比較6種油茶花、葉和籽的多酚含量及其抗氧化活性

陳佩云　湛曄　周安寧　唐淑芬

摘 要：本文采用超聲輔助有機(jī)溶劑提取法提取6種不同品種的油茶花、葉和籽的多酚。結(jié)果表明，油茶籽多酚含量高于其他組織，油茶籽多酚含量最高的品種為衡陽紅花大果（36.03±2.19）mg·g-1 DW;油茶花多酚含量最高的品種為衡陽紅花大果（21.36±1.01）mg·g-1 DW。利用ORAC法對各品種油茶花、葉和籽的多酚提取液進(jìn)行檢測，其中最高為衡陽紅花大果油茶種子ORAC值（851.21±9.45）μmol TE·g-1 DW。油茶花、葉和籽多酚與ORAC值存在較好的線性關(guān)系（R2>0.80）。

關(guān)鍵詞：油茶;多酚;氧自由基吸收能力

Abstract：In this paper， ultrasonic assisted organic solvent extraction was used to extract polyphenols from six different varieties of Camellia oleifera， including flowers， leaves and seeds. The content of polyphenols in Camellia oleifera seeds was higher than that in other tissues. The highest polyphenol content of Camellia oleifera seeds was （36.03±2.19） mg·g-1 DW; the highest polyphenol content of Camellia oleifera seeds was （21.36±1.01）mg·g-1 DW. The highest ORAC value of Camellia oleifera seeds was （851.21±9.54）μ mol TE·g-1 DW. There was a good linear relationship between ORAC and polyphenols of Camellia oleifera （R2>0.80）.

Key words：Camellia oleifera; Polyphenol; ORAC

中圖分類號：TS229

油茶（Camellia oleifera Abel.）是世界四大木本油料之一，與油棕、油橄欖和椰子并稱為世界四大木本食用油料植物[1]。油茶生長在中國南方亞熱帶地區(qū)的高山及丘陵地帶，是中國特有的一種純天然高級油料[2]，主要集中在浙江、江西、河南、湖南、廣西。此外，在越南、泰國、馬來西亞和日本等國也有少量栽培[3]。

目前，我國對油茶的開發(fā)利用主要集中在油茶籽、油茶餅粕、茶籽殼等方面[4]，而對花、葉的加工利用較少。油茶籽含油30%以上，供食用及潤發(fā)、調(diào)藥，可制蠟燭和肥皂，也可作機(jī)油的代用品[5];茶籽粕中含有茶皂素、茶籽多糖、茶籽蛋白等，它們都是化工、輕工、食品、飼料工業(yè)產(chǎn)品等的原料[6];茶籽殼還可制成糠醛、活性炭等[7];茶樹的灰洗頭可殺死虱子包括蟲卵[8]。油茶花作為油茶樹的生殖器官，集中了油茶中的營養(yǎng)物質(zhì)，富含蛋白質(zhì)、氨基酸、還原糖、多糖、多酚、黃酮、花青素和維生素等生物活性成分[9]。油茶葉中富含多酚、黃酮、多糖、三萜皂苷和甾體等物質(zhì)，其提取液具有降血糖、抗凝血、抗血栓形成等功效[10-11]。而豐富的油茶花、葉資源幾乎只用于焚燒堆肥，遭到了極大的浪費，若能有效利用油茶花、葉中的活性成分，可以提高油茶的經(jīng)濟(jì)價值。油茶花、葉和籽中的主要抗氧化活性物質(zhì)是多酚等成分，溶液萃取法是目前國內(nèi)應(yīng)用最為廣泛的油茶餅粕提取方法之一[12]。而ORAC法是國際上檢測抗氧化活性的權(quán)威方法之一[13]。研究油茶花、葉和籽中的天然抗氧化物，對油茶資源的再利用具有深遠(yuǎn)意義。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 原料和試劑

油茶的花、葉、種子，分別摘自江西、安徽、湖南衡陽3個產(chǎn)地，安徽和江西產(chǎn)地均屬于市售，衡陽油茶葉由湖南大三湘油茶資源有限公司油茶實驗基地提供。

甲醇、丙酮、無水乙醇：分析純，天津試劑公司;熒光素鈉鹽、沒食子酸、ABAP（2，2-偶氮二異丁基脒二鹽酸鹽）、Trolox標(biāo)準(zhǔn)品：Sigma公司;福林酚：分析純，安徽博美生物制劑有限公司;96孔黑色酶標(biāo)板：康寧公司;碳酸鈉、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀：分析純，廣東省化學(xué)試劑工程技術(shù)研究開發(fā)中心。

1.1.2 儀器

DK-S24電子恒溫水浴鍋，上海精宏實驗設(shè)備有限公司生產(chǎn);JY92-IIN超聲細(xì)胞破碎儀，寧波新芝生物科技股份有限公司生產(chǎn);2000型可見分光光度計，尤尼可（上海）儀器有限公司生產(chǎn);FLUOstar酶標(biāo)儀，美國Omega公司生產(chǎn)。

1.2 實驗方法

1.2.1 樣品處理

將經(jīng)人工挑選的無病蟲害的不同品種油茶花、葉和種子除去多余枝條后，沖洗3次，于50℃干燥箱中烘至恒重，制粉，過60目篩。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

配制0.1 mg·mL-1的沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)母液，分別吸取0、0.1、0.2、0.3、0.4 mL和0.5 mL母液于6個10 mL容量瓶中，加入1 mL福林酚顯色劑和2 mL15%的碳酸鈉溶液，定容;室溫下反應(yīng)2 h后測A760，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線[13]。

1.2.3 總多酚含量的測定

移取0.5 mL稀釋后的多酚提取液于10 mL容量瓶中，記錄稀釋因子，加入1 mL福林酚顯色劑和2 mL的15%碳酸鈉溶液，定容，室溫下反應(yīng)2 h，測A760，據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算沒食子酸含量[14]。

1.2.4 油茶花、葉和種子多酚的提取

以70%乙醇作為溶劑，5 g樣品，料液比1∶15，60 ℃超聲萃取0.5 h，重復(fù)3次合并濾液，定容待測。

1.2.5 ORAC值測定

移取20 μL樣品、空白、Trolox標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液，將40 μL PBS加入一個微型板孔中，在酶標(biāo)儀內(nèi)37 ℃下孵育10 min;各孔加入200 μL熒光素溶液37 ℃下孵育20 min;加入 20 μL ABAP溶液（除了加入40 μL?PBS的孔）啟動反應(yīng)后迅速測量。酶標(biāo)儀的測定條件為：激發(fā)波長485 nm，發(fā)射波長535 nm，每周期前振蕩時間8 s、振蕩寬度4 mm，測試周期35個[15-17]。

1.2.6 沒食子酸的當(dāng)量標(biāo)準(zhǔn)曲線

配制0.1mg·mL-1沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)母液，稀釋制成2、4、6、8 μg·mL-1和10 μg·mL-1的沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。用方法1.2.5檢測，制成標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2 結(jié)果與分析

2.1 油茶多酚粗提物的總酚含量測定

根據(jù)實驗方法1.2.2，測得標(biāo)準(zhǔn)曲線公式為y=1.144 5x

-0.169 7，R2=0.997 4。由標(biāo)準(zhǔn)曲線方程和1.2.3得出各樣品總酚含量結(jié)果如表1所示，其中衡陽紅花大果油茶籽多酚含量最高（36.03±2.19）mg·g-1 DW。油茶的3種不同器官組織花、葉和籽的多酚含量依次是油茶籽>油茶花>油茶葉;油茶花中，紅花品種的多酚含量明顯高于白花品種。衡陽地區(qū)采集的樣品的總酚含量比安徽和江西地區(qū)高，可能是運輸過程造成的成分損失。有研究表明，油茶品種的多酚含量與生長海拔成正比，且紅花大果品種是油茶中的優(yōu)良品種，富含各類天然功能成分[18]。

2.2 油茶多酚粗提物的抗氧化活性分析

2.2.1 油茶多酚粗提物的ORAC值分析

氧自由基吸收能力（Oxygen radical absorbance capacity，ORAC）又被稱為抗氧化能力指數(shù)，是近年來國際上普遍使用的測定抗氧化能力新標(biāo)準(zhǔn)，ORAC值與其抗氧化能力成正相關(guān)[17]。

Trolox標(biāo)準(zhǔn)曲線和熒光衰減圖，如圖1、圖2所示。Trolox的濃度與net AUC呈很好的線性關(guān)系。所有樣品的穩(wěn)定性試驗的變異系數(shù)為都符合美國農(nóng)業(yè)部許可的ORAC分析結(jié)果誤差的變異系數(shù)≤15%要求。ORAC值的單位為μmol Trolox當(dāng)量/g樣品。

由圖3所示，測得的結(jié)果在（34.24±1.33）～（851.21±9.45）μmol TE·g-1，樣品總酚含量與ORAC值的相關(guān)系數(shù)R2>0.80，具有較強(qiáng)的線性關(guān)系，說明多酚是油茶的主要抗氧化活性成分，但依然存在少量其他抗氧化活性物質(zhì)。其中油茶葉多酚與ORAC值之間線性關(guān)系最強(qiáng)（R2=0.87），其次是油茶籽（R2=0.86）、油茶花（R2=0.80）。

2.2.2 油茶多酚粗提物樣品的抗氧化活性的評價

通過Trolox標(biāo)準(zhǔn)曲線和1.2.6，可以得到一條沒食子酸與Trolox當(dāng)量曲線y=43.648x+12.95，R2=0.9932。圖4為各樣品多酚含量與當(dāng)量的對比圖，衡陽產(chǎn)的白花小果油茶籽和紅花大果油茶籽多酚濃度比沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品的當(dāng)量濃度較高，說明樣品的抗氧化活性比沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品的抗氧化活性更強(qiáng)，分別高4.45%和1.07%。以乙醇為溶劑提取油茶花、葉和籽多酚的同時，茶皂素、茶多糖以及蛋白等物質(zhì)也同樣析出，導(dǎo)致樣品的當(dāng)量濃度高于沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品的濃度。其他多數(shù)樣品均比沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品當(dāng)量濃度相近，濃度相差1.06%～48.36%，這是因為油茶花、葉和籽多酚提取物中不僅含有沒食子酸，還有兒茶素、槲皮素等，而不同的多酚物質(zhì)其抗氧化活性能力不同。

3 結(jié)論

本研究主要對6個品種的油茶花、葉和籽的多酚含量及抗氧化活性進(jìn)行了分析對比。其中油茶籽多酚含量>油茶花>油茶葉;油茶花中紅花多酚含量高于白花;油茶籽多酚含量最高的品種為衡陽紅花大果（36.03±2.19）mg·g-1DW;油茶花多酚含量最高的品種為衡陽紅花大果（21.36±1.01）mg·g-1DW;油茶葉多酚含量最高品種為衡陽白花小果（4.62±0.28）mg·g-1

DW。樣品的抗氧化活性與沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品相近在1.06%～48.36%，甚至衡陽產(chǎn)白花小果油茶籽和紅花大果油茶籽抗氧化活性更強(qiáng)，分別高4.45%和1.07%。沒食子酸丙酯是常用的食用油抗氧化劑，而相同濃度油茶花、葉和籽的抗氧化活性與沒食子酸相近甚至較高，說明其在天然油脂抗氧化劑的開發(fā)利用上具有很高的研究價值。

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