農(nóng)田土壤中3種典型飼料添加劑含量分析方法的建立與優(yōu)化

鄧輔財 廖桂紅 陳詩其 嚴(yán)家俊 羅毓鈞 牛顯春

摘要：研究建立了農(nóng)田土壤中氨苯胂酸、洛克沙胂、喹乙醇等3種典型飼料添加劑含量分析方法，并進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明：0.05mol/L磷酸二氫鉀作為提取液的提取效果明顯優(yōu)于rrl醇：水（1：1）、純甲醇2種提取液;超聲提取法也優(yōu)于斡旋振蕩和搖床振蕩提取法;優(yōu)化后的分析方法對上述3種藥物的一次加標(biāo)回收率分別為45.1%-50.0%、54.1%-65.2%和87.4%-100.6%.

關(guān)鍵詞：氨苯胂酸;洛克沙胂;喹乙醇;農(nóng)田土壤;高效液相色譜

中圖分類號：S816.7文獻(xiàn)標(biāo)識碼：Bdoi：10.3969/j.issn.2096-3637.2019.06.004

0引言

氨苯胂酸（Arsanilicacid）又稱阿散酸，是一種5價有機(jī)砷制劑[1]。砷是一種原漿毒，對蛋白的巰基有很強(qiáng)的親和力，砷可與酶蛋白分子上的2個巰基或羥基結(jié)合生成穩(wěn)定的復(fù)合物或環(huán)狀化合物，它們可抑制組織中大量巰基依賴性酶并使其失去活性，即引起細(xì)胞變性，進(jìn)而影響正常代謝細(xì)胞[2]。洛克沙胂（Roxarsone）化學(xué)名為3一硝基-4-輕基一苯胂酸，其分子量為26304，分子式C_{6H6AsN06。洛克沙胂是砷的有機(jī)形態(tài)，可以轉(zhuǎn)化成毒性較強(qiáng)的金屬鹽[3]。有機(jī)胂藥物飼料添加劑（氨基苯胂酸、洛克沙胂）南于具有抗菌、促生長、改進(jìn)動物生產(chǎn)品質(zhì)等作用，在動物養(yǎng)殖方面廣泛應(yīng)用[1]。喹乙醇（Olaquindox）是一種喹嗯琳類藥物，商品名為快育靈[5]。長期使用喹乙醇飼養(yǎng)動物可引起動物中毒。喹乙醇會引起雞中毒，中毒癥狀為不進(jìn)食，雞冠呈紫黑色，缺乏活力，腹瀉，最后掙扎而死。毒理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，喹乙醇及其代謝物會引起動物體光毒反應(yīng)、腎臟毒性反應(yīng)、遺傳毒性、致突變性和致癌性[6]。目前對這些藥物的分析方法大多集中為禽畜農(nóng)產(chǎn)品[7]、飼料[8]、禽畜糞便[9-10]等樣品，對土壤樣品則報道較少。同時靈敏、準(zhǔn)確檢測土壤樣品中氨苯胂酸、洛克沙胂、喹乙醇?xì)埩舻臋z測方法則更是缺乏。因此，研究擬建立一種準(zhǔn)確、快速分析土壤中氨苯胂酸、洛克沙胂、喹乙醇?xì)埩舻姆椒ǎ瑢Ψ乐瓮寥里曈盟幬镂廴竞娃r(nóng)產(chǎn)品安全生產(chǎn)具有重要的理論和現(xiàn)實意義。}

1材料與方法

1.1試劑與藥品試驗用的3種飼用藥物（氨苯胂酸、洛克沙胂、喹乙醇）標(biāo)樣均采購于上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公工司其純度均大于96%，乙腈和甲醇均為色譜純級;冰醋酸和磷酸二氫鉀均為分析純;試驗用水為高純水，配置緩沖溶液用水為超純水。

1.2方法

1.2.1土壤中3種飼用藥物不同提取液加標(biāo)回收率測定準(zhǔn)確稱量1.00009土壤樣品放入離心管中，加入102ug/mI的氨苯胂酸標(biāo)準(zhǔn)品貯備液、138ug/mI的洛克沙胂標(biāo)準(zhǔn)品貯備液和174ug/ml.的喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)品貯備液各1mI，平衡48h后，分別以5mI0.05mol/I磷酸二氫鉀、甲醇與水溶液（1：1）和純甲醇3種試劑作為提取液，分別超聲提取30、60min后，置于離心機(jī)中，4000r/min離心5min，將上清液轉(zhuǎn)移至另一個干凈離心管中。向沉淀土樣中再加入提取液5mL，重復(fù)上述步驟，重復(fù)提取一次，收集并合并提取液，最后用MultivaporP-12型平行蒸發(fā)儀將提取液濃縮至1mI。提取液過0.22um濾膜凈化后，收集于色譜瓶中，待測。同時做不加3種標(biāo)準(zhǔn)貯備液的土樣空白對照。

1.2.2土壤中3種飼用藥物的提取方法回收率對比試驗采用0.05mol/L磷酸二氫鉀提取液5mI溶液，采用3種不同提取方法（斡旋震蕩法、搖床震蕩法、1.3的超聲提取法）對土樣中的上述3種藥飼用物進(jìn)行加標(biāo)回收率的測定，同時做不加土樣處理的空白對照。1.2.3高效液相色譜（HPLC）檢測方法色譜條件：流動相為0.05mol/L磷酸二氫鉀一0.3%乙酸與乙腈溶液的比例為0.9：0.1，流速為1mL/min;檢測波長為266nm，進(jìn)樣體積為20uL，平衡時間為30min，采用Waters018色譜柱，柱溫為30℃。

2結(jié)果與分析

2.1提取液的優(yōu)化將0.05mol/L磷酸二氫鉀、甲醇與水（1：1）、純甲醇3種溶液作為提取液時超聲30min和60min加標(biāo)回收率見圖1、圖2、圖3。氨苯胂酸、洛克沙胂和喹乙醇3種飼用藥物均能被磷酸二氫鉀提取液超聲提取出來，3種藥物的30min超聲提取回收率分別為47.7%、58.3%和92.4%，60min提取回收率分別為62.7%、64.9%和116.9%;30min和60min提取時間的回收率差異不大。而甲醇與水（1：1）和純醇2種提取液不能同時把3種物質(zhì)提取出來。另外，采用這些提取液提取空白土樣時均未檢出待測目標(biāo)物，所以這些提取液不會對實際土樣的測定產(chǎn)生干擾。

2.2提取方法的優(yōu)化

目前對上述含有3種飼用藥物的實際環(huán)境樣品的前處理方法研究主要有消化、斡旋震蕩、搖床震蕩、超聲等提取方法，如王付民采用1111HNO₃：H₂O₂（V：V）對豬場附近稻田土壤中的阿散酸進(jìn)行消化提取;張沖[12]采取了超聲方法對土壤中喹乙醇進(jìn)行提取。但這些提取方法要么繁瑣操作不便，要么僅局限于單獨(dú)含有砷[11]或者喹乙醇樣品[10.12]， 對3種物質(zhì)同時存在，需要對3種物質(zhì)同時進(jìn)行前處理的情況卻鮮見報道。故研究采用0.05mol/L磷酸二氫鉀提取液5mL溶液，采用3種不同提取方法（斡旋震蕩20min、搖床震蕩1h、超聲提取法）對上述3種飼用藥物共存的土樣，同時進(jìn)行加標(biāo)回收率測定，以探索同時提取3種藥物的可行性，試驗結(jié)果見圖4。3種方法中超聲提取法的回收率最高，其余2種方法均太低，不宜使用。張沖[12]對比超聲破碎儀提取、振蕩提取和超聲提取3種不同提取方法對土壤中喹乙醇的提取效率時也發(fā)現(xiàn)超聲提取效率最高，與研究的結(jié)果大致一致。故研究確定最優(yōu)的提取方法：采用磷酸二氫鉀作為提取液進(jìn)行超聲提取，超聲時間設(shè)為30min，且為保證提取完全，提取次數(shù)為2次。

3 結(jié)束語

研究優(yōu)化了土壤中3種飼用藥物的分析檢測方法。3種飼用藥物均能被磷酸二氫鉀提取液超聲提取出來，3種藥物的30min超聲提取回收率分別為47.7%、58.3%和92.4%，60min提取回收率分別為62.7%、64.9%和116.9%;30min和60min提取時間的回收率差異不大。0.05 mol/L磷酸二氫鉀作為提取液的提取效果明顯優(yōu)于甲醇與水（1：1）、純甲醇2種提取液;超聲提取法也優(yōu)于斡旋震蕩和搖床震蕩提取法。

參考文獻(xiàn)

[1]宋學(xué)初.氨苯胂酸在畜禽飼料中的應(yīng)用狀況[J]禽業(yè)科技，1997（4）：48.

[2]葉曉川，楊祥良，徐輝碧.納米雄黃研究進(jìn)展[J].化學(xué)進(jìn)展，2009，21（5）：934-939

[3]馬一冬洛克沙胂在土壤中降解的初步研究[D].揚(yáng)州：揚(yáng)州大學(xué)，2009.

[4]Jones F T.A broad view of arsenic[J]. Poultry Science， 2007.86：2-14.

[5]董堯，王前勇.喹乙醇的應(yīng)用研究進(jìn)展[J]畜牧獸醫(yī)雜志，2008（3）：63-65.67.

[6]楊波.喹乙醇在豬可食性組織中殘留的生理藥代學(xué)模擬研究[D].武漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，2010.

[7] Abdul Q S，Tasneem G K. Muhammad B A. et al.Accumulation of arsenic in different fresh water fish species-potential contribution to high arsenic intakes[J]. FoodChemistry， 2009. 112： 520-524.

[8]袁慧，陳競峰，向建洲，等.齋禽配合飼料中砷的污染量及其分析報告[J]湖南飼料，2000（3）：2-3.

[9] Cortinas I，F(xiàn)ield J A. Kopplin M. et al. Anaerobicbiotransformation of roxarsone and related N-substitutedphenylarsonic acids[J]. Environmental science& technology，2006. 40（9）：2 951-2 957.

[IO]李維.飼料添加劑喹乙醇在豬糞中的殘留檢測及吸附特征研究[D].南京：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)，2009.

[1l]王付民.陳杖榴，孫永學(xué)，等有機(jī)胂飼料添加劑對豬場周圍及農(nóng)田環(huán)境污染的調(diào)查研究[J].生態(tài)學(xué)報，2006（ l）：154-162.

[12]張沖.氟苯尼考、喹乙醇的環(huán)境行為及污染控制技術(shù)研究[D].南京：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)，2010.