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    微小RNA21對鱗癌細(xì)胞生物學(xué)影響的研究

    2019-10-21 09:54:49王巍張連齊楊海燕夏燕云李建豪
    中國保健營養(yǎng) 2019年1期
    關(guān)鍵詞:微小RNA增殖凋亡

    王巍 張連齊 楊海燕 夏燕云 李建豪

    【摘 要】目的:探討微小RNA-21在口腔鱗癌組織中的表達(dá)水平,及其對鱗癌細(xì)胞系中的生物學(xué)功能的影響。方法:實時熒光PCR定量檢測10例口腔鱗癌標(biāo)本中微小RNA21的表達(dá)情況??谇击[癌細(xì)胞系轉(zhuǎn)染微小RNA抑制劑后,檢測其對鱗癌細(xì)胞的增殖、侵襲及凋亡的影響。結(jié)果:微小RNA21在口腔鱗癌組織中表達(dá)明顯上調(diào),與對照組比較有顯著差異。微小RNA21抑制劑轉(zhuǎn)染鱗癌細(xì)胞系后,細(xì)胞的周期發(fā)生了變化,細(xì)胞凋亡比率增高,侵襲能力下降。結(jié)論:微小RNA21在口腔鱗癌組織中表達(dá)上調(diào),微小RNA21可以抑制口腔鱗癌細(xì)胞的凋亡、促進(jìn)癌細(xì)胞增殖,起到了類似原癌基因的作用。

    【關(guān)鍵詞】口腔鱗癌;微小RNA;增殖;凋亡

    【中圖分類號】R36 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A 【文章編號】1004-7484(2019)01-0011-01

    頜面部的惡性腫瘤以口腔鱗狀細(xì)胞癌最多見,所占比例在80%以上,其具有侵襲局部周圍組織及區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的特點(diǎn),晚期還可發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[1]。目前,在手術(shù)中還無法做到腫瘤外科與整形外科完全兼顧,治療后患者多存在明顯的功能障礙和容貌破壞,嚴(yán)重威脅人們的身心健康。微小RNA參與很多腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程,其中微小RNA21在多種實體瘤細(xì)胞中表達(dá)升高,并且起到粗癌基因的角色[2]。在口腔鱗癌的發(fā)生發(fā)展中最重要的機(jī)制是細(xì)胞中原癌基因激活和抑癌基因失活,最終導(dǎo)致細(xì)胞增殖和(或)凋亡調(diào)節(jié)失控[3]。因此,本課題研究微小RNA21在口腔鱗癌細(xì)胞系中的作用。

    1 資料和方法

    1.1 一般資料 本研究中參與的病人均于術(shù)前簽署手術(shù)知情同意書。病理標(biāo)本收集自2017年1月至2017年12月間,就診于哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院。10對口腔鱗癌組織及相應(yīng)的癌旁正常粘膜組織均采集自口腔鱗癌患者初次手術(shù)切除的外科標(biāo)本。全部病人在手術(shù)前均未經(jīng)任何放療和化療。收集到的標(biāo)本立刻放入凍存管中,標(biāo)記清楚儲存于-80℃?;颊叩腡NM分期按照2002年美國癌癥聯(lián)盟-國際抗癌聯(lián)盟TNM分期標(biāo)準(zhǔn)。

    1.2 研究方法 提取組織中的RNA,逆轉(zhuǎn)錄后實時熒光定量PCR檢測細(xì)胞中微RNA21的表達(dá)情況。培養(yǎng)鱗癌細(xì)胞株,收集對數(shù)生長期的細(xì)胞支撐細(xì)胞懸液,實驗分為3組,即空白對照組,陰性對照組和實驗組。利用酶聯(lián)免疫方法檢測細(xì)胞的增值情況,流式細(xì)胞分析的方法檢測細(xì)胞凋亡情況和細(xì)胞周期。

    2 結(jié)果

    2.1 微小RNA21在鱗癌組織中的表達(dá) 10例樣本經(jīng)RNA提取后,稀釋10倍,利用Nano測定RNA濃度,滿足純度的樣本進(jìn)行后續(xù)試驗。實時熒光定量PCR實驗結(jié)果顯示,10例口腔鱗癌患者組織中微小RNA21呈現(xiàn)高表達(dá)。癌周對照組織相對表達(dá)值為1,那么癌組織中平均表達(dá)水平為1.9259±0.3615,癌組織的表達(dá)顯著高于配對的癌旁組織(t=2.15,P<0.05)。

    2.2 細(xì)胞增殖的變化 利用細(xì)胞活性(R)計算公式將對照細(xì)胞統(tǒng)一記作1.0,便于比較不同濃度實驗組的數(shù)據(jù)。三組細(xì)胞培養(yǎng)72小時后,測定細(xì)胞增殖情況,數(shù)據(jù)見表1.微小RNA21抑制劑組細(xì)胞活性受到了抑制,經(jīng)統(tǒng)計學(xué)軟件分析后,有顯著意義。

    2.3 細(xì)胞周期的變化 細(xì)胞轉(zhuǎn)染48小時候,收集細(xì)胞,按照細(xì)胞周期試劑盒操作,使用流式細(xì)胞儀對細(xì)胞周期進(jìn)行檢測,使用細(xì)胞周期分析軟件分析結(jié)果顯示見表2。轉(zhuǎn)染組處于G1期的細(xì)胞所占比例明顯高于非特異轉(zhuǎn)染組和空白組,三者之間進(jìn)行比較,其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);特異性轉(zhuǎn)染組處于S期的細(xì)胞所占比例也明顯低于非特異轉(zhuǎn)染組和空白組,差異同樣具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

    2.4 細(xì)胞凋亡變化檢測結(jié)果 使用BD公司細(xì)胞凋亡軟件,用Annexinv-FITC和PI標(biāo)記后24小時內(nèi)上機(jī)檢測,結(jié)果分析顯示:空白對照組和非特異轉(zhuǎn)染組的細(xì)胞凋亡率分別為8.94%和7.91%,而轉(zhuǎn)染組的細(xì)胞凋亡率是24.24%??瞻捉M合非特異轉(zhuǎn)染組的凋亡比例相似,均小于特異轉(zhuǎn)染組,具有統(tǒng)計學(xué)意義。

    3 討論

    迄今為止,外科手術(shù)仍然是口腔頜面部良惡性腫瘤的主要治療手段,由于頜面部血管和神經(jīng)豐富,且解剖結(jié)構(gòu)復(fù)雜,為手術(shù)治療制造了很大障礙[4]。而基因治療自上世紀(jì)八十年代開始受到廣泛關(guān)注,目前采用RNA干擾技術(shù)針對癌基因和抗癌基因進(jìn)行相關(guān)干擾,阻止或促進(jìn)其表達(dá),從而影響特定細(xì)胞比如瘤細(xì)胞的生物學(xué)活性,改變其細(xì)胞活性,進(jìn)而達(dá)到抑制細(xì)胞生長,延緩腫瘤發(fā)展的目的[5]。

    本課題選擇了10例口腔鱗癌患者的組織標(biāo)本和鱗癌細(xì)胞系作為研究對象,以研究微小RNA21在鱗癌組織中的表達(dá)情況。同時,為了去除標(biāo)本基因表達(dá)的個體差異,在腫瘤資質(zhì)周圍采集了正常組織粘膜標(biāo)本作為對照。研究結(jié)果表明:在口腔鱗癌組織細(xì)胞中微小RNA21的表達(dá)明顯升高,而在正常的腫瘤周圍組織中微小RNA的表達(dá)明顯低于實驗組。這同其他的一些在其他實體腫瘤進(jìn)行的實驗結(jié)果相似,這說明微小RNA21和腫瘤的生物學(xué)性狀的改變關(guān)系密切。本研究結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染微小RNA21抑制劑實驗組,當(dāng)微小RNA21表達(dá)受抑制后,鱗癌細(xì)胞表達(dá)微小RNA21的含量明顯減少,與對照組相比有顯著差異,證實轉(zhuǎn)染成功。將微小RNA21抑制劑轉(zhuǎn)染入實驗鱗癌細(xì)胞系后,使用流式細(xì)胞儀檢測各組細(xì)胞增殖、周期和凋亡的情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn),微小RNA21受抑制后,細(xì)胞的增殖活性受到抑制,凋亡細(xì)胞明顯增多。

    以上結(jié)果均提示微小RNA21在口腔鱗癌細(xì)胞中起著癌基因的作用,能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和侵襲。

    參考文獻(xiàn)

    [1]鄭家偉,李金忠,張志愿. 口腔鱗狀細(xì)胞癌臨床流行病學(xué)研究現(xiàn)狀[J].中國口腔頜面外科雜志,2007;5(2):83-90.

    [2]俞焙秦,劉炳亞.miRNA的生物學(xué)特性和功能[J].上海交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2007;5(27):621-623.

    [3]許馳強(qiáng),肖金剛.轉(zhuǎn)染miR-214抑制物的口腔鱗癌細(xì)胞SCC15增殖、遷移、侵襲能力變化及其機(jī)制[J].山東醫(yī)藥2016;56(47):9-12.

    [4]朱曉寒,付紀(jì),陳謙明,曾昕.微小RNA與口腔癌前病變[J].國際口腔醫(yī)學(xué)雜志,2012,39(7):394-397.

    [5]陳芬,陳林林.口腔疣狀物、口腔鱗癌與癌基因關(guān)系的研究進(jìn)展[J]實用臨床醫(yī)學(xué),2016, 17(1):92-94.

    基金項目:

    黑龍江省教育廳科學(xué)技術(shù)研究項目(課題編號:12511225)

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