超聲軟指標(biāo)聯(lián)合無創(chuàng)DNA產(chǎn)前檢測篩查胎兒染色體異常效果

何曉俊 馬玉成 冷 培

華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬武漢兒童醫(yī)院(武漢市婦幼保健院)(430016)

產(chǎn)前篩查是降低染色體異常兒出生的有效手段，羊水染色體核型分析診斷胎兒非整倍體準(zhǔn)確率較高[1]，是診斷胎兒染色體異常的金標(biāo)準(zhǔn)，但有創(chuàng)性操作可增加術(shù)后流產(chǎn)、羊水滲漏、宮內(nèi)感染等風(fēng)險(xiǎn)[2]，且不適用于有羊水穿刺禁忌孕婦。超聲產(chǎn)前診斷胎兒染色體異常有重要價(jià)值，但指標(biāo)陽性機(jī)率增大，對指標(biāo)陽性孕婦是否行羊水穿刺染色體核型分析尚存在較大爭議[3]。孕婦外周血胎兒游離DNA無創(chuàng)產(chǎn)前檢測大大提高了準(zhǔn)確率，其檢查敏感性、特異性可達(dá)99%，假陽性率為0.1%[4]。本院開展染色體異常兒篩查，通過超聲初步篩查，再聯(lián)合無創(chuàng)胎兒游離DNA檢測技術(shù)，大大提高了篩查準(zhǔn)確率，降低有創(chuàng)操作帶來的風(fēng)險(xiǎn)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性收集2015年2月—2017年3月本院婦產(chǎn)科門診常規(guī)產(chǎn)檢的孕婦2621例，超聲軟指標(biāo)異常孕婦均定期配合產(chǎn)檢，并接受隨訪至分娩。年齡(32.2±6.0)歲(19～39歲)，經(jīng)產(chǎn)婦1268例，初產(chǎn)婦1353例。納入標(biāo)準(zhǔn)：單胎妊娠，B超檢查和實(shí)驗(yàn)室檢查資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：多胎妊娠，流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎等，妊娠期糖尿病、高血壓等妊娠合并癥或并發(fā)癥孕婦，臨床資料缺失，不配合檢查孕婦。本研究獲得本院倫理會(huì)批準(zhǔn)，孕婦均簽署知情同意書。

1.2 超聲檢測

GE Voluson E8型彩色超聲診斷儀,探頭頻率3.5MHz。常規(guī)B超產(chǎn)前檢查，掃查胸腹臟器、脊柱、顏面、頭顱等實(shí)質(zhì)性臟器，并測量胎心、羊水深度、胎心率、股骨、肱骨、腹圍以及雙頂徑、頭圍等。超聲軟指標(biāo)項(xiàng)目：①頸項(xiàng)透明(NT)增厚，妊娠11～13+6周超聲檢測NT大于第95百分位數(shù)[5]；②超聲正中矢狀切面鼻骨強(qiáng)回聲提示鼻骨發(fā)育不良或缺失；③腸管強(qiáng)回聲與骨組織強(qiáng)度相當(dāng)為腸管回聲增強(qiáng)；④單臍動(dòng)脈；⑤脈絡(luò)膜回聲顯示橢圓或圓形囊性結(jié)構(gòu)區(qū)為脈絡(luò)膜囊腫；⑥心室強(qiáng)回聲光斑；⑦單側(cè)或雙側(cè)側(cè)腦室寬度達(dá)10～15mm提示側(cè)腦室擴(kuò)張；⑧腎盂分離；⑨股骨長徑小于正常孕周兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差。

1.3 無創(chuàng)胎兒游離DNA產(chǎn)前檢測

采集孕婦外周血10 ml于EDTA抗凝管充分混勻中，4℃分離血漿提取DNA，紫外分光光度法鑒定DNA純度和完整性，運(yùn)用高通量基因檢測技術(shù)DNA測序。三體高風(fēng)險(xiǎn)診斷標(biāo)準(zhǔn)：Z=(待測染色體的比例-總體人群的比率)/對照組待測染色體的方差，Z值≥3為三體高危，Z值≤3為單體高危。

1.4 羊水染色體核型分析

常規(guī)消毒，超聲引導(dǎo)下經(jīng)腹壁穿刺子宮至羊膜腔抽取羊水20 ml離心取沉淀物加入羊水培養(yǎng)瓶，放置于37℃、5% CO2培養(yǎng)箱8～12d，適當(dāng)更換培養(yǎng)液，觀察羊水細(xì)胞生長良好，加入秋水仙素，經(jīng)37℃低滲、固定、制片、G顯帶、染色處理，計(jì)數(shù)和染色體核型分析。采用徠卡GSL-120掃描系統(tǒng)采集分裂相；CytoVision軟件分析數(shù)據(jù)。核型描述按照ISCN2016進(jìn)行。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 超聲及DNA檢測

超聲檢出軟指標(biāo)陽性胎兒共153例，檢出率5.8%(153/2621)，其中NT增厚49例，鼻骨發(fā)育不良或缺失32例，腸管回聲增強(qiáng)24例，單臍動(dòng)脈15例，心室強(qiáng)回聲光斑10例，側(cè)腦室擴(kuò)張8例，輕度腎盂分離9例，股骨短6例。對153例行無創(chuàng)胎兒游離DNA檢測，發(fā)現(xiàn)8例高風(fēng)險(xiǎn)胎兒，檢出率0.3%(8/2621)，其中6例21-三體異常，1例18-三體異常，1例13-三體異常。具體見表1。

表1 超聲軟指標(biāo)與無創(chuàng)胎兒DNA檢測結(jié)果分析(例)

2.2 DNA檢測與羊水染色體核型分析及妊娠結(jié)局

胎兒DNA檢測高危孕婦8例行羊水染色體核型分析結(jié)果一致，符合率100.00%，見表2。

表2 胎兒游離 DNA與羊水染色體核型分析對比

2.3 妊娠結(jié)局

對8例高危孕婦均行引產(chǎn)證實(shí)；138例低風(fēng)險(xiǎn)孕婦流產(chǎn)9例，129例順利分娩，實(shí)驗(yàn)室診斷均為染色體正常。

3 討論

我國每年約10萬染色體異常兒出生，其中10%為遺傳因素導(dǎo)致[6]， 21-三體、18-三體、13-三體是最常見的染色體異常類型[7]，發(fā)病率分別為1/1200-1/600、1/4000-1/5000、1/10000[8-9]，男性性染色體非整倍體發(fā)病率1/500，女性1/850[10]。產(chǎn)前篩查是降低染色體異常胎兒出生的主要診斷措施。傳統(tǒng)產(chǎn)前診斷技術(shù)均為侵入性操作，且產(chǎn)前診斷周期長，受取材時(shí)間、樣本質(zhì)量、試劑等多種因素影響可出現(xiàn)試驗(yàn)失敗現(xiàn)象，限制了其在臨床的推廣應(yīng)用。長期以來醫(yī)學(xué)界一直在尋找一種無創(chuàng)獲得胎兒DNA的方法。

超聲對胎兒器官結(jié)構(gòu)異常診斷準(zhǔn)確率較高，常規(guī)超聲檢查可發(fā)現(xiàn)結(jié)構(gòu)畸形的染色體異常胎兒，隨著彩色超聲診斷技術(shù)不斷提高，妊娠11周后超聲檢查可清晰顯示胎兒全身器官結(jié)構(gòu)，對脈絡(luò)叢囊腫、心室強(qiáng)回聲光斑、腸管回聲增強(qiáng)、單臍動(dòng)脈、側(cè)腦室擴(kuò)張等微小畸形能準(zhǔn)確判斷[11]。孕中早期超聲軟指標(biāo)異常往往提示胎兒染色體異常，NT是孕11～13+6周常規(guī)進(jìn)行超聲軟指標(biāo)檢測項(xiàng)目，對判斷胎兒染色體核型異常有重要幫助[12]。另外，胎兒鼻骨異?；蛉笔У任⑿』尉c胎兒染色體異常密切相關(guān)[13]。但是超聲軟指標(biāo)陽性并不完全提示胎兒染色體變異，目前異常診斷準(zhǔn)確率僅為70%～80%[14]，進(jìn)一步提高胎兒染色體異常篩查的準(zhǔn)確率是關(guān)鍵，因此有學(xué)者指出對單項(xiàng)超聲軟指標(biāo)陽性的胎兒進(jìn)行無創(chuàng)DNA檢測，分析胎兒核型具有重要臨床意義。

無創(chuàng)胎兒DNA技術(shù)是通過檢測母體外周血中胎兒細(xì)胞數(shù)目，發(fā)現(xiàn)游離胎兒 DNA 片段并進(jìn)行DNA分析，相比有創(chuàng)檢測更加安全。Dan等人[15]采用高通量測序技術(shù)檢測來自母體血漿中的胎兒游離DNA片段，成功檢測到染色體異常，與有創(chuàng)檢測結(jié)果符合率達(dá)100%。近年來，國內(nèi)也開展了大量無創(chuàng)檢測胎兒DNA的研究，均取得了較高的檢測準(zhǔn)確率[16]。本研究對超聲軟指標(biāo)陽性胎兒孕婦采用高通量測序技術(shù)檢測外周血中胎兒游離DNA片段，發(fā)現(xiàn)染色體異常胎兒與羊水穿刺染色體分析結(jié)果符合率100%，提示無創(chuàng)DNA檢測技術(shù)對胎兒染色體異常篩查具有重要臨床價(jià)值，可有效避免有創(chuàng)檢測技術(shù)的風(fēng)險(xiǎn)和弊端。