結(jié)直腸癌患者血清中免疫相關(guān)因子的表達(dá)水平及臨床意義

郭小艷

(陜西省西安市第九醫(yī)院 腫瘤內(nèi)科, 陜西 西安, 710054)

結(jié)直腸癌(CRC)是臨床最為常見的惡性病癥之一。2015年，中國CRC的發(fā)病率和病死率已位居惡性腫瘤的前5位，并呈現(xiàn)明顯上升趨勢[1-4]。CRC的發(fā)病機(jī)制目前尚未完全明確，然而多個(gè)研究[5-6]發(fā)現(xiàn), CRC的發(fā)生發(fā)展與機(jī)體慢性炎癥反應(yīng)及免疫功能紊亂或缺陷關(guān)系密切。炎癥因子是免疫細(xì)胞產(chǎn)生的調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能、在細(xì)胞間傳遞信息的活性物質(zhì)。機(jī)體長期亞臨床炎癥或免疫功能紊亂導(dǎo)致機(jī)體內(nèi)環(huán)境紊亂，進(jìn)而誘發(fā)腫瘤[7]。本研究擬通過測定CRC患者外周血自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)、CD3+、CD4+、CD8+、CD8+CD28-含量及血清腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、干擾素-γ(IFN-γ)、白細(xì)胞介素(IL)-2、IL-22、IL-8等免疫相關(guān)因子水平，探究各指標(biāo)在CRC臨床診斷、病理進(jìn)程及預(yù)后判斷中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2015年5月—2018年8月本院腫瘤內(nèi)科收治的80例CRC患者(腸癌組)、54例慢性腸炎患者(良性組)及36例健康志愿者(健康組)作為研究對象, 3組入選者均自愿簽署知情協(xié)議書。腸癌組男55例，女25例，年齡42～75歲，平均(58.58±5.61)歲; 良性組男37例，女17例，年齡45～72歲，平均(58.66±5.59)歲; 健康組男25例，女11例，年齡48～75歲，平均(58.41±5.66)歲。腸癌組患者均經(jīng)病理學(xué)及影像學(xué)檢查確診，且未接受手術(shù)切除或其他輔助治療, TNM分期為Ⅰ期17例、Ⅱ期37例、Ⅲ期15例、Ⅳ期11例; 良性組患者則被確診為慢性腸炎; 健康組志愿者心、肝、脾、腎、肺等臟器無重大疾病，且無家族腫瘤史。3組入選者性別、年齡分布比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05), 可行組間對比分析。

1.2 研究方法

入選者均于清晨空腹條件下取肘靜脈血樣5 mL, 用于外周血NK細(xì)胞及T淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD8+、CD8+CD28-含量測定，并用于血清免疫相關(guān)因子TNF-α、IL-2、IFN-γ、L-22、IL-8水平測定。外周血NK、CD3+、CD4+、CD8+、CD8+CD28-測定采用流式細(xì)胞儀[貝克曼庫爾特商貿(mào)(中國)有限公司，型號DxFLEX]; 血清TNF-α、IL-2、IFN-γ、L-22、IL-8均采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定，所用試劑盒均購自上?；鈱?shí)業(yè)有限公司，檢測過程均嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

本研究數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理。3組患者性別、年齡分布行均衡性檢驗(yàn); 3組外周血免疫細(xì)胞及血清TNF-α、IL-2、IFN-γ、L-22、IL-8比較行單因素ANOVA分析; CRC病變程度與外周血免疫細(xì)胞及血清TNF-α、IL-2、IFN-γ、L-22、IL-8相關(guān)性采用非參數(shù)Kruskal Wallis秩和檢驗(yàn)分析。檢驗(yàn)因子為α=0.05, 以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 3組受試者外周血NK細(xì)胞及T淋巴細(xì)胞亞群含量比較

3組受試者外周血NK細(xì)胞、CD3+、CD4+、CD8+、CD8+CD28-比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與健康組相比，良性組和腸癌組患者外周血CD8+、CD8+CD28-含量顯著上升，NK細(xì)胞、CD3+、CD4+含量顯著下降(P<0.05); 與良性組相比，腸癌組CD8+、CD8+CD28-含量顯著上升，NK細(xì)胞、CD3+、CD4+含量顯著下降(P<0.05)。見表1。

表1 3組外周血NK細(xì)胞及T淋巴細(xì)胞亞群含量比較 %

NK細(xì)胞: 自然殺傷細(xì)胞。與健康組比較, *P<0.05; 與良性組比較, #P<0.05。

2.2 3組受試者血清免疫相關(guān)因子水平比較

3組受試者血清TNF-α、IL-2、IFN-γ、L-22、IL-8水平比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與健康組相比，良性組和腸癌組患者血清TNF-α、IL-22及IL-8水平均顯著上升，而血清IL-2和IFN-γ水平顯著下降(P<0.05); 與良性組相比，腸癌組TNF-α、IL-22及IL-8水平顯著上升，血清IL-2和IFN-γ水平顯著下降(P<0.05)。見表2。

表2 3組受試者血清免疫相關(guān)因子水平比較 pg/mL

TNF-α: 腫瘤壞死因子-α; IL-2: 白細(xì)胞介素-2; IFN-γ: 干擾素-γ; IL-22: 白細(xì)胞介素-22; IL-8: 白細(xì)胞介素-8。

與健康組比較, *P<0.05; 與良性組比較, #P<0.05。

2.3 CRC患者免疫相關(guān)指標(biāo)與臨床分期的相關(guān)性分析

不同臨床分期CRC患者外周血NK細(xì)胞與T淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD8+、CD8+CD28-含量及血清TNF-α、IL-2、IFN-γ、IL-22、IL-8比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 從TNMⅠ期到TNMⅣ期，患者外周血CD8+、CD8+CD28-含量和血清TNF-α、IL-22、IL-8水平呈顯著升高趨勢, NK細(xì)胞、CD3+、CD4+含量和IL-2、IFN-γ水平呈顯著下降趨勢。見表3、4。

表3 不同臨床分期CRC患者外周血NK細(xì)胞及T淋巴細(xì)胞亞群含量比較 %

NK細(xì)胞: 自然殺傷細(xì)胞。與TNMⅠ期比較, *P<0.05; 與TNMⅡ期比較, #P<0.05; 與TNMⅢ期比較, △P<0.05。

表4 不同臨床分期CRC患者血清免疫相關(guān)因子水平比較 pg/mL

TNF-α: 腫瘤壞死因子-α; IL-2: 白細(xì)胞介素-2; IFN-γ: 干擾素-γ; IL-22: 白細(xì)胞介素-22; IL-8: 白細(xì)胞介素-8。

與TNMⅠ期比較, *P<0.05; 與TNMⅡ期比較, #P<0.05; 與TNMⅢ期比較, △P<0.05。

3 討 論

腫瘤的發(fā)生發(fā)展不僅與細(xì)胞內(nèi)基因異常表達(dá)有關(guān)，而且與細(xì)胞所處微環(huán)境密切相關(guān)，腫瘤宿主免疫狀況則是微環(huán)境之一，被認(rèn)為是惡性腫瘤發(fā)生的溫床，而T淋巴細(xì)胞則屬于腫瘤微環(huán)境的重要成員。腫瘤細(xì)胞逃避免疫監(jiān)測可對T淋巴細(xì)胞的浸潤、活化及效應(yīng)功能等產(chǎn)生強(qiáng)烈抑制作用，從而使患者產(chǎn)生免疫耐受，最終引發(fā)無效免疫應(yīng)答及惡性腫瘤進(jìn)展。

T細(xì)胞依據(jù)表面抗原的不同分為CD3+、CD4+、CD8+等，其中CD3+數(shù)量代表患者機(jī)體總免疫狀態(tài); CD4+為輔助性T淋巴細(xì)胞，可協(xié)助B細(xì)胞分泌抗體，輔助機(jī)體完成抗腫瘤性免疫應(yīng)答; CD8+則為抑制機(jī)體免疫功能的T淋巴細(xì)胞, CD4+/CD8+穩(wěn)態(tài)則是反映機(jī)體免疫穩(wěn)定的重要指標(biāo)。CD8+T細(xì)胞依據(jù)是否表達(dá)CD28分為細(xì)胞毒T細(xì)胞和CD8+CD28-調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，前者是重要?dú)?xì)胞，后者是具有正負(fù)調(diào)節(jié)功能的免疫細(xì)胞。NK細(xì)胞是無需MHC即可發(fā)揮腫瘤殺傷作用的特殊細(xì)胞群體，其在抗腫瘤免疫應(yīng)答中同樣具有重要作用。邱海波等[8]報(bào)道顯示, CRC患者外周血NK細(xì)胞、CD3+、CD4+、CD4+/CD8+含量均顯著低于健康對照人群; 張泉等[9]報(bào)道稱, CRC患者CD4+T細(xì)胞陽性率僅為32.65%, 顯著低于健康人群的90.00%和腺瘤患者的43.75%; 嚴(yán)健等[10]報(bào)道顯示，與健康對照者相比，肺癌、消化道腫瘤及其他腫瘤患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD4+/CD8+含量顯著下降。這些結(jié)果均與本研究結(jié)果具有一定相似性，即與健康組相比，良性組和腸癌組患者外周血CD8+、CD8+CD28-含量顯著上升, NK細(xì)胞、CD3+、CD4+含量顯著下降; 與良性組相比，腸癌組CD8+、CD8+CD28-含量顯著上升, NK細(xì)胞、CD3+、CD4+含量顯著下降。隨著腫瘤的不斷惡化，外周血T淋巴細(xì)胞亞群的變化越明顯，表明CRC患者處于細(xì)胞免疫功能抑制狀態(tài)，機(jī)體對腫瘤細(xì)胞的識別、殺傷能力下降，導(dǎo)致機(jī)體免疫穩(wěn)態(tài)失衡，從而造成腫瘤細(xì)胞加速生長，病情出現(xiàn)惡化。吳佳茗等[11]報(bào)道, CRC患者外周血CD3+細(xì)胞表面抗程序性死亡因子-1(PD-1)表達(dá)陽性率顯著高于健康志愿者，腫瘤組織中陽性率顯著高于癌旁正常組織，且越是分化程度低、發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移、Huke分期越高的患者外周血中表達(dá)陽性率越高。元龍等[12]報(bào)道, CRC患者腫瘤組織及外周血中CD4+細(xì)胞中PD-1和T細(xì)胞免疫球蛋白黏附蛋白結(jié)構(gòu)域相關(guān)分析-3(Tim-3)比例明顯升高，認(rèn)為該現(xiàn)象是CRC病情進(jìn)展的機(jī)制之一。

TNF-α、IL-2、IFN-γ是由Th1細(xì)胞分泌的免疫相關(guān)分子。其中, TNF-α可與細(xì)胞膜上相應(yīng)受體結(jié)合，從而引發(fā)機(jī)體炎癥及免疫調(diào)節(jié)反應(yīng)，是目前為止發(fā)現(xiàn)的腫瘤殺傷力最強(qiáng)的活性因子，特定情況下，其可直接誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，同時(shí)也可通過活化機(jī)體caspase信號通路，誘導(dǎo)腫瘤上皮細(xì)胞死亡，從而發(fā)揮抗腫瘤功效。腫瘤微環(huán)境中TNF-α過表達(dá)是諸多癌性病變的共同特征，其水平通常與患者預(yù)后密切相關(guān)。李緒彤等[13]報(bào)道, CRC癌變組織中TNF-αmRNA表達(dá)顯著高于癌旁正常組織，且其表達(dá)量與淋巴轉(zhuǎn)移、細(xì)胞分化及臨床分期均有顯著相關(guān)性。IL-8是Th2細(xì)胞克隆分泌，可抑制Th1細(xì)胞對IFN-γ和IL-2的合成和分泌，目前發(fā)現(xiàn)，其與支氣管原位癌、肺癌等多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。IL-2主要由T細(xì)胞或T細(xì)胞系產(chǎn)生，控制T細(xì)胞增殖、凋亡，調(diào)控機(jī)體免疫反應(yīng)。文坤明等[14]研究顯示, CRC淋巴轉(zhuǎn)移發(fā)生與血清IL-2水平呈明顯負(fù)相關(guān)。IFN-γ具有較強(qiáng)的免疫調(diào)節(jié)功能，能增強(qiáng)抗原遞呈細(xì)胞功能。腫瘤組織中, IFN可使細(xì)胞內(nèi)mRNA表達(dá)水平升高，提高基因翻譯轉(zhuǎn)錄效率，誘導(dǎo)腫瘤相關(guān)抗原表達(dá)，從而增強(qiáng)機(jī)體對腫瘤細(xì)胞的免疫識別殺傷作用。范義湘等[15]報(bào)道顯示，IFN-γ可通過上調(diào)CRC患者細(xì)胞系CEA表達(dá)，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對標(biāo)記抗體的攝取。IL-22是主要由CD4+細(xì)胞中的Th22細(xì)胞分泌的細(xì)胞免疫因子，此外Th1、Th17細(xì)胞也可產(chǎn)生IL-22。李樹斌等[16]報(bào)道, CRC患者CD4+細(xì)胞中Th22含量顯著增加，且晚期患者高于早期患者，而患者血清IL-22含量具有相同變化趨勢; Jiang等[17]研究顯示，高水平IL-22可通過活化STAT3, 上調(diào)STAT3下游效應(yīng)分子等過程，促進(jìn)免疫缺陷型小鼠機(jī)體內(nèi)大腸癌細(xì)胞生長; 此外, IL-22還可通過活化分裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路，促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展[18]。

綜上所述，機(jī)體T淋巴細(xì)胞及免疫相關(guān)因子TNF-α、IL-2、IFN-γ、IL-22、IL-8在CRC的發(fā)生發(fā)展過程中扮演著重要角色，臨床可通過檢測外周血T淋巴細(xì)胞亞群含量及Th細(xì)胞分泌性免疫相關(guān)因子的變化，實(shí)現(xiàn)對CRC的預(yù)測、診斷及預(yù)后判斷，以便在腫瘤初期即可進(jìn)行有效干預(yù)，降低腫瘤患者的臨床病死率。