一種低污染的荷花組培快繁技術(shù)研究

鐘培星 王亮生 鄧必平 宋祥蘭 朱江華

摘? ?要：對一種低污染的荷花組培快繁技術(shù)進(jìn)行了研究，闡述了外植體、萌發(fā)、增殖等技術(shù)要點，供參考。

關(guān)鍵詞：低污染;荷花組培;快繁技術(shù);研究

文章編號： 1005-2690（2019）16-0023-01? ? ? ?中圖分類號： S682.2? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)志碼： B

荷花（Nelumbo nucifera Gaertner）為蓮科（Nelumbonaceae）蓮屬（Nelumbo）的宿根水生花卉，原產(chǎn)于溫帶和亞洲熱帶地區(qū)，遍及世界各地，其東至日本、朝鮮半島，西起亞洲西部的里海，南至澳大利亞北部，北迄俄羅斯。主要生長在中國、日本、泰國、印度、斯里蘭卡、印度尼西亞、菲律賓一帶。中國是荷花的世界分布中心，分布范圍也極廣，南起北緯 18.2°的海南島三亞，北至北緯48.2°的黑龍江撫遠(yuǎn)縣，東臨東經(jīng)121.7°的臺灣，西達(dá)東經(jīng)85.8°的新疆天山北麓。垂直分布可達(dá)秦嶺、神農(nóng)架，在海拔2 780 m的云南寧蒗縣水興鎮(zhèn)附近亦有栽培[1-2]。

荷花是中國傳統(tǒng)名花和重要的藥食同源經(jīng)濟(jì)作物。我國荷花品種資源豐富，傳統(tǒng)的繁殖及保存方法主要采用分藕、缸栽或池植。目前，在我國荷花仍在采用傳統(tǒng)的繁殖方法，即分藕繁殖和大面積缸栽或池栽[3]。荷花品種多是自然雜交種或人工雜交種，其優(yōu)良性狀不能夠通過這些繁殖方式很好地傳承下去。由于荷花的分藕繁殖系數(shù)較低（一般為1∶10），這個問題已成為制約荷花產(chǎn)業(yè)發(fā)展的主要障礙之一。此外，有些品種因長勢較弱，品種保存比較困難，為解決此問題，荷花組織培養(yǎng)是一個很好的突破口。

1? ?技術(shù)

關(guān)于蓮屬植物的離體培養(yǎng)研究，何碧珠、劉玫、毛瑞麗等人各自分別對荷花的莖尖進(jìn)行了離體組織培養(yǎng)研究[4-6]，但莖尖組織培養(yǎng)污染大，消毒等操作繁雜，鄭麗利用胚開展了培養(yǎng)研究[7]。為了充分利用優(yōu)良品種資源，為商品化生產(chǎn)提供大量的優(yōu)良種苗，同時又能為珍貴品種的保存開辟新途徑，在嘗試了多種荷花組培繁育技術(shù)后，發(fā)現(xiàn)了一種低污染的快繁方法，現(xiàn)將其技術(shù)要點概述如下。

1.1? ?外植體

將青綠子時期（如圖1左上所示）的蓮子清洗干凈后，用75%酒精浸潤40 s，無菌水漂洗后放入2%的NaClO溶液中消毒10～15 min，再用無菌水漂洗5～6次，清除殘留的NaClO。用無菌濾紙吸干外植體表面的水分，將外殼（外種皮）剝除，并用鑷子去除內(nèi)種皮膜待用。

1.2? ?萌發(fā)

將種子接種于萌發(fā)培養(yǎng)基上，萌發(fā)培養(yǎng)基組成為MS+6-BA 0.5 mg/L+2，4-D 0.2 mg/L+3%蔗糖+0.65%瓊脂。培養(yǎng)溫度為25 ℃，光照為16 h/d，光照強(qiáng)度為2 000 lx。6 d左右種子萌動發(fā)芽，胚芽增大突破子葉的束縛，之后生長加快，特別是胚軸迅速伸長，然后長出葉柄，頂端卷曲的小葉逐漸伸展開成小錢葉（如圖1右上所示）。

1.3? ?增殖

將萌發(fā)培養(yǎng)20 d左右的小苗去除子葉后，轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基上擴(kuò)大培養(yǎng)，增殖培養(yǎng)基采用固液混合培養(yǎng)基，固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基的成分為MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.25 mg/L +3%蔗糖。二者之間不同的是，固體培養(yǎng)基中加入0.65%的瓊脂起凝固作用。培養(yǎng)一段時間后，可見其增殖生長出很多小苗（如圖1左下所示）。

1.4? ?生根

將經(jīng)過增殖培養(yǎng)的叢生苗切分開，保留2～3個蘗為1株，將其接種到生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)根的生長。生根培養(yǎng)基由固液培養(yǎng)基組成，成分為MS+6-BA 0.1 mg/L+NAA 1 mg/L +3%蔗糖。同樣，固體培養(yǎng)基中加入0.65%的瓊脂。7 d左右小苗陸續(xù)長出紅色須根（如圖1右下所示）。再經(jīng)10 d以上的培養(yǎng)可形成大量根系，可用于下一步煉苗馴化。

1.5? ?煉苗

將已生根的植株組培瓶瓶蓋去掉，蓋上扎有小洞的保鮮膜，先將其在培養(yǎng)室里煉苗3 d，然后去掉封口膜再煉苗2 d。隨后取出植株，洗凈根上附帶的培養(yǎng)基，移植到配制好的基質(zhì)中，基質(zhì)配方為糖泥∶草炭∶蛭石=2∶1∶1，先加水?dāng)嚢璩赡酀{狀，靜置2～3 d后遮陰，套塑料薄膜保持空氣濕度85%左右，置于室溫 20～25 ℃環(huán)境中，煉苗期間經(jīng)常添水以保持盆內(nèi)有1 cm左右高的水面，成活后隨著苗的長高可增加水位。通過幾批煉苗發(fā)現(xiàn)，雖然少部分苗的下部老葉有枯萎現(xiàn)象，但成活率可達(dá)80%以上。

2? ?討論

試驗發(fā)現(xiàn)，黃子時期的蓮子胚還沒有發(fā)育完好，黑褐子時期果殼（外種皮）太硬不容易剝除，而青綠子時期的蓮子種胚發(fā)育成熟，容易去除果殼，萌發(fā)率高且生長整齊，故選用青綠子時期的蓮子作為外植體。由于有外殼的保護(hù)，使用NaClO消毒25 min對里面的胚也沒有傷害，所以，消毒后的外植體染菌率幾乎為零，這是荷花組培選用青綠蓮子比荷花莖尖更加方便有利的原因。而且，消毒用的NaClO毒性比HgCl2低很多，因后者屬于危險化學(xué)品而受管制，在很多正規(guī)的實驗室已經(jīng)禁止使用。接種時把內(nèi)種皮那層膜剝除，可以減輕其對胚芽的束縛，更容易萌發(fā)生長。萌發(fā)培養(yǎng)和生根培養(yǎng)采用固液培養(yǎng)基，能很好地模擬荷花的水生環(huán)境，下層固體培養(yǎng)基除了提供養(yǎng)分外，還起到了固定植株的作用，上層液體培養(yǎng)基模擬水生環(huán)境增加培養(yǎng)瓶內(nèi)的濕度，與純固體培養(yǎng)基相比，葉柄和葉片更不容易干枯褐化，生長得更好。

參考文獻(xiàn)：

[ 1 ] 張行言，王其超.荷花（中國名花叢書）[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1998.

[ 2 ] 王其超，張行言.中國荷花品種圖志[M].北京：林業(yè)出版社，2005.

[ 3 ] 李志炎，林正秋.中國荷文化[M].杭州：浙江人民出版社，1995.

[ 4 ] 何必珠，曾明星，趙時端，等.建蓮莖尖離體培養(yǎng)研究初報[J].福建農(nóng)林大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版，2002，31（1）：59-61.

[ 5 ] 劉玫，孫崇皮.幾種珍貴荷花品種組織培養(yǎng)技術(shù)研究[J].浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2002（3）：108-111.

[ 6 ] 毛瑞麗.碗蓮莖尖組織培養(yǎng)技術(shù)研究[D].鄭州：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)，2008.

[ 7 ] 鄭麗.荷花胚培養(yǎng)與切花保鮮技術(shù)研究[D].武漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，2010.

（收稿日期：2019-09-05）