高效液相色譜法測定燈盞乙素血藥濃度及其脂質(zhì)體大鼠藥代動力學(xué)的評價

羅紹遠 楊宇秀 郭永梅

（1 國家電網(wǎng)公司職業(yè)病防治院藥劑科，浙江 建德 311600；2 江西醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校，江西 上饒 334000）

燈盞乙素（Scutellarin，SCU）是燈盞細(xì)辛（Erigeron breviscapus）中提取的主要有效成分，測定燈盞細(xì)辛?xí)r常以燈盞乙素計。但SCU存在口服吸收差，生物利用度低，半衰期短等缺點[1-2]。近年來，通過劑型改善生物利用度的研究較多，本研究以燈盞乙素為對象，研究燈盞乙素脂質(zhì)體及水劑在大鼠體內(nèi)的血藥濃度，考察大鼠灌胃給藥后體內(nèi)藥代動力學(xué)參數(shù)，為開發(fā)具有較高生物利用度的燈盞乙素制劑提供依據(jù)和參考。

1 材 料

1.1 藥品與試劑：燈盞乙素原料藥（江西中醫(yī)藥大學(xué)贈，純度≥97%）；燈盞乙素對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：110742-201106，純度≥98%）；燈盞乙素脂質(zhì)體（江西醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校自制）；內(nèi)標(biāo)匹伐他汀（含量：＞95.6%，批號：1106001，購于廣東東陽光藥業(yè)有限公司）；甲醇（南京化學(xué)試劑一廠色譜純級別），其他試劑為分析純。

1.2 儀器：LCMS-2010EV型液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（日本島津公司）；Diamonsil C18色譜柱（5 μm，4.6 mm×150 mm，迪馬公司）；3K30型臺式高速冷凍離心機（Sigma公司）。

1.3 實驗動物：清潔級健康雄性SD大鼠，（230±25）g，南昌大學(xué)實驗動物中心提供，合格證號SCXK（贛）2010-0001。

2 方法與結(jié)果

2.1 大鼠給藥及樣品采集方法：取12只健康雄性SD大鼠，禁食12 h以上，自由飲水，隨機分為燈盞乙素水劑組和燈盞乙素脂質(zhì)體組，每組6只。大鼠分別單次灌胃燈盞乙素50 mg/kg（相應(yīng)劑型）后，分別于0.17、0.33、0.67、1、1.5、2、5、8、15、24、36 h時間點大鼠眼眶取血0.5 mL，肝素化后10000 rmp離心5 min，小心吸取上層血漿，-20 ℃低溫條件保存[3]。

2.2 血漿樣品處理[3]：于10 mL離心管中精密加入血漿樣品0.2 mL，加內(nèi)標(biāo)（匹伐他汀50 μg/mL）20 μL，再加1 mol/L磷酸100 μL，旋渦30 s，加乙酸乙酯3 mL，旋渦3 min，于3000 r/min離心10 min，吸取上清液2 mL轉(zhuǎn)移至另一離心管中，35 ℃ N2吹干，加流動相100 μL，旋渦3 min，12000 r/min離心5 min，吸取上清液進行HPLC分析。

2.3 色譜條件[4]：采用島津Pack VP-ODS C18柱（150 mm×2.0 mm×5 μm），流動相：甲醇/水（含1%氨水，0.2 mmol/mL乙酸胺）=70/30（V/V），流速：0.2 mL/min，采用電噴霧離子（ESI）源，正離子方式檢測，選擇性反應(yīng)監(jiān)測（SIM），瑞舒伐他汀檢測離子m/z為480.0，匹伐他汀檢測離子m/z為420.0，曲型脫溶劑裝置（CDL）溫度為250 ℃，電壓為25 V，加熱塊200 ℃，檢測電壓為-1.65 kV，干燥氣體流速為2.0 L/min，霧化氣體流速為1.5 L/min。

2.4 專屬性：取空白血漿和對照品血漿和瑞舒伐他汀給藥大鼠血漿按“血漿樣品處理項”處理，發(fā)現(xiàn)血漿中內(nèi)源性物質(zhì)不干擾測定，專屬性較好，瑞舒伐他汀及內(nèi)標(biāo)的保留時間分別約為1.7 min和2.2 min。

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備：精密稱定燈盞乙素對照品2.0 mg置于10 mL容量瓶內(nèi)，加流動相定容至刻度，制備標(biāo)準(zhǔn)儲備液。測定時，將儲備液用流動相稀釋成1.0、2.0、5.0、10.0、50.0、100.0、250.0 μg/mL的系列燈盞乙素標(biāo)準(zhǔn)溶液，取離心管數(shù)支，分別精密加入不同濃度的燈盞乙素標(biāo)準(zhǔn)溶液20 μL，再加入空白血漿180 μL，渦旋混勻成使其濃度分別為0.1、0.2、0.5、1.0、5.0、10.0、25.0 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)含藥血漿，按“2.3”項操作，內(nèi)標(biāo)法測定，結(jié)果表明在0.1～25.0 μg/mL范圍內(nèi)燈盞乙素濃度與峰面積線性關(guān)系良好，而且重復(fù)性符合定量分析的要求，方程：y=4.95×10-2x-1.56×10-3，r=0.9997。

2.6 回收率測定：將0.2、1.0、10.0 μg·mL-1濃度的含燈盞乙素藥血漿樣品按“2.2”項方法處理，再按“2.3”項色譜條件記錄內(nèi)標(biāo)匹伐他汀和各濃度燈盞乙素的色譜峰面積，相應(yīng)濃度的燈盞乙素和內(nèi)標(biāo)混合溶液不經(jīng)萃取分別進樣分析，記錄峰面積。平行測定6次結(jié)果見表1。

表1 大鼠血漿燈盞乙素回收率（n=6）

2.7 精密度和穩(wěn)定性試驗：測定日內(nèi)和日間精密度，其中日內(nèi)精密度的RSD分別是4.55%，4.24%和3.83%；日間精密度的RSD分別是5.29%、4.75%和3.78%。測定結(jié)果表明血漿樣品反復(fù)凍融穩(wěn)定性較好，血漿樣品室溫放置穩(wěn)定性及冷凍放置穩(wěn)定性均較好。

2.8 體內(nèi)藥代動力學(xué)結(jié)果：用DAS2.0軟件對血藥濃度數(shù)據(jù)擬合分析，結(jié)果表明：燈盞乙素水劑和燈盞乙素脂質(zhì)體大鼠灌胃給藥藥動學(xué)過程均符合二室模型，主要藥動學(xué)參數(shù)見表2。

3 討 論

目前，國內(nèi)對燈盞乙素的藥理學(xué)研究較為深入，是中藥中開發(fā)較為成熟的品種。但目前上市品種存在生物利用度低、體內(nèi)消除迅速，半衰期短等問題，且溶液穩(wěn)定性差，注射液不良反應(yīng)多，這些都是燈盞花素上市制劑面臨的問題[5-6]。此外目前開發(fā)的劑型不少都是基于燈盞花素為基礎(chǔ)的，作為原料藥燈盞花素中主要成分燈盞乙素的含量存在差異，增加了質(zhì)量控制均一性的難度。本研究通過燈盞乙素水劑和脂質(zhì)體經(jīng)大鼠灌胃給藥后，測定其血藥濃度，計算t1/2（h），Tmax（h），Cmax（ng/mL），AUC0-t[ng/（h·mL）]，AUC0-∞[ng/（h·mL）]等主要藥代動力學(xué)參數(shù)。結(jié)果表明燈盞乙素水劑和脂質(zhì)體在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)特征具有顯著性差異。其原因可能是卡波姆修飾的脂質(zhì)體黏度增大，藥物擴散速度減慢，藥物在體內(nèi)的滯留時間延長，從而增強了藥物的靶向轉(zhuǎn)運及提高藥物的生物利用度。

表2 燈盞乙素水劑和燈盞乙素脂質(zhì)體大鼠體內(nèi)的主要藥動學(xué)參數(shù)n=6）

表2 燈盞乙素水劑和燈盞乙素脂質(zhì)體大鼠體內(nèi)的主要藥動學(xué)參數(shù)n=6）

images/BZ_26_175_2454_1196_2499.pngt1/2(h) 5.09±0.38 6.53±0.51 Tmax(h) 2.01±0.15 2.56±0.19 Cmax(μg/mL) 15.35±1.37 22.04±1.67 AUC0-24[μg/(h·mL)] 48.75±12.78 76.28±19.24 AUC0-∞[μg/(h·mL)] 50.03±13.45 80.96±15.26