結腸癌組織中Mina53和H-鈣黏蛋白的表達水平及臨床意義*

胡曉舒 王娜 楊金花 溫一陽

（1 河南省鄭州人民醫(yī)院病理科 鄭州 450003；2 河南省人民醫(yī)院腫瘤科 鄭州 450003）

結腸癌是臨床最常見的惡性腫瘤疾病之一，受近年來生存環(huán)境和生活方式改變的影響，結腸癌患病率明顯增加且呈逐漸上升趨勢，已成為威脅我國居民身心健康和生命安全的重要疾病。結腸癌多發(fā)于乙狀結腸和直腸交界處，起病隱匿，患者早期多無典型臨床表現(xiàn)，當出現(xiàn)明顯臨床癥狀時，病情已進展至中后期，治療難度明顯增加，如何提升結腸癌早期診斷檢出率是當前臨床亟待解決的難題[1]。本研究對收治的80 例結腸癌患者開展研究，分別測定了所有患者病灶和正常組織中Mina53 和H-鈣黏蛋白的表達情況，分析了Mina53 和H-鈣黏蛋白與結腸癌病情進展的相關性。現(xiàn)報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016 年4 月～2018 年4 月行手術治療的80 例結腸癌患者作為研究對象。其中男46 例，年齡39～72 歲，平均年齡（51.60±7.60）歲；病程1～3 年，平均病程（1.20±0.65）年。女34例，年齡38～70 歲，平均年齡（50.48±7.71）歲；病程1～4 年，平均病程（1.17±0.70）年。術中取所有患者的病灶組織和癌旁正常組織樣本各80 例，分為病灶組和正常組。本研究征得患者及家屬同意，已獲得我院醫(yī)學倫理委員會批準，所有患者均簽署知情同意書。

1.2 入組標準（1）納入標準[2]：經(jīng)影像學和病理組織檢驗確診為結腸癌者，結腸癌診斷標準參照《結腸癌治療指南》；患者均自愿參與，并簽署知情同意書；免疫和凝血功能無障礙；無其他血液系統(tǒng)或傳染性疾??；治療隨訪調查配合度和依從性良好；首次診斷，無手術、放化療等治療史。（2）排除標準：十二指腸潰瘍者；認知功能障礙者；合并其他惡性腫瘤患者；妊娠期或哺乳期患者。

1.3 檢測方法（1）檢測試劑盒及試劑：人Mina53多克隆抗體（購自武漢三鷹生物技術有限公司）、濃縮型DAB 試劑盒、GST 瓊脂糖、RNA 提取試劑盒等。（2）重組人Mina53 蛋白檢測方法：術中取結腸癌病灶組織及癌旁正常組織樣本，放入10%福爾馬林溶液固定后切片（5 μm），用二甲苯、乙醇和磷酸鹽緩沖液（PBS）漂洗后阻斷過氧化物酶活性，滴入人Mina53 多克隆一抗和二抗后過夜孵育，PBS 沖洗后使用蘇木素復染，常規(guī)脫水封片后觀察染色結果。通過觀察染色強度和染色程度評估Mina53 蛋白表達情況。（3）H-鈣黏蛋白檢測方法：染色方法基本相同，向組織切片中滴入H-鈣黏蛋白多克隆抗體50 μl，過夜后加入二抗孵育，DAB 顯色后復染，常規(guī)脫水干燥后封片，使用光學顯微鏡觀察染色結果。通過觀察染色強度和染色程度評估H-鈣黏蛋白表達情況。

1.4 觀察指標 比較結腸癌組織和癌旁正常組織中Mina53 和H-鈣黏蛋白表達情況，染色強度弱計1 分，中等計2 分，強計3 分；染色程度通過染色范圍表示，≤25%計1 分、26%～50%計2 分、51%～75%計3 分、76%～100%計4 分；兩種計分相加，≤4 分為低表達，≥5 分為高表達。

1.5 統(tǒng)計學處理 數(shù)據(jù)處理采用SPSS19.0 統(tǒng)計學軟件，計數(shù)資料以%表示，采用χ2檢驗，計量資料以表示，采用t檢驗。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 不同組織樣本中Mina53 和H-鈣黏蛋白陽性表達情況 Mina53 和H-鈣黏蛋白在結腸癌病灶組中呈陽性高表達，且陽性表達率均明顯高于正常組織（P＜0.05）。見表1。

表1 不同組織樣本中Mina53 和H-鈣黏蛋白陽性表達情況比較

2.2 Mina53 和H-鈣黏蛋白表達與結腸癌臨床病理特征的關系 免疫組織化學檢測結果顯示，Mina53 和H-鈣黏蛋白表達水平與結腸癌分化程度、TNM 分期及有無淋巴結轉移密切相關，隨腫瘤病灶分化程度增高和TNM 分期增加，Mina53 和H-鈣黏蛋白陽性率相應增高（P＜0.05），伴有淋巴結轉移的病灶Mina53 和H-鈣黏蛋白表達陽性率高于無轉移病灶（P＜0.05）；在年齡和性別上也有明顯的差異（P＜0.05），男性及年齡＜48 歲人群的Mina53和H-鈣黏蛋白陽性占比高于女性和年齡＞48 歲的人群。見表2。

表2 Mina53 和H-鈣黏蛋白表達與結腸癌臨床病理特征的關系[例（%）]

3 討論

近年來，結腸癌的發(fā)病率在世界范圍內均呈上升趨勢，嚴重影響了患者的生活質量。結腸癌的具體起病機制尚不明確，可能與遺傳和環(huán)境相關[3]。雖然結腸癌早期可通過手術切除治療，但因該病起病隱匿，多數(shù)患者在確診時已進展至中后期，治療效果和預后質量明顯降低，病死率相應升高[4]。探尋一種有效的早期篩查方法對提升結腸癌患者的臨床療效及預后質量有積極意義。

本研究以收治的80 例結腸癌患者作為研究對象，分別檢測患者病灶組織和正常組織中Mina53和H-鈣黏蛋白的表達情況，以探討Mina53 和H-鈣黏蛋白測定應用于結腸癌早期診斷中的價值。結果顯示，Mina53 和H-鈣黏蛋白在病灶組織中的陽性表達率明顯高于正常組織，提示可以通過測定Mina53 和H-鈣黏蛋白水平預測結腸癌發(fā)病。Mina53 是Myc 誘導的核抗原，H-鈣黏蛋白屬于鈣黏蛋白類，多項臨床研究顯示，Mina53 和H-鈣黏蛋白與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、增殖和轉移密切相關。本研究發(fā)現(xiàn)，結腸癌患者病灶組織中均存在不同程度的Mina53 和H-鈣黏蛋白陽性高表達，且隨著腫瘤病灶分化程度、TNM 分期的進展而升高，提示Mina53和H-鈣黏蛋白可作為評估結腸癌病程的重要參考指標。另外，在有淋巴結轉移的結腸癌病灶中，Mina53 和H-鈣黏蛋白陽性率更高，提示Mina53 和H-鈣黏蛋白可能參與了結腸癌的發(fā)展和演變，通過進一步研究Mina53 和H-鈣黏蛋白作用機制可能為結腸癌的治療提供新靶點[5～6]。曹偉等[7]研究指出，結腸癌患者病灶組織中Mina53 表達水平明顯高于腺瘤和正常黏膜組織，且高齡者及男性的表現(xiàn)更加直觀，與本研究的結論基本一致，均證實了Mina53可能與結腸癌發(fā)生發(fā)展有相關性。本研究的不足之處在于選取樣本量較少，結果可能出現(xiàn)誤差，期待后續(xù)更多更全面的研究證實此觀點。綜上所述，Mina53 和H-鈣黏蛋白在結腸癌組織中呈陽性高表達，表達水平與病灶分化程度、TNM 分期及淋巴結轉移情況密切相關，可作為結腸癌診斷的重要參考依據(jù)。