異甘草酸鎂注射液與注射用環(huán)磷腺苷葡胺配伍的穩(wěn)定性*

趙雯雯，豆興茹，黃春燕，陳明圓，李軼

(蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院藥學(xué)部，蘇州 215000)

異甘草酸鎂注射液為臨床常用的甘草酸制劑，是用于抗炎保肝的一線藥物[1]。注射用環(huán)磷腺苷葡胺是環(huán)磷腺苷與葡甲胺(摩爾比為1：1)的鹽，是一種非洋地黃類強(qiáng)心劑。有研究發(fā)現(xiàn)，注射使用環(huán)磷腺苷能直接補(bǔ)充血漿和肝細(xì)胞內(nèi)cAMP含量，促進(jìn)肝細(xì)胞內(nèi)ATP合成，還能抑制炎癥細(xì)胞的粘附和浸潤，從而減輕肝臟的炎癥反應(yīng)、恢復(fù)肝功能[2]。

臨床上常選擇異甘草酸鎂注射液與注射用環(huán)磷腺苷葡胺配伍的方案用于某些特殊的情況，說明書未提及二者之間是否存在配伍禁忌，也未檢索到兩種藥品在不同輸液中配伍的報道。因此，筆者將異甘草酸鎂注射液與注射用環(huán)磷腺苷葡胺配伍溶于5%葡萄糖注射液、10%葡萄糖注射液、0.9%氯化鈉注射液、5%葡萄糖氯化鈉注射液、轉(zhuǎn)化糖注射液，考察其配伍后穩(wěn)定性，為患者的用藥安全提供初步的理論支持，報道如下。

1 儀器與試藥

1.1儀器 Agilent Technologies 1100型高效液相色譜儀(美國安捷倫公司)，包括G1314A可變波長掃描紫外檢測器、G1316A柱溫箱、G1379A脫氣機(jī)、G1311A四元泵、G1313A自動液體進(jìn)樣器，Agilent ChemStation for LC and LC/MS systems數(shù)據(jù)分析系統(tǒng)；電子分析天平(METTLER TOLEDO公司，型號：XS105 DualRange，感量：0.01 mg)；pH/ORP測試儀(上海羅素科技有限公司，型號：RPB1000)；；GWJ-5微粒檢測儀 (天津天大天發(fā)科技有限公司)。

1.2藥品與試藥 異甘草酸鎂標(biāo)準(zhǔn)品(中國食品藥品檢定研究院，批號：100879-201302)；環(huán)磷腺苷標(biāo)準(zhǔn)品(中國食品藥品檢定研究院，批號：140709-201404)；異甘草酸鎂注射液(正大天晴藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，批號：171222204)；注射用環(huán)磷腺苷葡胺(無錫凱夫制藥有限公司，批號：17111164)；乙腈(色譜純)；磷酸(分析純)。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件 色譜柱[依利特，填料：SinoChrom ODS-BP(4.6 mm×150 mm，5 μm)]；流動相：1%磷酸-乙腈(55：45)；流速：1 mL·min-1；檢測波長：250 nm；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。

2.2溶液的制備

2.2.1標(biāo)準(zhǔn)品溶液 分別精密稱取異甘草酸鎂標(biāo)準(zhǔn)品11.02 mg和環(huán)磷腺苷標(biāo)準(zhǔn)品10.00 mg，分別置于10 mL量瓶，加純化水定容，搖勻制成濃度均為1.0 mg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)品儲備液。分別取異甘草酸鎂和環(huán)磷腺苷標(biāo)準(zhǔn)品儲備液適量，配制成濃度為0.4，0.5，0.6，0.7，0.8 mg·mL-1的異甘草酸鎂和環(huán)磷腺苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.2.2供試品溶液 按照臨床配伍的濃度，將異甘草酸鎂注射液200 mg和注射用環(huán)磷腺苷葡胺180 mg溶于250 mL的5%葡萄糖注射液、10%葡萄糖注射液、0.9%氯化鈉注射液、5%葡萄糖氯化鈉注射液、轉(zhuǎn)化糖注射液，5種不同的溶媒配制成含有異甘草酸鎂0.69 mg·mL-1、注射用環(huán)磷腺苷葡胺0.62 mg·mL-1的混合溶液作為供試品溶液，考察2種藥物配伍在不同溶媒中24 h的穩(wěn)定性。以此方法配制2份，第1份置于25 ℃常溫避光保存，作為供試品溶液一，第2份置于4 ℃保存，作為供試品溶液二。

2.3方法學(xué)驗證

2.3.1專屬性實驗 取0.6 mg·mL-1異甘草酸鎂標(biāo)準(zhǔn)品溶液、0.6 mg·mL-1環(huán)磷腺苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液、5%葡萄糖注射液、10%葡萄糖注射液、0.9%氯化鈉注射液、5%葡萄糖氯化鈉注射液、轉(zhuǎn)化糖注射液按上述色譜條件依次進(jìn)樣，每個樣品分析6 min，記錄色譜圖，見圖1。結(jié)果表明，在此色譜條件下，空白溶媒對異甘草酸鎂和環(huán)磷腺苷的含量測定并無較大影響，同時，兩者的峰對稱性良好，且互不干擾，其專屬性良好。

2.3.2線性關(guān)系考察 將濃度為0.4，0.5，0.6，0.8，1.0 mg·mL-1異甘草酸鎂和環(huán)磷腺苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液，按上述色譜條件依次進(jìn)樣，分析時間為6 min，以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)與濃度(X)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程：Y1=7 264.6X+5.972 4，r=0.999 8和Y2=18 639X+1 394.1，r=0.999 0。結(jié)果表明，異甘草酸鎂和環(huán)磷腺苷的濃度在0.4～1.0 mg·mL-1范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

2.3.3精密度實驗 取0.5 mg·mL-1異甘草酸鎂和環(huán)磷腺苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液按上述色譜條件各連續(xù)進(jìn)樣6次，每次分析6 min。記錄峰面積，計算峰面積相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)值，異甘草酸鎂RSD為0.09%，環(huán)磷腺苷RSD為0.05%。連續(xù)3 d重復(fù)上述操作，記錄峰面積，計算RSD值，異甘草酸鎂為0.29%，環(huán)磷腺苷為0.45%，表明精密度良好。

A.5%葡萄糖注射液；B.10%葡萄糖注射液；C.0.9%氯化鈉注射液；D.5%葡萄糖氯化鈉注射液；E.轉(zhuǎn)化糖注射液；F.異甘草酸鎂標(biāo)準(zhǔn)品；G.環(huán)磷腺苷標(biāo)準(zhǔn)品；1.異苷草酸鎂；2.環(huán)磷腺苷。

2.3.4穩(wěn)定性實驗 取0.7 mg·mL-1異甘草酸鎂標(biāo)準(zhǔn)品兩份，分別在25和4 ℃保存條件下，于0，1，3，6，10，24 h依次進(jìn)樣，測定峰面積，計算其RSD分別為0.31%和0.34%。取0.6 mg·mL-1環(huán)磷腺苷標(biāo)準(zhǔn)品兩份，同法測定峰面積，計算其RSD分別為0.54%和0.34%。表明兩種標(biāo)準(zhǔn)品在25和4 ℃保存條件下，24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.3.5加樣回收實驗 精密量取含異甘草酸鎂0.69 mg·mL-1、環(huán)磷腺苷葡胺0.62 mg·mL-1的5%葡萄糖注射液9份，每份0.5 mL，分別精密加入含異甘草酸鎂標(biāo)準(zhǔn)品0.276，0.345，0.414 mg的儲備液制成混合溶液，每個濃度平行配置3份，搖勻，取液按以上述色譜條件進(jìn)樣，記錄異甘草酸鎂峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算異甘草酸鎂含量和回收率，并計算平均回收率為102.25%。結(jié)果表明，該方法測定異甘草酸鎂含量的準(zhǔn)確度良好。

同法精密加入含0.248，0.310，0.372 mg環(huán)磷腺苷標(biāo)準(zhǔn)品的儲備液，制成混合溶液按以上述色譜條件進(jìn)樣，記錄異甘草酸鎂峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算異甘草酸鎂含量和回收率，并計算回收率的平均值為102.47%。結(jié)果表明，該方法測定環(huán)磷腺苷含量的準(zhǔn)確度良好。

2.4供試品外觀及pH值測定 按臨床常用量將“2.2”項配制好的供試品溶液5組，分別在25和4 ℃放置，加藥后于0，1，3，6，10，24 h取樣，觀察其外觀變化，測定pH值，結(jié)果見表1。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，5組溶液于不同溫度下外觀在24 h內(nèi)均呈現(xiàn)無色澄清透明，無沉淀產(chǎn)生。

2.5供試品含量測定 將“2.2”項配制好的供試品溶液于0，1，3，6，10，24 h取樣，進(jìn)行異甘草酸鎂注射液和注射用環(huán)磷腺苷葡胺的含量測定。實驗結(jié)果見表2。在25和4 ℃條件下，24 h內(nèi)含量變化在95%～105%，在臨床用藥的有效范圍內(nèi)，24 h色譜圖無其他吸收峰產(chǎn)生。

2.6不溶性微粒的檢測 《中華人民共和國藥典》2015年版規(guī)定，標(biāo)識裝量≥100 mL的靜脈用注射液，除另有規(guī)定外，每毫升中含粒徑≥10 μm微粒數(shù)不得超過25粒，含粒徑≥25 μm微粒數(shù)不得超過3粒[3]。

將上述“2.2”配制好供試品溶液5組，分別在25和4 ℃放置，加藥后0，1，3，6，10，24 h取樣，對供試品溶液的不溶性微粒進(jìn)行檢測，實驗結(jié)果見表3，微粒變化不超過《中華人民共和國藥典》要求。

表1 不同溫度下24 h內(nèi)pH值變化

3 討論

HPLC測定含量需要探索適合的色譜條件，筆者參考文獻(xiàn)[4-6]，確定流動相為1%磷酸：乙腈(55：45)，配伍溶液在進(jìn)樣6 min內(nèi)出現(xiàn)明顯環(huán)磷腺苷和異甘草酸鎂峰，兩者峰對稱性良好，且互不干擾，峰形良好。由于環(huán)磷腺苷葡胺中葡甲胺在反相色譜中幾乎不保留，故將環(huán)磷腺苷作為含量測定對象[7-8]。含量測定的方法學(xué)研究主要考察了專屬性、精密度和線性關(guān)系，考察指標(biāo)均顯示良好，該方法具有較高的可行性。

本次研究考察臨床常用異甘草酸鎂注射液和注射用環(huán)磷腺苷葡胺配伍溶于5種不同溶媒分別在25和4 ℃下放置，24 h內(nèi)外觀、pH值、含量以及不溶性微粒的變化，發(fā)現(xiàn)配伍溶液在24 h外觀均呈現(xiàn)無色澄清透明，無沉淀產(chǎn)生，不溶性微粒符合要求。溶液配置24 h內(nèi)，除以0.9%氯化鈉注射液為溶媒的配伍溶液pH值約為6.0，其他配伍溶液pH值均保持在5.2～5.6。5種溶酶中異甘草酸鎂和環(huán)磷腺苷含量變化均在(100±5)%。實驗結(jié)果表明，異甘草酸鎂200 mg和注射用環(huán)磷腺苷葡胺180 mg配伍溶于250 mL的5%葡萄糖注射液、10%葡萄糖注射液、0.9%氯化鈉注射液、5%葡萄糖氯化鈉注射液、轉(zhuǎn)化糖注射液，24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好，可配伍使用，從而為臨床用藥提供了初步的理論依據(jù)。

表2 不同溫度下24 h內(nèi)含量變化

表3 不同溫度下24 h內(nèi)不溶性微粒的變化