miR-96-5p靶向FOXO1調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞衰老的作用

魯晴 譚海濤 韋燦燊 程志琳 張光文梁家敏 彭賈賈 羅雪文 黎靜

1廣西醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生理學(xué)教研室（南寧530021）；2廣西醫(yī)科大學(xué)第八附屬醫(yī)院，廣西數(shù)字醫(yī)學(xué)3D打印臨床研究中心（廣西貴港537100）

伴隨著人口數(shù)量的增長(zhǎng)和生活水平的不斷提升，老年人口的數(shù)量不斷增長(zhǎng)，衰老性疾病的發(fā)生率正處于持續(xù)上升狀態(tài)。原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥作為一種與增齡性相關(guān)的退行性疾病，已成為困擾眾多家庭老年人健康的重要疾病之一［1］。成骨細(xì)胞是參與骨形成的重要功能細(xì)胞，骨形成功能減退對(duì)骨質(zhì)疏松以及骨折的發(fā)生有著重要影響［2］。miRNA長(zhǎng)度約20 ～25 個(gè)核苷酸，是一系列具有調(diào)控功能的內(nèi)源性非編碼RNA。它在調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、凋亡、分化等過程中均起著重要作用。已有研究［3］表明多種miRNA 參與骨質(zhì)疏松的發(fā)病過程，對(duì)成骨細(xì)胞的調(diào)節(jié)起著重要作用。

大量研究表明隨年齡增長(zhǎng)的退行性變化是由自由基活性氧氧化損傷作用所致。而大劑量D-半乳糖可使體內(nèi)產(chǎn)生大量超氧陰離子自由基并對(duì)組織產(chǎn)生過氧化損害，這種生化和組織結(jié)構(gòu)的改變與自然衰老表現(xiàn)吻合［4］。因此，采用D-半乳糖制備衰老模型的方法是目前國(guó)際上公認(rèn)的衰老模型制作方法。筆者使用D-半乳糖進(jìn)行衰老小鼠模型制備，前期研究通過芯片分析，發(fā)現(xiàn)一些在衰老小鼠骨組織中差異表達(dá)的miRNA，其中，miR-96-5p 在衰老骨組織中呈顯著下調(diào)趨勢(shì)，且國(guó)外有研究［5］表明，miR-96-5p 通過抑制表皮生成因子受體信號(hào)通路促進(jìn)成骨分化，是成骨細(xì)胞的正調(diào)控因子。本研究旨在探討miR-96-5p 調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞衰老的作用及其機(jī)制，為老年性骨質(zhì)疏松癥的預(yù)防和治療挖掘新的治療靶點(diǎn)。

1 材料與方法

1.1 材料6～8 周昆明種小鼠20 只，雄性（廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供）。原代成骨細(xì)胞取自出生5 ～7 d 乳鼠顱頂骨的成骨細(xì)胞。μCT 檢測(cè)（廣州，中國(guó)）MEM α 培養(yǎng)基（美國(guó)hyclone 公司），膠原酶Ⅱ型（sigma 公司），BCIP/NBT 堿性磷酸酶顯色試劑盒（上海碧云天公司），PBS（北京索萊寶科技有限公司），胰蛋白酶-EDTA 消化液（0.25%）（北京索萊寶科技有限公司），β-半乳糖苷酶細(xì)胞衰老染色試劑盒（上海碧云天公司），Hoechst33258 染色液（上海碧云天公司），D-（+）半乳糖（北京索萊寶科技有限公司），cDNA 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（賽默飛世爾科技有限公司），miRNA cDNA 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（上海生物工程有限公司），miR-96-5p 模擬物/抑制物、riboFECT CP Transfection Kit（廣州銳博生物科技有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 D-半乳糖致衰小鼠模型的建立20 只6 ～8 周昆明種小鼠隨機(jī)分為青年對(duì)照組、衰老模型組，每組10 只。按照相關(guān)文獻(xiàn)［6］，衰老模型組每日上午頸背部皮下注射D-半乳糖200 mg/kg，連續(xù)12 周。青年對(duì)照組每日頸背部皮下注射相同劑量的生理鹽水。

1.2.2 骨組織μCT 分析12 周后，處死小鼠，取小鼠左側(cè)脛骨，10%福爾馬林固定后，μCT（μCTSharp ZKKS-MCT，廣州，中國(guó)）進(jìn)行成像掃描。測(cè)量參數(shù)包括：（1）骨體積（BV/TV）：測(cè)量范圍內(nèi)骨小梁體積占全部骨組織體積的百分比，反映骨小梁分布密度；（2）骨小梁厚度（Tb.Th）：骨小梁面積/骨小梁周長(zhǎng)）；（3）骨小梁密度（Tb.N）：（骨小梁周長(zhǎng)/骨小梁面積）；（4）骨小梁分離度（Tb.Sp）：［總面積-骨小梁面積］/骨小梁周長(zhǎng)。

1.2.3 成骨細(xì)胞衰老模型的建立按照相關(guān)文獻(xiàn)［7］，取出生后5 ～7 d的昆明乳鼠，分離顱骨獲得原代成骨細(xì)胞。將生長(zhǎng)狀態(tài)良好的小鼠成骨細(xì)胞接種于6 孔板。待細(xì)胞融合70% ～80%，給予含有濃度為20 g/L的D-半乳糖的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)48 h，以建立成骨細(xì)胞衰老模型。

1.2.4 β-半乳糖苷酶染色吸除細(xì)胞培養(yǎng)液，用PBS 清洗1 次，加入β-半乳糖苷酶1 mL 染色固定液，室溫固定15 min；吸除固定液，PBS 清洗，每孔加入1 mL 染色工作液，放置于37 ℃恒溫箱中孵育過夜。甘油封閉鏡下觀察，β-半乳糖苷酶染色后，衰老細(xì)胞呈深藍(lán)色，陰性細(xì)胞無著色。各組隨機(jī)計(jì)數(shù)100 個(gè)細(xì)胞中的陽性細(xì)胞數(shù)，計(jì)算陽性細(xì)胞率（%）。

1.2.5 細(xì)胞凋亡染色細(xì)胞生長(zhǎng)約50%～80%滿后，吸棄舊的培養(yǎng)基，加入0.5 mL 固定液，固定10 min。去固定液后用PBS 清洗，加入0.5 mL Hoechst33258染色液，5 min 后去染色液，用PBS 清洗。滴加抗熒光淬滅封片液，熒光顯微鏡可檢測(cè)到呈藍(lán)色的細(xì)胞核。各組隨機(jī)計(jì)數(shù)100 個(gè)細(xì)胞中的陽性細(xì)胞數(shù)，計(jì)算陽性細(xì)胞率（%）。

1.2.6 miR-96-5p mimic 及inhibitor 轉(zhuǎn)染細(xì)胞細(xì)胞傳代培養(yǎng)至細(xì)胞對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期接種于六孔板中，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，待細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)到30%～50%時(shí)按照riboFECT cp 轉(zhuǎn)染試劑說明書操作，每孔轉(zhuǎn)染物終濃度為50 nmol/L，轉(zhuǎn)染完成后將培養(yǎng)板置于37 ℃的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h。

1.2.7 Real time PCR（qRT-PCR）法檢測(cè)miR-96-5p 表達(dá)Trizol 法提取組織和細(xì)胞總RNA 并進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，采用熒光定量染料法檢測(cè)miRNA 表達(dá)水平（引物見表1）。表達(dá)水平每個(gè)樣本重復(fù)測(cè)量3 次。以U6 為miRNA 內(nèi)參參照標(biāo)準(zhǔn)，按照2-△△Ct計(jì)算基因相對(duì)表達(dá)量。

1.2.8 qRT-PCR法檢測(cè)骨形態(tài)發(fā)生蛋白2（BMP2）、堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）、FOXO1基因表達(dá)細(xì)胞處理后，Trizol 法提取細(xì)胞總RNA并進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，采用熒光定量染料法檢測(cè)各組基因表達(dá)水平（引物信息見表1）。每個(gè)樣本重復(fù)測(cè)量3 次，以GAPDH 為基因內(nèi)參參照標(biāo)準(zhǔn)，按照2-△△Ct計(jì)算基因相對(duì)表達(dá)量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法使用SPSS 17.0 統(tǒng)計(jì)軟件來進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)使用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示其集中趨勢(shì)。兩組間比較使用t檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 引物序列Tab.1 Primer sequence

2 結(jié)果

2.1 骨組織μCT 分析及成骨細(xì)胞半乳糖苷酶染色衰老模型組在BV/TV、Tb.N、Tb.Th、BMD 上明顯低于對(duì)照組（P＜0.01，表2）。β-半乳糖苷酶染色實(shí)驗(yàn)表明，D-gal 處理后衰老成骨細(xì)胞陽性細(xì)胞數(shù)量顯著高于對(duì)照組（P＜0.01，圖1A、B）。

表2 各組脛骨骨組織計(jì)量分析Tab.2 Quantitative analysis of tibia bone tissue in each group ±s

表2 各組脛骨骨組織計(jì)量分析Tab.2 Quantitative analysis of tibia bone tissue in each group ±s

注：與對(duì)照組比較，*P ＜0.01

組別對(duì)照組衰老組BV/TV 39.77±2.28 27.35±4.91*Tb.N 5.84±0.30 5.13±0.28*Tb.Th 67.34±5.87 54.43±4.76*BMD 313.44±23.94 242.25±32.20*

2.2 骨組織及成骨細(xì)胞中miRNA-96-5p 表達(dá)的變化與對(duì)照組比較，D-gal 誘導(dǎo)后衰老小鼠脛骨組織中miR-96-5p 表達(dá)顯著低于對(duì)照組（P＜0.05，圖2A）。與對(duì)照組比較，D-gal 衰老成骨細(xì)胞中miR-96-5p 表達(dá)顯著低于對(duì)照組（P＜0.01，圖2B）。

圖1 對(duì)照組（Control）與衰老組（D-gal）成骨細(xì)胞β-半乳糖苷酶染色情況分析Fig.1 Analysis of β-galactosidase staining of osteoblasts in the control group and aging group

圖2 對(duì)照組（Control）與衰老組（D-gal）骨組織及成骨細(xì)胞中miRNA-96-5p 表達(dá)情況Fig.2 MiRNA-96-5p expression in bone tissue and osteoblasts in the control and aging groups

2.3 miR-96-5p mimic 及inhibitor 處理成骨細(xì)胞后miR-96-5p的表達(dá)為進(jìn)一步探討miR-96-5p的生物學(xué)功能，筆者采用miR-96-5p mimic（過表達(dá)）及miR-96-5p inhibitor（抑制）轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞。結(jié)果顯示，miR-96-5p mimic 轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞后，細(xì)胞miR-96-5p 表達(dá)較陰性對(duì)照組表達(dá)顯著升高（P＜0.01，圖3A）。miR-96-5p inhibitor 轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞48 h 后，細(xì)胞miR-96-5p 表達(dá)較陰性對(duì)照組表達(dá)顯著降低（P＜0.05，圖3B）。

2.4 miR-96-5p對(duì)成骨細(xì)胞衰老的影響作用β-半乳糖苷酶染色實(shí)驗(yàn)表明，與對(duì)照組比較，miR-96-5p mimic 轉(zhuǎn)染后細(xì)胞陽性數(shù)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但是miR-96-5p-inhibitor 轉(zhuǎn)染后增加衰老陽性細(xì)胞數(shù)量（P＜0.05，圖4、5）。

2.5 miR-96-5p 對(duì)成骨細(xì)胞凋亡的影響Hoechst 33258 染色后在熒光顯微鏡下觀察，正常細(xì)胞的細(xì)胞核呈正常的藍(lán)色，而凋亡的細(xì)胞核會(huì)呈現(xiàn)致密濃染，或呈碎塊狀致密濃染（圖6）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，miR-96-5p mimic 轉(zhuǎn)染細(xì)胞后，成骨細(xì)胞的凋亡百分比與對(duì)照組無顯著差異；而miR-96-5p inhibitor轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞后，成骨細(xì)胞凋亡細(xì)胞百分比顯著高于對(duì)照組（圖6、7，P＜0.01）。

圖3 miRNA-96-5p mimic/inhibitor 處理后成骨細(xì)胞miR-96-5p 表達(dá)情況Fig.3 Expression of miR-96-5p in osteoblasts after treatment with miRNA-96-5p mimic/inhibitor

2.6 miR-96-5p 對(duì)成骨細(xì)胞ALP、BMP2 mRNA表達(dá)的影響為探討miRNA-96-5p mimic/inhibitor轉(zhuǎn)染后成骨細(xì)胞中骨形成相關(guān)指標(biāo)的變化，采用qRT-PCR 檢測(cè)ALP、BMP2 表達(dá)基因在細(xì)胞中的表達(dá)。與對(duì)照組比較，miR-96-5p mimic干預(yù)后，成骨細(xì)胞中ALP、BMP2 基因表達(dá)顯著升高（圖8A，P＜0.01）。而miR-96-5p inhibitor 轉(zhuǎn)染后細(xì)胞中ALP、BMP2 基因表達(dá)顯著降低（圖8B，P＜0.05）。

圖4 miRNA-96-5p mimic/inhibitor 處理后成骨細(xì)胞β-半乳糖苷酶衰老染色情況（100×）Fig.4 Aging staining of β-galactosidase in osteoblasts after treatment with miRNA-96-5p mimic/inhibitor（100×）

圖5 miRNA-96-5p mimic/inhibitor 處理后成骨細(xì)胞后衰老染色陽性細(xì)胞數(shù)分析Fig.5 Analysis of the number of senescent positive cells after treatment with miRNA-96-5p mimic/inhibitor

2.7 miR-96-5p的靶基因預(yù)測(cè)通過生物信息學(xué)軟件Targetscan 對(duì)miR-96-5p的靶基因進(jìn)行預(yù)測(cè)分析，分析結(jié)果表明，miR-96-5p 可與FOXO1的3′-UTR 靶向結(jié)合（圖9）。

2.8 miR-96-5p 對(duì)成骨細(xì)胞FOXO1 mRNA 表達(dá)的影響采用qRT-PCR 檢測(cè)miRNA-96-5p mimic/inhibitor 處理后成骨細(xì)胞中FOXO1 mRNA 基因的表達(dá)情況，結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，miRNA-96-5p mimic 組FOXO1 mRNA 表達(dá)顯著下降（P＜0.01，圖10A），miRNA-96-5p inhibitor 組FOXO1 mRNA 表達(dá)水平顯著上調(diào)（P＜0.01，圖10B）。

圖6 miRNA-96-5p mimic/inhibitor 處理后成骨細(xì)胞Hoechst 染色情況（×100）Fig.6 Hoechst staining of osteoblasts after treatment with miRNA-96-5p mimic/inhibitor（×100）

圖7 miRNA-96-5p mimic/inhibitor 處理后成骨細(xì)胞Hoechst染色凋亡細(xì)胞數(shù)分析Fig.7 Analysis of apoptotic cells after Hoechst staining of osteoblasts after treatment with miRNA-96-5p mimic/inhibitor

圖8 miRNA-96-5p mimic/inhibitor 處理后成骨細(xì)胞相關(guān)基因表達(dá)的變化Fig.8 Changes of expression of related genes in osteoblasts after treatment with mirna-96-5p mimic/inhibitor

圖9 miR-96-5p的靶基因預(yù)測(cè)結(jié)合位點(diǎn)Fig.9 Target genes of mir-96-5p predicted binding sites

圖10 不同處理后成骨細(xì)胞基因FOXO1 表達(dá)的變化Fig.10 Changes in the expression of FOXO1 gene in osteoblasts after different treatments

2.9 D-gal 處理成骨細(xì)胞后FOXO1 mRNA 表達(dá)的變化為探討衰老成骨細(xì)胞中FOXO1 mRNA 基因的表達(dá)情況，采用qRT-PCR 檢測(cè)基因在細(xì)胞中的表達(dá)。結(jié)果顯示，經(jīng)D-gal 處理48 h 后，與對(duì)照組比較FOXO1表達(dá)水平顯著上調(diào)（P＜0.01，圖11）。

圖11 D-gal 處理48 h 后成骨細(xì)胞基因FOXO1 mRNA 表達(dá)的變化Fig.11 Changes of FOXO1 mRNA expression in osteoblasts after D-gal treatment for 48 h

3 討論

增齡過程中成骨細(xì)胞的衰老退行性改變是導(dǎo)致老年人骨質(zhì)疏松癥的關(guān)鍵因素之一，衰老受多種因素調(diào)控，目前為大眾所廣泛接受的是氧化應(yīng)激學(xué)說，即衰老生命體中自由基代謝失衡導(dǎo)致機(jī)體組織受損，研究表明大量D-半乳糖進(jìn)入機(jī)體后由于干擾正常代謝會(huì)導(dǎo)致自由基失衡使組織器官進(jìn)入衰老狀態(tài)［4］。本研究通過D-半乳糖法建立衰老小鼠模型和衰老成骨細(xì)胞模型后，使衰老小鼠脛骨組織BV/TV、Tb.N、Tb.Th、BMD水平顯著降低，衰老成骨細(xì)胞β-半乳糖苷酶染色陽性細(xì)胞數(shù)目也顯著增多，這些結(jié)果提示D-半乳糖處理后骨組織和細(xì)胞均發(fā)生了衰老相關(guān)的病理生理變化。

miRNA 在基因調(diào)控中起著重要作用。miRNAs通過與靶mRNA的3′未翻譯區(qū)的堿基配對(duì)負(fù)調(diào)控基因表達(dá)，并進(jìn)一步誘導(dǎo)其降解或抑制其翻譯，參與調(diào)控多種生物學(xué)過程，包括細(xì)胞的分化、增殖、凋亡和發(fā)育等，是細(xì)胞增殖分化中的重要因子［3］。研究［8］發(fā)現(xiàn)，miRNA 可參與調(diào)控骨組織穩(wěn)態(tài)，在骨生長(zhǎng)發(fā)育，骨代謝以及骨細(xì)胞增生分化等過程中均發(fā)揮著重要調(diào)控作用。例如，miR-214 通過抑制ATF4（activating transcriptional factor 4）基因表達(dá)抑制成骨細(xì)胞MC3T3-E1的活性和骨形成；miR-146a通過靶向抑制人間充質(zhì)干細(xì)胞JMJD3（jumonji domain containing 3），從而抑制成骨分化［5］。相關(guān)臨床研究還發(fā)現(xiàn)miR-96-5p 在絕經(jīng)后股骨頭壞死患者的骨組織中下調(diào)表達(dá)，其表達(dá)異?？赡苁枪晒穷^壞死的一個(gè)重要機(jī)制［9］。本研究發(fā)現(xiàn)，D-半乳糖誘導(dǎo)衰老的雄性小鼠骨組織及成骨細(xì)胞中miR-96-5p的表達(dá)均顯著降低，提示miR-96-5p 還可能是調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞衰老的重要因素。

衰老細(xì)胞死亡的實(shí)質(zhì)就是細(xì)胞凋亡。細(xì)胞程序性死亡對(duì)衰老起主動(dòng)作用，并引起特征性形態(tài)改變及衰老性生長(zhǎng)停滯［10］。細(xì)胞凋亡也是調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞穩(wěn)態(tài)的重要因素。隨著年齡的增加，成骨細(xì)胞的凋亡數(shù)量增加從而使成骨細(xì)胞的數(shù)量和活性降低，最終導(dǎo)致骨形成減少。成骨細(xì)胞凋亡在骨質(zhì)疏松癥的發(fā)病過程中起著非常重要的作用［11］。本研究中，抑制成骨細(xì)胞miR-96-5p的表達(dá)不僅可以增加成骨細(xì)胞凋亡的數(shù)量，也可以加劇成骨細(xì)胞衰老的程度，該結(jié)果提示miR-96-5p 具有調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞衰老的作用，其作用可能與促進(jìn)成骨細(xì)胞凋亡有關(guān)。

成骨細(xì)胞是骨形成的主要功能細(xì)胞，對(duì)合成骨基質(zhì)、分泌相關(guān)物質(zhì)及骨組織礦化等方面起到重要作用［12］。成骨細(xì)胞分化過程中，細(xì)胞因子起到了關(guān)鍵性的作用。其中ALP 是成骨細(xì)胞增殖分化的重要指標(biāo)，對(duì)骨組織的產(chǎn)生和重建起著重要作用［12］。BMP-2 可以促進(jìn)骨生成和誘導(dǎo)成骨細(xì)胞分化，在成骨細(xì)胞分化和骨形成過程中也起著重要的作用［12］。本研究中，抑制成骨細(xì)胞miR-96-5p的表達(dá)可導(dǎo)致骨分化因子ALP 及BMP-2 mRNA 顯著下調(diào)，進(jìn)一步提示miR-96-5p 促進(jìn)成骨細(xì)胞衰老導(dǎo)致了骨分化程度降低，miR-96-5p 可能是調(diào)節(jié)衰老成骨細(xì)胞退行性改變的重要因子。

miRNA 可通過調(diào)控靶基因發(fā)揮不同的生物學(xué)功能。FOXO1 是叉頭轉(zhuǎn)錄因子家族中的一員，能夠參與調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激機(jī)體能量代謝及眾多生物學(xué)過程，同時(shí)也參與調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞合成新骨，破骨細(xì)胞吸收礦化骨質(zhì)，起著影響骨代謝，調(diào)控生物體骨量的作用［13］。本研究通過TargetScan 軟件預(yù)測(cè)到FOXO1 mRNA的啟動(dòng)子區(qū)有miR-96-5p的結(jié)合位點(diǎn)。進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證實(shí)，miR-96-5pmimic 干預(yù)成骨細(xì)胞后可以顯著降低細(xì)胞中FOXO1 mRNA 表達(dá)，miR-96-5pinhibitor 干預(yù)后可以顯著升高細(xì)胞中FOXO1 mRNA 表達(dá)，同時(shí)，F(xiàn)OXO1 mRNA 在衰老成骨細(xì)胞中也是顯著高于對(duì)照組。這些結(jié)果提示，miR-96-5p 很可能通過靶向調(diào)節(jié)FOXO1 mRNA 來影響成骨細(xì)胞的衰老過程。盡管有些研究表明，F(xiàn)OXO1的高表達(dá)可通過降低成骨細(xì)胞內(nèi)的氧化應(yīng)激，對(duì)骨的形成具有一定的促進(jìn)作用［14］。然而也有研究認(rèn)為，F(xiàn)OXO1 對(duì)骨形成代謝起到了負(fù)反饋調(diào)節(jié)的作用。在成骨細(xì)胞前體細(xì)胞和脂肪細(xì)胞中敲除掉FOXO1 轉(zhuǎn)錄因子可以通過激活WNT 信號(hào)通路，提高成骨細(xì)胞的數(shù)量和骨基質(zhì)的量［15］。還有研究表明，miR-96-5p 可通過激活Wnt/β-catenin 通路來調(diào)控膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖［4］。因此，miR-96-5p是否可通過調(diào)控FOXO1抑制WNT信號(hào)通路，從而促進(jìn)衰老成骨細(xì)胞的退行性改變，其具體分子機(jī)制需要進(jìn)一步研究。

綜上所述，衰老過程中miR-96-5p 在衰老骨組織和成骨細(xì)胞中低表達(dá)，miR-96-5p 可能通過負(fù)調(diào)控FOXO1 影響成骨細(xì)胞的衰老進(jìn)程，其具體分子機(jī)制有待進(jìn)一步研究。本研究結(jié)果為研究增齡性骨退行性變的分子機(jī)制提供新的理論基礎(chǔ)，為骨質(zhì)疏松癥的治療提供新的干預(yù)靶點(diǎn)。