不同蛋白水平對金邊鯉生長、血清生化、消化酶及抗氧化能力的影響

■劉 康 滕忠作 鄒 輝 王建波 韋玲靜 黃 杰 張 盛 葉香塵*

（1.廣西水產(chǎn)引育種中心，廣西南寧530031；2.全國水產(chǎn)技術(shù)推廣總站，北京100125；3.廣西柳州市漁業(yè)技術(shù)推廣站，廣西柳州545006）

金邊鯉（暫定名）是廣西壯族自治區(qū)水產(chǎn)引育種中心聯(lián)合柳州市漁業(yè)技術(shù)推廣站和融水縣融榮水產(chǎn)品養(yǎng)殖專業(yè)合作社等多家單位以融水鯉魚野生群體為育種材料，以典型金邊性狀為主要選育目標(biāo)、生長性狀為輔助選育目標(biāo)，采用混合育種、家系選育和分子輔助育種相結(jié)合的方式，針對稻田養(yǎng)殖而選育出的鯉魚新選系。金邊鯉肉多刺柔、肉質(zhì)鮮美、無腥味、魚湯清甜，近幾年逐步推至廣西中部和南部以及湖南、貴州等周邊省份，深受當(dāng)?shù)叵M(fèi)者喜愛。蛋白質(zhì)是維持魚類生命的必需營養(yǎng)物質(zhì)，是直接關(guān)系到影響魚類生長和飼料成本的主要因素之一。飼料蛋白水平過低，不能滿足魚類生長所需，導(dǎo)致魚類生長緩慢，體質(zhì)減弱；飼料蛋白水平過高，加重了魚類代謝負(fù)擔(dān)與養(yǎng)殖成本，魚類排泄物含氮量高，使養(yǎng)殖水體富營養(yǎng)化，從而導(dǎo)致水體污染。因此，飼料中過高或過低的蛋白水平都會影響魚類生長以及經(jīng)濟(jì)效益。

魚的種類不同，所需蛋白水平不盡相同。桑永明等[1]研究發(fā)現(xiàn)，方正銀鯽幼魚飼料中最佳蛋白水平為35.29%～37.07%；陳濤等[2]發(fā)現(xiàn)，飼料蛋白水平在26%～32%范圍內(nèi)，池塘工業(yè)化養(yǎng)殖的梭魚生長正常，其形體指標(biāo)及血液生化指標(biāo)均無顯著差異；張蕉南[3]研究發(fā)現(xiàn)，隨著蛋白水平的增加，大刺鰍幼魚的增重率、特定生長率和蛋白質(zhì)效率在50%蛋白水平達(dá)到最大，飼料蛋白含量與生長速率指標(biāo)分析得出大刺鰍幼魚飼料蛋白適宜含量為50.7%～52.5%；趙書燕等[4]發(fā)現(xiàn)大規(guī)格石斑魚適宜蛋白需求量為40.94%，小規(guī)格石斑魚蛋白需求量為43.44%。目前，尚未發(fā)現(xiàn)金邊鯉飼料中蛋白需求的相關(guān)研究報道。鯉魚飼料所需蛋白水平，不同的研究所得出的結(jié)論不盡相同。伍代勇等[5]研究不同蛋白質(zhì)和脂肪水平對鯉魚的生長發(fā)現(xiàn)，鯉魚的最適蛋白質(zhì)水平為30%～32%；殷海成等[6]發(fā)現(xiàn)，滿足黃河鯉與建鯉雜交F1代WGR、SGR、PER和FCR最佳的蛋白水平為37%～42.3%；崔培等[7]研究不同蛋白水平的蝦青素飼料對錦鯉生長的影響，發(fā)現(xiàn)使其生長和著色效果最好的蛋白水平為35.04%；鹿璇等[8]研究表明，滿足鯉魚生長的最適宜蛋白水平為31.5%～32.0%。因此，確定金邊鯉飼料中適宜的蛋白水平，可以對今后金邊鯉大規(guī)模的推廣和人工養(yǎng)殖提供科學(xué)的參考依據(jù)，具有十分重要的生產(chǎn)指導(dǎo)意義。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)用魚

試驗(yàn)所用的金邊鯉體格健壯、規(guī)格相近。試驗(yàn)前將幼魚經(jīng)5%的鹽水消毒后在暫養(yǎng)池中馴養(yǎng)兩周，挑選體格健壯規(guī)格整齊，平均體重(18.16±0.57) g 的幼魚750尾，隨機(jī)分成5組，每組3個重復(fù)，每個重復(fù)50尾魚。試驗(yàn)分為5個蛋白水平(30%、32%、34%、36%、38%)。

1.2 試驗(yàn)飼料

試驗(yàn)飼料以魚粉（進(jìn)口）為動物蛋白源，大豆粕為植物蛋白源，通過改變次粉添加量調(diào)節(jié)飼料的蛋白質(zhì)水平。原料經(jīng)粉碎，過40目篩，再按表1所示配方制成5組粒徑2.0 mm 顆粒飼料，制成的飼料經(jīng)烘干，保存于-20 ℃冰箱中。

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)在廣西水產(chǎn)引育種中心武鳴基地的室外池塘的網(wǎng)箱中進(jìn)行。試驗(yàn)期間，每日投喂2 次(9:00 和17:00)，每次投喂以飽食無殘餌（少量多次投喂，以魚不再攝食判斷為飽食）為準(zhǔn)，每兩周測一次體重并計算飼料消耗量；定期測定水質(zhì)，并消毒；及時開增氧機(jī)充氣并維持。養(yǎng)殖期為56 d，試驗(yàn)結(jié)束后空腹24 h稱量體重。

表1 基礎(chǔ)飼料配方及營養(yǎng)水平（干重%）

1.4 樣品采集及分析

試驗(yàn)結(jié)束24 h 后采樣，每一個處理隨機(jī)取9 尾魚，測量其體長、體重等數(shù)據(jù)并記錄。從尾部抽取靜脈血，4 ℃冰箱放置1～2 h 后，4 000 r/min 離心15 min（4 ℃）分離血液取上清液即為血清，血清轉(zhuǎn)至-20 ℃冰箱保存?zhèn)溆?。將魚置于冰盤內(nèi)，解剖魚體腹部取出肝臟，0.86%生理鹽水沖洗，吸水紙將表面液體吸干，稱重計算肝指數(shù)，分離出肝臟、腸道，0.86%生理鹽水沖洗，吸水紙將表面液體吸干，與預(yù)冷的生理鹽水按W∶V=1∶9稀釋，3 500 r/min 離心15 min（4 ℃）勻漿取組織上清液，-40 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計并分析

增重率（WGR，%）=（Wt-Wo）/Wo×100

特定生長率（SGR，%/d）=(lnWt-lnWo)×100/t

飼料系數(shù)（FCR）=（Wt-Wo）/Ws

肥滿度（CF，%）=Wt/l3×100

式中：Wt和Wo——魚的末體質(zhì)量和初始平均體重(g)；

t——試驗(yàn)天數(shù)(d)；

l——魚體末體長(cm)。

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS17.0 統(tǒng)計軟件進(jìn)行單因素方差分析（One-way ANOVA）,若差異達(dá)到顯著水平（P＜0.05），則進(jìn)行Duncan's 法多重比較。所有數(shù)據(jù)均以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（Means±S.E.）”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同蛋白水平對金邊鯉生長性能的影響(見表2)

表2 不同蛋白水平對金邊鯉生長性能的影響

由表2 可以看出，隨著飼料蛋白水平的增加，末體質(zhì)量、增重率和特定生長率基本呈現(xiàn)先增長后下降的趨勢，Diet3 的增重率和特定生長率顯著高于Diet1（P＜0.05），高于Diet2、Diet4 和Diet5，但不顯著；各蛋白水平的肥滿度之間沒有顯著差異（P＞0.05）。對末體質(zhì)量與蛋白水平進(jìn)行回歸分析，得出二次方程y=-0.229 8x2+15.95x-196.78（R2=0.710 8），求出當(dāng)x=34.70時，末體質(zhì)量最大（見圖1）。對增重率與蛋白水平進(jìn)行回歸分析，得出二次方程y=-2.438 9x2+171.31x-2 663.7（R2=0.880 6），求出當(dāng)x=35.12 時，增重率最大（見圖2）。對特定生長率與蛋白水平進(jìn)行回歸分析，得出二次方程y=-0.010 4x2+0.729 3x-10.082（R2=0.896 6），求出當(dāng)x=35.06時，特定生長率最大（見圖3）。對肥滿度與蛋白水平進(jìn)行回歸分析，得出二次方程y=-0.001 1x2+0.074 9x+0.074（R2=0.221 9），求出當(dāng)x=34.05時，肥滿度最大（見圖4）。

2.2 不同蛋白水平對金邊鯉血液生化指標(biāo)的影響（見表3）

由表3看出，飼料蛋白水平對金邊鯉血液中的補(bǔ)體3、補(bǔ)體4、免疫球蛋白M、溶菌酶含量和谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶活性沒有顯著影響（P＞0.05），對甘油三酯和血清白蛋白含量有影響。Diet2 和Diet4 的甘油三酯含量顯著高于Diet1（P＜0.05），高于Diet3和Diet5，但不顯著（P＞0.05）。飼料蛋白水平對金邊鯉血液中的白蛋白含量有影響，血液中的白蛋白含量隨著蛋白水平的增加而增加，Diet3、Diet4 和Diet5 顯著高于Diet1（P＜0.05）。

圖1 不同蛋白水平對金邊鯉末體質(zhì)量的影響

圖2 不同蛋白水平對金邊鯉增重率的影響

圖3 不同蛋白水平對金邊鯉特定生長率的影響

圖4 不同蛋白水平對金邊鯉肥滿度的影響

2.3 不同蛋白水平對金邊鯉腸道消化酶活性的影響（見表4）

由表4可以看出，飼料蛋白水平對金邊鯉腸道中的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶的活性影響均不顯著。隨著蛋白水平的增加，腸蛋白酶和腸脂肪酶的活性呈現(xiàn)出先上升后下降的趨勢。其中腸蛋白酶活性在Diet2達(dá)到最大值，腸脂肪酶的活性在Diet3達(dá)到最大值。

2.4 不用蛋白水平對金邊鯉肝臟抗氧化能力的影響（見表5）

表3 不同蛋白水平對金邊鯉血液生化指標(biāo)的影響

表4 不同蛋白水平對金邊鯉腸道消化酶活性的影響

表5 不同蛋白水平對金邊鯉肝臟抗氧化能力的影響

由表5 可以看出，飼料蛋白水平對金邊鯉肝臟中的丙二醛、超氧化物歧化酶、過氧化氫酶均無顯著影響。

3 討論

3.1 不同蛋白水平對金邊鯉生長的影響

本試驗(yàn)中，金邊鯉的末體質(zhì)量、增重率和特定生長率都是隨著飼料蛋白水平的增加而基本呈現(xiàn)出增長的趨勢，這與胡國成等[9]對淡水黑鯛、宋理平等[10]對吉富羅非魚的研究結(jié)果基本一致，魚的增重率和特定生長率的變化趨勢一致，會隨著飼料蛋白水平的增加而逐漸增大，達(dá)到峰值以后，繼續(xù)增加蛋白水平反而會降低。這可能是因?yàn)榈鞍姿綄︳~體重的增加有一定的限制性，在最適蛋白水平區(qū)間內(nèi)，增重會隨著飼料蛋白水平的增加而增加；超過最適值以后，蛋白水平對機(jī)體的新陳代謝產(chǎn)生一定的壓力，部分蛋白用于增重以外的機(jī)體生理代謝，從而導(dǎo)致增重率和特定生長率不如最適蛋白水平區(qū)間。根據(jù)各生長指標(biāo)，采用折線和二次曲線模型分析，金邊鯉適宜蛋白水平為34.05%～35.12%。

3.2 不同蛋白水平對金邊鯉血液生化指標(biāo)的影響

補(bǔ)體系統(tǒng)是非特異性免疫中極為重要的組成部分之一，參與機(jī)體抗微生物防御反應(yīng)及免疫調(diào)節(jié)，也可介導(dǎo)免疫病理的損傷性反應(yīng)[11]。C4 參與補(bǔ)體經(jīng)典途徑的激活過程，C3 在補(bǔ)體激活的經(jīng)典途徑和替代途徑中均起作用[12]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，蛋白水平的提高對血清C3、C4 的影響不顯著（P＞0.05），這與張桐等[13]對鏡鯉的研究結(jié)果一致，可能由于蛋白營養(yǎng)不是血清C3、C4 敏感的非特異性免疫指標(biāo)，所以蛋白水平變化沒有引起其含量的顯著變化。

大量研究表明，魚類能夠進(jìn)行體液和細(xì)胞免疫答應(yīng)，而免疫球蛋白M是魚類特異性體液免疫答應(yīng)的主要介質(zhì)[14]，用來防止菌血癥、中和毒素和病毒的毒性作用，有效保護(hù)機(jī)體的機(jī)能[15]。本試驗(yàn)中，蛋白水平對血清中的免疫球蛋白M的影響不顯著（P＞0.05），未在其他研究報道中見到蛋白水平對魚類血清免疫球蛋白M的影響，可能是因?yàn)榈鞍谞I養(yǎng)不是免疫球蛋白M敏感的非特異性免疫指標(biāo)，蛋白水平變化不會引起其含量的顯著變化。

血清溶菌酶(LZM)是魚類非特異性免疫系統(tǒng)的重要組成部分[16-17]，它是一種水解酶，具有抗菌活性，通過破壞細(xì)胞壁使細(xì)菌裂解[18]，其活性的高低是衡量機(jī)體免疫狀態(tài)的指標(biāo)之一。蔡春芳等[19]研究異育銀鯽發(fā)現(xiàn)溶菌酶活性不受蛋白質(zhì)水平的影響（P＞0.05）。姜志強(qiáng)等[20]對錦鯉的研究報道，隨蛋白質(zhì)水平降低，溶菌酶活性沒有顯著變化（P＞0.05），這都與本試驗(yàn)的研究結(jié)果相一致，出現(xiàn)這種結(jié)果可能是由于溶菌酶活性不是對蛋白營養(yǎng)敏感的免疫力指標(biāo)。

甘油三酯是血脂的組成部分之一，本試驗(yàn)中，甘油三酯的含量隨著蛋白水平的增加有增加的趨勢，蛋白水平為32%和36%時甘油三酯的含量顯著高于30%水平（P＜0.05），但在32%～38%范圍內(nèi)時各組甘油三酯的差異不顯著（P＞0.05）。有研究發(fā)現(xiàn)[21]，錦鯉幼魚在蛋白水平為30.85%～47.43% 范圍內(nèi)飼養(yǎng)，其甘油三酯會隨著蛋白含量的升高呈現(xiàn)出先升高后降低的趨勢，與本研究結(jié)果一致。血清內(nèi)甘油三酯升高，可能是由于隨著蛋白水平的增加，在滿足了金邊鯉生長所需的蛋白之外，一部分蛋白在體內(nèi)轉(zhuǎn)換成脂類在血液中。

血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶活性是肝臟受損的指示物。孫金輝等[22]研究蛋白水平對鯉魚幼魚肝功能的影響發(fā)現(xiàn)，養(yǎng)殖8 周以后，血清中的谷草轉(zhuǎn)氨酶無顯著差異，與本試驗(yàn)結(jié)果一致。本試驗(yàn)中，蛋白水平對谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶的活力影響不顯著（P＞0.05），這與鹿璇等[8]的研究結(jié)果一致。這可能是由于金邊鯉本身是在稻田養(yǎng)殖選育的品種，長期以稻田中的昆蟲和水生生物等高蛋白餌料為食，對于蛋白的忍受能力較強(qiáng)，不會對肝臟造成負(fù)擔(dān)，沒有造成肝臟損傷。

血清中的白細(xì)胞含量能夠直觀體現(xiàn)出機(jī)體的蛋白質(zhì)吸收代謝的情況，較高的白蛋白標(biāo)志著較快的生長速度[23]。在本試驗(yàn)中，隨著蛋白水平的增加，血清中白蛋白的含量增加，這與劉偉等[24]對奧尼羅非魚、黃金鳳等[25]對松浦鏡鯉和唐玲等[26]對鏡鯉的研究結(jié)果一致。但蛋白含量在32%～36%范圍內(nèi)時各組白蛋白的差異不顯著，說明飼料蛋白水平到一定程度以后，已經(jīng)滿足了金邊鯉生長所需營養(yǎng)。

3.3 不同蛋白水平對金邊鯉腸道消化酶活性的影響

有研究表明，魚類食性和飼料的組成成分會影響魚類的活性[27]。在本試驗(yàn)中，金邊鯉腸道蛋白酶的活性隨著蛋白水平的增加而呈現(xiàn)出先上升后下降的趨勢，這與呂耀平等[28]對刺鲃幼魚、孫翰昌等[29]對瓦氏黃顙魚的研究結(jié)果類似。但本試驗(yàn)中各組直接差異不顯著（P＞0.05），與前兩者的結(jié)果有所不同?？赡苁怯捎诒驹囼?yàn)中蛋白水平含量差別不大，造成各處理組之間腸道蛋白酶活性差異不顯著；也可能是金邊鯉對于蛋白水平的適應(yīng)范圍較廣，高蛋白水平的飼料不會對腸道消化造成負(fù)擔(dān)。本試驗(yàn)中，蛋白水平對金邊鯉腸道淀粉酶和脂肪酶活性沒有顯著影響，與蒙古鲌[30]、芙蓉鯉幼魚[31]和寶石鱸[32]的結(jié)果一致。

3.4 不同蛋白水平對金邊鯉肝臟抗氧化能力的影響

丙二醛、超氧化物歧化酶和過氧化氫酶是體現(xiàn)魚類抗氧化能力的重要指標(biāo)。本試驗(yàn)中，蛋白水平對各組的丙二醛、超氧化物歧化酶和過氧化氫酶影響不顯著（P＞0.05），這與樂貽榮等[33]研究飼料蛋白水平對奧尼羅非魚的研究結(jié)果一致。蔡春芳等[19]發(fā)現(xiàn)隨著蛋白水平的升高，SOD 活性呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，與本試驗(yàn)結(jié)果相同。本試驗(yàn)中，各組的抗氧化指標(biāo)之間均無顯著差異，表明在本試驗(yàn)設(shè)置的范圍內(nèi)，增加蛋白水平不會對金邊鯉的肝臟造成損傷，可以保證機(jī)體抗氧化系統(tǒng)的穩(wěn)定，維持肌體健康。這也說明金邊鯉對蛋白水平的耐受范圍較廣，對生存環(huán)境有較強(qiáng)的適應(yīng)性。

4 結(jié)論

適當(dāng)?shù)靥岣唢暳现械鞍姿?，可以促進(jìn)金邊鯉的生長，一定程度上提升金邊鯉的免疫力。但過高的蛋白水平不利于金邊鯉的生長，還會導(dǎo)致養(yǎng)殖成本的增加以及養(yǎng)殖環(huán)境的污染。綜合蛋白水平對金邊鯉生長、血清生化、消化酶和抗氧化能力的影響，在本試驗(yàn)條件下，適宜金邊鯉生長的飼料蛋白水平為34.05%～35.12%。