UPLC-MS/MS測(cè)定復(fù)方甘草片中甘草酸含量

湯麗昌

摘 要：目的：建立超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)測(cè)定復(fù)方甘草片中甘草酸。方法：采用Agilent EclipsePlus-C18色譜柱（2.1 mm×50 mm，1.8 μm），以0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸水（70∶30，V/V）為流動(dòng)相進(jìn)行洗脫，流速為0.2 mL·min-1，柱溫30 ℃，在三重四級(jí)桿檢測(cè)器中采用正離子多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式（MRM）進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果：甘草酸在0.313 2～6.264 0 μg·mL-1（r=0.999 9）呈良好線性關(guān)系，甘草酸加樣回收率為98.6%，RSD=1.07%。結(jié)論：該方法靈敏度高、抗干擾性強(qiáng)且準(zhǔn)確性好，可適用于復(fù)方甘草片中甘草酸的含量測(cè)定。

關(guān)鍵詞：復(fù)方甘草片;UPLC-MS/MS;甘草酸

Abstract：Objective： To establish a method for quantitative determination of glycyrrhizic acid in liquorice tablets by UPLC-MS/MS. Method： The Agilent EclipsePlus-C18 chromatographic column （2.1 mm×50 mm， 1.8 μm） was used. The 0.1% formic acid acetonitrile solution-0.1% formic acid （70∶30， V/V） was used. The flow rate was 0.2 mL·min-1. Column temperature was kept at 30 ℃. The detection was performed on a triple quadruple mass spectrometry detector using multiple reaction monitoring （MRM） model for positive ions. Results： The linear range of glycyrrhizic acid oride was 0.313 2～6.264 0 μg·mL-1?（r=0.999 9）， the average recovery was 98.6 % and relative standard deviation was 1.07 %（n=6）. Conclusion： The method is sensitive， specific and accureate and can be used for the determination of glycyrrhizic acid in compound licorice tablets.

Key words：Compound liquorice tablets; UPLC-MS/MS; Glycyrrhizic acid

中圖分類號(hào)：R927.2

復(fù)方甘草片為常用復(fù)方制劑，其成分有甘草浸膏粉、阿片粉、樟腦、八角茴香油和苯甲酸鈉等，是鎮(zhèn)咳祛痰類非處方藥品[1]。復(fù)方甘草片的主要成分為甘草酸，目前主要采用HPLC-UV測(cè)定復(fù)方甘草片中甘草酸的含量，而復(fù)方制劑成分復(fù)雜，其有效成分的測(cè)定容易受到干擾，甘草酸峰與其他成分峰難以分離，重復(fù)性差，達(dá)不到分析要求[2-5]。UPLC-MS/MS具有很好的選擇性和靈敏度，特別適用于復(fù)雜樣品的分析，因此本文建立了UPLC-MS/MS法測(cè)定復(fù)方甘草片中甘草酸的含量，該方法快速、簡(jiǎn)單、抗干擾性強(qiáng)，能有效地用于復(fù)方甘草片中甘草酸的質(zhì)量控制。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

（1）儀器。高效液相色譜儀（型號(hào)：1290，美國(guó)安捷倫公司）;三重串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜儀（型號(hào)：G6460，美國(guó)安捷倫公司）;S1-T256渦旋混合器;超聲波清洗機(jī)（型號(hào)：CPX5800H-C，美國(guó)必能信上?？茖?dǎo)儀器有限公司）;萬(wàn)分之一電子天平（型號(hào)：XA205DU，上海梅特勒-托利多儀器有限公司）。

（2）試劑。甘草酸對(duì)照品（批號(hào)：G-004-170414，供實(shí)驗(yàn)室藥品檢驗(yàn)用，成都瑞芬思生物科技有限公司）;3批復(fù)方甘草片（批號(hào)分別為181219、190202、190303）均為市售品;甲醇、甲酸（色譜純，Thermo）;超純水由Milipore制備。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 色譜條件

Agilent EclipsePlus-C18色譜柱（2.1 mm×50 mm，1.8 μm）;流動(dòng)相：0.1甲酸乙腈-0.1%甲酸水（70∶30，V/V），流速為0.2 mL·min-1;柱溫：30 ℃;進(jìn)樣量：5 μL。

1.2.2 質(zhì)譜條件

采用電噴霧負(fù)電離源模式（Electronic spray ion，ESI）;掃描方式為多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（Multiple reaction monitoring，MRM）;霧化氣壓力：30 psi;干燥氣溫度：300 ℃;干燥氣流速：8 L·min-1;毛細(xì)管電壓：4 000 V;碎裂電壓：165 V;定量離子碰撞能：45 eV，定性離子碰撞能：50 eV。

1.2.3 溶液的配制

（1）對(duì)照品溶液的制備。精密稱取甘草酸對(duì)照品15.67 mg于50 mL容量瓶，加甲醇，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備溶液，精密吸取10 mL儲(chǔ)備液，置于100 mL容量瓶中，加甲醇，搖勻，即得每1 mL含有甘草酸31.32 μg的標(biāo)準(zhǔn)溶液，備用。

（2）樣品溶液的制備。取批次為190202的復(fù)方甘草片20片，稱重，研細(xì)，稱取相當(dāng)于1片的量置于100 mL量瓶中，加甲醇-水（1∶1）適量，超聲提取處理（300 W，250 kHz）30 min，取出，冷卻，用甲醇-水（1∶1）稀釋至刻度，搖勻，過(guò)濾，精密量取濾液1mL置于100mL容量瓶中，用甲醇-水（1∶1）稀釋至刻度，搖勻后用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，濾液即為供試品溶液，備用。