膀胱癌組織中UCA1、miR-141的表達(dá)及臨床意義

田建海 李曉娟 郭懷遠(yuǎn) 徐建平

[摘要] 目的 研究膀胱癌組織中尿路上皮癌抗原1（UCA1）、micoRNA-141（miR-141）的表達(dá)及臨床意義。 方法 以2013年2月～2015年2月山東省臨沂市腫瘤醫(yī)院收治的膀胱癌患者83例為研究對(duì)象。采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)UCA1、miR-141表達(dá)情況，并分析UCA1、miR-141表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系。此外，對(duì)所有患者均進(jìn)行為期3年的隨訪，將其按照生存狀況的不同分為存活組（n = 39）與死亡組（n = 44），比較兩組UCA1、miR-141表達(dá)情況。 結(jié)果 膀胱癌組織中UCA1、miR-141陽(yáng)性率相比癌旁正常組織較高（均P < 0.05）。病理分級(jí)為G1、臨床分期T1～T2期、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的膀胱癌組織中UCA1陽(yáng)性率相比病理分級(jí)為G2～G3、臨床分期T3～T4期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移較低（均P < 0.05）。臨床分期T1～T2期、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的膀胱癌組織中miR-141陽(yáng)性率相比臨床分期T3～T4期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移較低（均P < 0.05）。存活組膀胱癌組織中UCA1、miR-141陽(yáng)性率相比死亡組較低（均P < 0.05）。 結(jié)論 膀胱癌組織中UCA1、miR-141均存在明顯高表達(dá)，臨床工作中可通過(guò)上述兩項(xiàng)指標(biāo)的檢測(cè)進(jìn)行膀胱癌患者病情判斷以及預(yù)后評(píng)估。

[關(guān)鍵詞] 膀胱癌;尿路上皮癌抗原1;micoRNA-141;生存狀況

[中圖分類號(hào)] R737.14? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1673-7210（2019）07（b）-0121-04

Expression and clinical significance of UCA1 and miR-141 in bladder cancer tissue

TIAN Jianhai1? ?LI Xiaojuan2? ?GUO Huaiyuan1? ?XU Jianping1

1.Department of Urology， Linyi Cancer Hospital， Shandong Province， Linyi? ?276001， China; 2.Medical Department， Linyi Cancer Hospital， Shandong Province， Linyi? ?276001， China

[Abstract] Objective To study the expression and clinical significance of urothelial carcinoma antigen 1 （UCA1） and micoRNA-141 （miR-141） in bladder cancer tissue. Methods A total of 83 patients with bladder cancer admitted to Linyi Cancer Hospital from February 2013 to February 2015 were taken as research objects. The expression of UCA1 and miR-141 were detectd by real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction and the relationship between the expression of UCA1 and miR-141 and the clinicopathological characteristics of the patients was analyzed. In addition， all patients were followed up for 3 years and divided into survival group （n = 39） and death group （n = 44） according to different survival conditions. The expression of UCA1 and miR-141 was compared between the two groups. Results The positive rate of UCA1 and miR-141 in bladder cancer tissues was higher than those in adjacent normal tissues （all P < 0.05）. The positive rate of UCA1 in bladder cancer with pathological grade G1， clinical stage T1-T2 and no lymph node metastasis was lower than that in bladder cancer with pathological grade G2-G3， clinical stage T3-T4 and lymph node metastasis （all P < 0.05）. The positive rate of miR-141 in bladder cancer tissues with clinical stage T1-T2 and no lymph node metastasis was lower than that in bladder cancer tissues with clinical stage T3-T4 and lymph node metastasis （all P < 0.05）. The positive rate of UCA1 and miR-141 in survival group was lower than those in death group （all P < 0.05）. Conclusion UCA1 and miR-141 is highly expressed in bladder cancer tissues. The two indicators mentioned above can be used in clinical work to evaluate the condition and prognosis of patients with bladder cancer.

[Key words] Bladder cancer; Urothelial carcinoma antigen 1; micoRNA-141; Survival condition

膀胱癌屬于臨床上最為常見(jiàn)的泌尿系惡性腫瘤之一，發(fā)病率在所有泌尿系腫瘤中位居首位，嚴(yán)重影響人們生命與健康。目前對(duì)于膀胱癌的病因和發(fā)病機(jī)制仍未完全明確，相關(guān)研究表明膀胱癌的發(fā)生是多種基因共同作用導(dǎo)致的結(jié)果[1]。近年來(lái)隨著研究的逐漸深入，越來(lái)越多的學(xué)者發(fā)現(xiàn)非編碼基因在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起到重要作用[2]。其中micoRNA是一類長(zhǎng)度在20～30個(gè)核苷酸的非編碼單鏈RNA分子[3]。有研究報(bào)道，miR-141在卵巢癌、腎癌、乳腺癌以及子宮內(nèi)膜癌中均存在明顯的表達(dá)異常，且與腫瘤的分化程度以及惡性程度密切相關(guān)。而尿路上皮癌抗原1（UCA1）屬于一個(gè)新的膀胱癌特異性非編碼基因，可能與microRNA的調(diào)控、膀胱癌發(fā)生有關(guān)[4-5]。然而，目前臨床上關(guān)于UCA1、microRNA-141（microR-141）與膀胱癌關(guān)系的相關(guān)研究報(bào)道并不多見(jiàn)。本研究通過(guò)檢測(cè)膀胱癌組織中UCA1、miR-141的表達(dá)，為臨床膀胱癌的早期診斷、臨床治療以及預(yù)后評(píng)估提供新的靶點(diǎn)以及思路?，F(xiàn)報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

以2013年2月～2015年2月山東省臨沂市腫瘤醫(yī)院收治的膀胱癌患者83例為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有患者均符合我國(guó)膀胱癌診治指南中相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]，且經(jīng)手術(shù)病理組織檢查以及影像學(xué)檢查確診為膀胱癌;②入院前均未接受任何相關(guān)抗腫瘤治療;③年齡>20歲;④臨床病歷資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并心、肝、腎、肺等臟器功能嚴(yán)重障礙者;②伴有其他惡性腫瘤疾病者;③存在交流溝通障礙或精神疾病者;④妊娠期或哺乳期婦女;⑤正參與其他研究者。83例患者中，男71例，女12例;年齡33～79歲，平均（51.39±2.38）歲;按照世界衛(wèi)生組織（WHO）標(biāo)準(zhǔn)[7]進(jìn)行病理分級(jí)：G1級(jí)28例，G2級(jí)37例，G3級(jí)18例;按照國(guó)際抗癌聯(lián)盟（UICC）標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行臨床分期：T1期30例，T2期22例，T3期20例，T4期11例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移48例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移35例。所有患者及其家屬已同意，且醫(yī)院倫理委員會(huì)予以批準(zhǔn)。

1.2 研究方法

收集所有患者膀胱癌組織及癌旁正常組織（取材處距離癌組織邊緣≥3 cm，術(shù)后經(jīng)病理確診為正常組織），分別采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)UCA1、miR-141表達(dá)情況，具體方式如下：首先采用Trizol（購(gòu)自北京華邁科技生物有限責(zé)任公司）以及StarSpin Small RNA Kit（購(gòu)自上?？道噬锟萍加邢薰荆┨崛〗M織總RNA，參照試劑盒說(shuō)明書的反應(yīng)體系和反應(yīng)條件（95℃，5 min;93℃，10 s;61℃，30 s，共40個(gè)循環(huán)），采用定量PCR儀進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。通過(guò)LnRcute lncRNA cDNA第一鏈合成試劑盒與miRNA First Strand cDNA Synthesis Kit（購(gòu)自北京百奧萊博科技有限公司）逆轉(zhuǎn)錄獲取cDNA。然后將cDNA作為模板，以β-actin及U6作為內(nèi)參基因，設(shè)計(jì)引物序列如下，UCA1正向引物：5′-CTAGACCGGTTTCTCCTCATTC-3′，UCA1反向引物：5′-GCGTGATTGGCGGTCAAAAGAG-3′;miR-141正向引物：5′-CTCAAGGCAACCTACCGAAAAG-3′，miR-141反向引物：5′-TATCGGACCCATCACGGAGTGG-3′;β-actin正向引物序列：5′-CAGGGCGTGATGGTGGGCA-3′，β-actin反向引物序列：5′-GCTGTCAACCGTTCCAGGTCG-3′，U6正向引物序列：5′-GATTAGAACCGTCGGTAACGGAA-3′，U6反向引物序列：5′-AGCGATCTCGTTGGCCTTTCTACC-3′。分別檢測(cè)UCA1、miR-141表達(dá)水平。其中反應(yīng)體系為25 μL，包括Cdna 2.0 μL;Priner 1.0 μL;RNase H2O 9.5 μL;SYBR Prinix Ex TaqTM 12.5 μL（購(gòu)自寶生物工程有限公司）。將上述反應(yīng)試劑分別加入反應(yīng)孔，離心后上機(jī)檢測(cè)。每個(gè)樣品重復(fù)檢測(cè)3次，最終結(jié)果以2-△△Ct法表示。其中UCA1、miR-141引物由北京賽百盛基因技術(shù)有限公司進(jìn)行合成，熒光定量PCR儀購(gòu)自艾本德中國(guó)有限公司。

1.3 觀察指標(biāo)

比較膀胱癌組織與癌旁正常組織中UCA1、miR-141表達(dá)情況，并分析UCA1、miR-141表達(dá)與患者臨床病理特征以及生存狀況的關(guān)系，對(duì)所有患者進(jìn)行為期3年的隨訪，記錄其生存、死亡情況。

1.4 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

將UCA1、miR-141相對(duì)表達(dá)量2-△△Ct≥1記為陽(yáng)性，反之記為陰性[8]。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本研究數(shù)據(jù)均通過(guò)SPSS 20.0軟件予以檢測(cè)分析，計(jì)數(shù)資料通過(guò)例數(shù)或百分比表示，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，進(jìn)行t檢驗(yàn)。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 膀胱癌組織與癌旁正常組織中UCA1、miR-141表達(dá)情況比較

膀胱癌組織中UCA1、miR-141陽(yáng)性率相比癌旁正常組織較高（均P < 0.05）。見(jiàn)表1。

2.2 膀胱癌組織中UCA1表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系分析

病理分級(jí)為G1、臨床分期T1～T2期、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的膀胱癌組織中UCA1陽(yáng)性率相比病理分級(jí)為G2～G3、臨床分期T3～T4期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移較低（均P < 0.05）。見(jiàn)表2。

2.3 膀胱癌組織中miR-141表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系分析

臨床分期T1～T2期、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的膀胱癌組織中miR-141陽(yáng)性率相比臨床分期T3～T4期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移較低（均P < 0.05）。見(jiàn)表3。

2.4 膀胱癌組織中UCA1、miR-141表達(dá)情況與生存狀況的關(guān)系分析

根據(jù)隨訪結(jié)果，將其按照生存狀況分為存活組（39例）和死亡組（44例），存活組膀胱癌組織中UCA1、miR-141陽(yáng)性率相比死亡組較低（均P < 0.05）。見(jiàn)表4。

3 討論

相關(guān)研究數(shù)據(jù)表明，膀胱癌的發(fā)病率在所有惡性腫瘤中位居第九，且其發(fā)病率隨著近年來(lái)人們生活水平的不斷提高以及飲食結(jié)構(gòu)的逐漸改變，正呈逐年升高趨勢(shì)[9-10]。根據(jù)病理類型的分類，膀胱癌主要分為腺癌、小細(xì)胞癌、鱗狀細(xì)胞癌以及膀胱尿路上皮癌等，其中膀胱尿路上皮癌占比可達(dá)90%以上，是膀胱癌最為常見(jiàn)的病理類型[11]。雖然目前臨床上通過(guò)切除手術(shù)聯(lián)合化療可顯著提高膀胱癌的治療效果，但由于該病具有易侵襲和轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)率較高的特點(diǎn)，患者存活率仍然不理想。由此可知，如何有效抑制腫瘤細(xì)胞發(fā)生侵襲以及轉(zhuǎn)移是治療膀胱癌的關(guān)鍵。相關(guān)研究報(bào)道表明[12-14]，膀胱癌受多種因素共同調(diào)節(jié)，且RNA異常也參與了膀胱癌的發(fā)生發(fā)展。既往對(duì)腫瘤的研究主要集中在編碼蛋白的基因，而隨著近年來(lái)對(duì)腫瘤發(fā)病機(jī)制的研究逐漸深入，越來(lái)越多的專家學(xué)者發(fā)現(xiàn)非編碼RNA在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中同樣發(fā)揮著至關(guān)重要的作用[15-16]。

本研究結(jié)果顯示，膀胱癌組織中UCA1陽(yáng)性率相比癌旁正常組織較高。這與Zhen等[17]的研究報(bào)道基本一致。分析原因，UCA1是一種長(zhǎng)鏈非編碼RNA（lncRNA），可通過(guò)結(jié)合到靶基因如ZEB1和ZEB2等的啟動(dòng)子區(qū)，上調(diào)基因表達(dá)后，進(jìn)而促進(jìn)膀胱腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。而在用CRISPR/Cas9敲除UCA1基因表達(dá)后，腫瘤細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為得到逆轉(zhuǎn)[18-20]。miR-141作為miR-200家族成員之一，位于12p13.31位點(diǎn)，既往研究顯示其可通過(guò)轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用，參與多種腫瘤細(xì)胞侵襲以及遷移過(guò)程[21]。本研究結(jié)果顯示，膀胱癌組織中miR-141陽(yáng)性率相比癌旁正常組織較高，與劉詠松等[16]、劉瑤等[22]研究結(jié)果一致。機(jī)制可能是miR-141結(jié)合TARF5和TARF6的3′非編碼區(qū)，抑制兩者的表達(dá)后，抑制NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的傳導(dǎo)，進(jìn)而影響下游基因的表達(dá)，如VEGF、IL-8等，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移[23]。lncRNA如SNHG15等可作為miR-141的分子海綿，調(diào)節(jié)miR-141功能，但目前UCA1與miR-141之間相互作用的機(jī)制尚不清楚，有待深入研究。此外，本研究中病理分級(jí)為G1、臨床分期T1～T2期、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的膀胱癌組織中UCA1陽(yáng)性率相比病理分級(jí)為G2～G3、臨床分期T3～T4期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移較低（P < 0.05）。臨床分期T1～T2期、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的膀胱癌組織中miR-141陽(yáng)性率相比臨床分期T3～T4期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移較低（P < 0.05）。這些結(jié)果提示組織中UCA1、miR-141高表達(dá)與膀胱癌高分期、高級(jí)別密切相關(guān)，通過(guò)檢測(cè)組織或血清中UCA1、miR-141表達(dá)水平，兩者有可能成為輔助膀胱癌的術(shù)后病理分期診斷、治療效果評(píng)估及預(yù)后判斷的分子生物學(xué)標(biāo)志。本研究結(jié)果還顯示，存活組膀胱癌組織中UCA1、miR-141陽(yáng)性率相比死亡組較低（P < 0.05）。這提示UCA1、miR-141陽(yáng)性表達(dá)的上調(diào)可能與膀胱癌患者的預(yù)后不良密切相關(guān)，對(duì)患者預(yù)后效果具有指示作用。

綜上所述，UCA1、miR-141在膀胱癌組織中均呈顯著高表達(dá)，且上述兩項(xiàng)指標(biāo)與膀胱癌患者的病情進(jìn)展、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及預(yù)后均密切相關(guān)。臨床工作中通過(guò)對(duì)其表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)，有利于膀胱癌的早期診斷、臨床治療以及預(yù)后評(píng)估。然而，上述兩項(xiàng)指標(biāo)能否成為膀胱癌基因靶向治療的新靶點(diǎn)，有待進(jìn)一步研究。

[參考文獻(xiàn)]

[1]? 劉春萍，曾星.免疫療法抗膀胱癌的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)研究雜志，2017，46（12）：11-14.

[2]? 王子源，傅昭粵，張錦鵬，等.ceRNA在腫瘤中的作用與機(jī)制[J].轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)電子雜志，2017，4（10）：71-76.

[3]? 徐一平，萬(wàn)新紅，羅玉梅.micoRNA與心血管疾病[J].海南醫(yī)學(xué)，2015，26（8）：1173-1176.

[4]? 張建華，管馨馨，雷小勇，等.長(zhǎng)鏈非編碼RNA尿路上皮癌胚抗原1調(diào)節(jié)腫瘤耐藥機(jī)制的研究進(jìn)展[J].中國(guó)臨床藥理學(xué)雜志，2017，33（17）：1713-1716.

[5]? 廖桂雅，黃錦鵬，吳萬(wàn)垠.劉偉勝治療腎癌的經(jīng)驗(yàn)[J].國(guó)際中醫(yī)中藥雜志，2018，40（7）：657-659.

[6]? 易善紅.我國(guó)膀胱癌診治指南解讀[J].中華臨床醫(yī)師雜志：電子版，2013，7（3）：924-925.

[7]? 鄭閃，田軍，呂寧.世界衛(wèi)生組織膀胱尿路上皮癌病理分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)變化要點(diǎn)解讀[J].腫瘤研究與臨床，2013，25（8）：555-558.

[8]? 王哲，張敬，陳懷安，等.長(zhǎng)鏈非編碼RNA UCA1靶向miR-582-5p對(duì)膀胱癌UM-UC-3細(xì)胞生存和運(yùn)動(dòng)能力的調(diào)節(jié)作用及機(jī)制研究[J].中國(guó)免疫學(xué)雜志，2018，34（5）：670-674.

[9]? 王建吉，王志杰，原文琦，等.膀胱組織中微小RNA-429表達(dá)與大鼠脊髓損傷后膀胱癌發(fā)生的關(guān)系[J].中國(guó)醫(yī)藥，2016，11（7）：1087-1091.

[10]? 劉國(guó)元，陳凌武，徐慶春，等.膀胱癌組織中miRNA-720、miRNA-191差異表達(dá)的意義[J].現(xiàn)代泌尿生殖腫瘤雜志，2014，6（3）：164-167.

[11]? 王海峰，楊宏，胡禮炳，等.上調(diào)microRNA-101沉默EZH2基因表達(dá)對(duì)人膀胱癌T24細(xì)胞系增殖和凋亡的影響[J].昆明醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，35（9）：23-27.

[12]? 謝小娟，潘晶晶，侯慧蓮，等.長(zhǎng)鏈非編碼RNA UCA1與miRNA-99b在膀胱癌細(xì)胞株和膀胱癌組織表達(dá)的相關(guān)性分析[J].陜西醫(yī)學(xué)雜志，2015，44（10）：1278-1280.

[13]? 曾勇，李娜，王?；ǎ?卵巢漿液性囊腺癌化療耐藥和化療敏感組織中的miRNAs差異表達(dá)譜檢測(cè)及生物信息學(xué)分析[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2017，25（12）：1870-1875.

[14]? 謝振華，祁洪剛，張曙偉，等.血清CK19和AFP等七項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合診斷膀胱癌的研究[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生，2017，55（32）：23-26，封3.

[15]? 吳金生，王清明，鄭傳秋，等.姜黃素對(duì)N-甲基亞硝基脲誘發(fā)膀胱癌大鼠化學(xué)干預(yù)作用及機(jī)制分析[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào)，2017，25（5）：567-571.

[16]? 劉詠松，劉聰穎，陳孝斌，等.UCA1和miR-141在膀胱癌細(xì)胞系和膀胱癌組織中的表達(dá)及與臨床預(yù)后的相關(guān)性[J].現(xiàn)代泌尿外科雜志，2018，23（3）：211-214，226.

[17]? Zhen S，Hua L，Liu YH，et al. Inhibition of long non-coding RNA UCA1 by CRISPR/Cas9 attenuated malignant phenotypes of bladder cancer [J]. Oncotarget，2017， 8（6）：9634-9646.

[18]? 呂磊，袁敬東，吳維，等.長(zhǎng)鏈非編碼RNA尿路上皮癌相關(guān)1基因與miR-34b在膀胱癌中的表達(dá)及臨床相關(guān)性研究[J].中華泌尿外科雜志，2016，37（7）：538-543.

[19]? 張慶德，蔡學(xué)輝，潘勇，等.凋亡相關(guān)因子X(jué)AF-1和XIAP的表達(dá)及與膀胱癌復(fù)發(fā)的相關(guān)性研究[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生，2018，56（6）：24-27，封3.

[20]? 董維平，嚴(yán)奉奇，李霞，等.TIMP-4在膀胱癌及癌旁正常膀胱組織中的表達(dá)[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2017，14（12）：77-80.

[21]? 顧漱溟，徐岷.長(zhǎng)非編碼RNA UCA1作為競(jìng)爭(zhēng)性內(nèi)源RNA在調(diào)控腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用[J].國(guó)際腫瘤學(xué)雜志，2017，44（12）：911-913.

[22]? 劉瑤，賀興波，舒濤，等.miR-141表達(dá)異常對(duì)人肝癌細(xì)胞惡性生物學(xué)表型的影響[J].中國(guó)病理生理雜志，2016， 32（2）：215-220.

[23]? Huang S，Wa Q，Pan J，et al. Down regulation of miR-141-3p promote bone metastasis via activating NF-κB signaling in prostate cancer [J]. J Exp Clin Cancer Res，2017，36（1）：173.