淺析高效液相色譜法測定甘蔗及土壤中環(huán)嗪酮的殘留量

臧穩(wěn)

摘 要：環(huán)嗪酮作為一種除草劑，對于阻止雜草合成生長、防治甘蔗等作物的常見病蟲害等均具有積極的幫助作用。在這一背景下，本文將結合相關研究資料，采用實驗分析的方式，重點對高效液相色譜法測定甘蔗及土壤中的環(huán)嗪酮殘留量進行簡要分析研究。

關鍵詞：高效液相色譜;甘蔗;土壤;環(huán)嗪酮

1 材料與實驗

1.1 儀器與試劑

在本次實驗中所選用的儀器，除了精準性較高的高效液相色譜儀這一主要儀器外，同時還使用了支持波長自動調節(jié)的可變紫外檢測器，與專業(yè)的數(shù)據(jù)處理儀等相關儀器設備。在試劑選取中，本文所選擇的實驗試劑，主要包括用以兩次蒸餾的水、含量為99%的環(huán)嗪酮標準品，級別均為分析純的乙酸與鄰苯二甲酸二乙酯，以及同為HPLC級的乙腈和甲醇。

1.2 色譜條件

在色譜條件中，本試驗色譜柱為phenomenex C18 1500mm×4.6（i.d.）mm不銹鋼柱，5μm且柱溫控制在25℃。檢測波長與流速分別設定為253nm與1mL/min。流動相即乙腈、甲醇和水、HAc的比例為15：30：55：0.5，設定環(huán)嗪酮保留時間為5min。

1.3 實驗過程

1.3.1 樣品提取

在提取甘蔗樣品時，需在具塞容量瓶內，加入精準稱取的10g完全粉碎的甘蔗樣品，而后將50mL氯仿加入其中進行30min的振蕩，在進行過濾后分別使用30mL氯仿提取兩次。將所有提取液全部合并并將其置入150mL濃縮瓶中，在37℃的溫度環(huán)境下對其進行減壓濃縮直至接近完全干燥，最后對其進行相應凈化處理即可。在提取土樣樣品時，則需要在離心管內加入精準稱取的25g土樣，隨后分別將5mL與45mL的甲醇混合溶劑與乙酸乙酯加入其中，進行30min振蕩提取。在將轉速設定為4000r/min后進行5min的離心處理，取全部上清液。重新進行2次提取，將所有提取液合并置入150mL梨形瓶中，同樣在37℃的溫度環(huán)境下進行減壓濃縮直至其接近完全干燥。使用N2將其吹干后用甲醇定容，最后進行相應的過濾處理。

1.3.2 樣品測定

按照此次實驗中的液相色譜條件，當儀器具有良好穩(wěn)定性時，實驗人員需進幾針1μL標樣溶液，并對每次響應值的比值進行精準測定。要求前后兩次響應值之比的偏差變化不超過1.0%。此后實驗人員需要按照先標樣溶液后樣品溶液、而后樣品溶液最后標樣溶液的順序進行進樣分析。對兩針樣品溶液與樣品溶液之前、之后的兩針標樣溶液中，環(huán)嗪酮峰面積值進行計算。其計算公式如下：

在這一公式當中，X代表環(huán)嗪酮質量分數(shù)，其單位為%。S1與S2分別代表著標樣溶液與試樣溶液當中，環(huán)嗪酮峰面積值。m1與m2則分別代表環(huán)嗪酮標樣與試樣的質量，其單位均為g。標樣當中環(huán)嗪酮標準品質量分數(shù)則用P進行表示[1]。

2 結果與分析

2.1 實驗條件選擇

在此次實驗當中不僅使用了C18柱，同時還采用了腈基柱，當樣品長度為150mm，C18柱的內徑為4.6mm時，柱上出現(xiàn)了較好分離度。從價格角度看，因甲醇價格明顯低于乙腈，因此實驗開始時直接選擇將甲醇與水作為流動相，但樣品組分并未出現(xiàn)理想的分離度。此后實驗人員選擇直接將乙腈和水作為流動相體系，同樣未發(fā)現(xiàn)環(huán)嗪酮與雜質具有良好分離度。經過綜合考慮，實驗人員最終選擇將C18柱作為分離柱的基礎上，將甲醇與水以及乙腈共同作為流動相體系，使得選擇性在一定程度上得到了有效改善，主峰和雜質峰不僅在短時間內實現(xiàn)了分離，同時其分離度也相對較好[2]。在采用可變紫外檢測器對環(huán)嗪酮標準品的波長進行掃描時，發(fā)現(xiàn)其紫外吸收在254nm處有最大吸收值，因此將254nm設定為紫外吸收波長具有較高的合理性。

2.2 分析方法線性關系

在本次實驗中，實驗人員分別選用了容量為10mL、20mL、50mL以及100mL和500mL的容量瓶，依次向各容量瓶內加入精準稱取的0.040g環(huán)嗪酮土壤標準品和0.02g甘蔗標準品，并全部使用甲醇溶解稀釋定容。前者的濃度范圍在0.17g/L至0.05g/L之間，后者的濃度范圍在0.40g/L至0.0080g/L之間。在現(xiàn)有色譜條件下，將橫縱坐標分別設定為環(huán)嗪酮與外標峰質量比，以及峰面積比，根據(jù)得到的相應工作曲線圖，可計算得到環(huán)嗪酮回歸方程為Y=1.1564X+0.0033，其相關系數(shù)為0.9999，即表明本分析方法具有較高的可行性。

2.3 方法精密度回收率

在對土壤與甘蔗環(huán)嗪酮樣品進行精準稱取并平行測定各樣品的含量之后，根據(jù)相關計算結果可知，甘蔗中的環(huán)嗪酮標準偏差為0.96%，土壤中環(huán)嗪酮標準偏差為1.10%。前者變異系數(shù)為0.58%，后者變異系數(shù)則為0.77%。實驗中，通過將定量甘蔗內環(huán)嗪酮標準品與土壤內環(huán)嗪酮標準品，分別添加至有效成分含量已知且精準的樣品中后，在不改變色譜條件的情況下進行測定，可知甘蔗內環(huán)嗪酮與土壤內環(huán)嗪酮的平均回收率各為99.6%與99.4%。

3 結語

本文通過采用高效液相色譜法測定甘蔗和土壤中的環(huán)嗪酮組分，根據(jù)最終的實驗結果可知，使用高效液相色譜法不僅能夠快速完成組分測定工作。同時其可以得到較為精準且可信度較高的分析結果，因此在其他組分測定中也可以選擇合理使用這一分析方法。

參考文獻：

[1]馬建民，段素云，張凡建.高效液相色譜法檢測奶牛血清中脂肪酸濃度[J].畜牧與獸醫(yī)，2019，51（10）：62-65.