 mL）。

1號(hào)藥液量＝每組藥液量/（1-k）=10/（1-0.8）mL=50 mL。

精確配制濃度為0.405 g/mL混懸藥液50 mL，從中吸取10 mL為1號(hào)液供第1組用藥。在余下的40 mL藥液中加入0.5%的CMCNa溶液10 mL，混勻后，從中吸取10 mL為2號(hào)液，供第2組用藥。依此類(lèi)推，配制出一系列比值為1∶0.8的藥液。

1.5 觀察指標(biāo)

包括一般指標(biāo)（如動(dòng)物外觀、行為、分泌物、排泄物等）；死亡情況（死亡時(shí)間、死亡時(shí)反應(yīng)等）。大體解剖所有小鼠，器官出現(xiàn)異常時(shí)進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用改良寇氏法計(jì)算LD50：

注：Xmax為最大劑量的對(duì)數(shù)值，∑P為各組小鼠死亡率總和，i為相鄰兩組劑量的對(duì)數(shù)之差。

注：Sx50為L(zhǎng)D50的標(biāo)準(zhǔn)差，n為各組小鼠數(shù)，∑P為各組小鼠死亡率總和，∑P2為各組小鼠死亡率平方的總和，i為相鄰兩組劑量的對(duì)數(shù)之差。

LD50的95%平均可信限=LD50士4.5LD50Sx50。

2 結(jié)果

2.1 一般指標(biāo)

用藥后1～7組小鼠均出現(xiàn)明顯鎮(zhèn)靜、閉目等中樞抑制現(xiàn)象，表現(xiàn)為自主活動(dòng)減少；皮毛、清潔度、兩便均無(wú)異常；瞳孔、眼險(xiǎn)、分泌物均正常，未見(jiàn)流淚、流涎等現(xiàn)象。對(duì)照組小鼠均未出現(xiàn)明顯興奮躁動(dòng)、豎尾等興奮現(xiàn)象；皮毛、清潔度、兩便均無(wú)異常；瞳孔、眼險(xiǎn)、分泌物均正常，未見(jiàn)流淚、流涎等現(xiàn)象。

2.2 死亡情況

1～7組小鼠均出現(xiàn)死亡，死亡時(shí)間為灌胃后30～85 min。死亡前均出現(xiàn)明顯的興奮不安，逐漸轉(zhuǎn)為精神萎磨不振，并出現(xiàn)四肢強(qiáng)直性痙攣。對(duì)照組無(wú)小鼠死亡。各組死亡情況見(jiàn)表1。

2.3 計(jì)算結(jié)果

按改良冠氏法計(jì)算：

LD50的95%平均可信限＝LD50±4.5×LD50×SX50＝ 3.8361±4.5×3.8361×0.02318＝3.8361±0.4001

2.4 臟器

各小鼠于給藥后第14天處死解剖，各器官體積、顏色、紋理均正常。

表1 1～7組小鼠死亡情況

3 討論

五味接骨膠囊中馬錢(qián)子為馬錢(qián)子科植物馬錢(qián)子（Strychnos nux-vomicaL）或云南馬錢(qián)子（S.PierrianaA .W.Hill）的干燥成熟種子，味苦、寒、有大毒，歸肝、脾經(jīng)，且有通絡(luò)止痛、散結(jié)消腫，用于風(fēng)濕頑痹、麻木癱瘓、跌打損傷、面神經(jīng)麻痹、坐骨神經(jīng)痛等。馬錢(qián)子雖有大毒，卻臨床療效顯著，應(yīng)用千年而不衰，被稱(chēng)為“毒藥猛劑，善起沉疴”的典范。藥以用量而能，藥以用量而用［3］，馬錢(qián)子用量范圍為0.3～0.6 g。馬錢(qián)子含總生物堿2%～5%，主要為番木鱉（士的寧）及馬錢(qián)子堿，番木鱉堿約占總生物堿45%左右，是主要的有毒成分。為減少馬錢(qián)子的毒性，使用之前常需炮制。一般炮制方法為砂炒，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，砂炒馬錢(qián)子因砂燙時(shí)受熱程度不同，番木鱉堿的含量亦不同，當(dāng)溫度達(dá)到210℃以上，該堿的含量降低，溫度達(dá)290℃時(shí)，顏色變成褐色，番木鱉堿含量持續(xù)降低，但治療效果也大大降低［4］。為防止番木鱉堿受熱過(guò)分分解，砂燙溫度應(yīng)控制在220℃～240℃，5～6 min即可，顏色一般以棕色至棕褐色為度［5］。我院炮制馬錢(qián)子合格，用量適宜，為臨床用藥安全，特對(duì)五味接骨膠囊進(jìn)行小鼠灌胃［ig]毒性試驗(yàn)，結(jié)果顯示，五味接骨膠囊LD50為3.8361（灌胃），相當(dāng)于臨床用量的56.83倍，提示五味接骨膠囊具有一定的毒性，但毒性較低，對(duì)機(jī)體產(chǎn)生的毒性反應(yīng)及嚴(yán)重程度較低，臨床用藥安全。