飼料中添加枯草芽孢桿菌和酵母培養(yǎng)物對(duì)珍珠龍膽石斑魚幼魚生長性能、體組成及養(yǎng)殖水質(zhì)的影響

王成強(qiáng)，李寶山*，王際英，黃炳山，郝甜甜，孫永智，馬長興，周瑩

（1.山東省海洋資源與環(huán)境研究院，山東省海洋生態(tài)修復(fù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 煙臺(tái) 264006；2.上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院，水產(chǎn)科學(xué)國家級(jí)實(shí)驗(yàn)教學(xué)示范中心，上海 201306）

隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖集約化的不斷發(fā)展，養(yǎng)殖生態(tài)環(huán)境日益惡化，病害頻發(fā)，而抗菌藥物的濫用使得水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)面臨著非常嚴(yán)峻的考驗(yàn)。為此，許多研究者致力于各種抗菌藥物替代品的研究，益生菌（乳酸菌、枯草芽孢桿菌、酵母菌等制劑）因具有安全性高、促進(jìn)動(dòng)物生長、提高機(jī)體免疫能力及改善水質(zhì)等優(yōu)點(diǎn)，成了近年來的研究熱點(diǎn)[1]?？莶菅挎邨U菌（Bacillus subtilis）因抗逆性強(qiáng)、穩(wěn)定性高和產(chǎn)酶能力強(qiáng)，對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物的生長和免疫具有促進(jìn)作用，并且能夠改良水質(zhì)，近年來被廣泛應(yīng)用[2-4]；酵母培養(yǎng)物（yeast culture）具有無毒副作用、不產(chǎn)生耐藥性且可部分替代抗生素等優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)含有豐富的維生素、有機(jī)酸、氨基酸等營養(yǎng)物質(zhì)，不僅能夠提高動(dòng)物生長性能、降低飼料系數(shù)，還可以優(yōu)化動(dòng)物腸道微生物菌群結(jié)構(gòu)，改善腸道健康狀況[5-6]。

本研究擬從健康珍珠龍膽石斑魚（Epinephelus fuscoguttatus♀×Epinephelus lanceolatus♂）腸道中提取分離枯草芽孢桿菌，發(fā)酵制成枯草芽孢桿菌菌劑，配合酵母培養(yǎng)物添加到飼料中，飼喂珍珠龍膽石斑魚幼魚。通過它們攝食不同配比的枯草芽孢桿菌和酵母培養(yǎng)物飼料，研究珍珠龍膽石斑魚幼魚的生長性能、體組成及養(yǎng)殖水質(zhì)的變化情況。研究結(jié)果可為飼料中2種添加劑的使用量提供一定的理論數(shù)據(jù)，為通過飼料中添加微生態(tài)制劑調(diào)節(jié)養(yǎng)殖水質(zhì)的可行性提供理論參考，為今后生物飼料的發(fā)展奠定一定的理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)所用枯草芽孢桿菌菌劑由山東省海洋生態(tài)修復(fù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室制備。從健康珍珠龍膽石斑魚腸道細(xì)菌中分離和培養(yǎng)枯草芽孢桿菌菌種，并進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)，制成干菌粉（活菌數(shù)2.0×109CFU/g），以玉米淀粉為載體，作為飼料添加劑，具體步驟參考賀國龍等[7]的研究方法，并稍作修改。根據(jù)珍珠龍膽石斑魚營養(yǎng)需求，配制含粗蛋白52.50%、粗脂肪11.63%的基礎(chǔ)飼料。分別在基礎(chǔ)飼料中添加0（B0）、0.5%（B1）、1.0%（B2）的枯草芽孢桿菌制劑，同時(shí)在每個(gè)枯草芽孢桿菌水平分別添加0（Y0）、0.5%（Y1）、1.0%（Y2）的酵母培養(yǎng)物（主要成分為蛋白質(zhì)、氨基酸、多肽、核酸、β-葡聚糖、甘露糖、芳香物及未知生長因子等，由徐州賽博生物科技有限公司提供），共制成9組等氮等脂的試驗(yàn)飼料，分別記為 Y0B0（活菌數(shù) 0）、Y0B1（活菌數(shù) 4.15×106CFU/g）、Y0B2（8.04×106CFU/g）、Y1B0（0）、Y1B1（4.03×106CFU/g）、Y1B2（7.95×106CFU/g）、Y2B0（0）、Y2B1（3.89×106CFU/g）、Y2B2（8.24×106CFU/g），以Y0B0組為對(duì)照組?；A(chǔ)飼料配方及營養(yǎng)成分見表1。

表1 基礎(chǔ)飼料配方及營養(yǎng)成分（干物質(zhì)）Table 1 Basic formula and nutrient composition of experimental diets(dry matter)

制作飼料時(shí)，微量成分添加采取逐級(jí)擴(kuò)大法，先將所有原料粉碎后過80目標(biāo)準(zhǔn)篩，按配比稱量后混勻，加入魚油與干粉充分混勻，之后加入適量的蒸餾水混合均勻，最后用小型顆粒飼料擠壓機(jī)制成2種型號(hào)(直徑分別為2.5 mm和3.5 mm)的飼料顆粒，在60℃條件下烘干，用飼料袋包裝后，置于通風(fēng)干燥處儲(chǔ)存，備用。

1.2 試驗(yàn)用魚及養(yǎng)殖管理

養(yǎng)殖試驗(yàn)在山東省海洋資源與環(huán)境研究院東營實(shí)驗(yàn)基地循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)中進(jìn)行，試驗(yàn)用魚為該基地當(dāng)年繁育的同一批珍珠龍膽石斑魚幼魚。養(yǎng)殖試驗(yàn)開始之前，先用對(duì)照組飼料暫養(yǎng)15 d，使其充分適應(yīng)養(yǎng)殖環(huán)境。正式試驗(yàn)前，將試驗(yàn)魚饑餓24 h，挑選大小均勻、體色健康的珍珠龍膽石斑魚幼魚[平均體質(zhì)量為（23.41±0.47）g]，隨機(jī)放養(yǎng)于18個(gè)養(yǎng)殖桶（70 cm×80 cm）中，每個(gè)桶內(nèi)放30尾幼魚，每個(gè)試驗(yàn)組設(shè)置3個(gè)重復(fù)，試驗(yàn)周期為8周。養(yǎng)殖期間，每天8：30和16：30各飽食投喂1次，投喂30 min后吸出殘餌，并記錄殘餌數(shù)量。養(yǎng)殖期間水溫控制在（28±1）℃，溶解氧＞6.3 mg/L，鹽度為23.5～26.5，用氧氣泵持續(xù)增氧。

1.3 生長指標(biāo)分析

在8周養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后，將試驗(yàn)魚饑餓24 h，從每個(gè)養(yǎng)殖桶內(nèi)將試驗(yàn)魚全部撈起，進(jìn)行稱量、計(jì)數(shù)，并分別計(jì)算存活率、特定生長率、攝食率、飼料效率、蛋白質(zhì)效率。公式如下：

存活率（survival rate,SR）=終末尾數(shù)/初始尾數(shù)×100%；

特定生長率（specific growth rate,SGR）=（ln終末體質(zhì)量－ln初始體質(zhì)量）/試驗(yàn)天數(shù)/d×100%；

攝食率（feeding rate,FR）=攝食量/g×2/[（終末體質(zhì)量/g+初始體質(zhì)量/g）×試驗(yàn)天數(shù)/d]×100%；

飼料效率（feed efficiency,FE）=（終末體質(zhì)量/g－初始體質(zhì)量/g）/攝食飼料干質(zhì)量/g×100%；

蛋白質(zhì)效率（protein efficiency ratio,PER）=（終末體質(zhì)量/g－初始體質(zhì)量/g）/蛋白質(zhì)攝入量/g×100%.

1.4 飼料及全魚常規(guī)營養(yǎng)成分測定

飼料及全魚的水分含量采用在105℃條件下烘干至恒量法（GB/T 6435—2006）測定；粗蛋白質(zhì)含量采用凱氏定氮法（GB/T 6432—2006）測定；粗脂肪含量采用索氏抽提法（GB/T 6433—2006）測定；粗灰分含量采用馬弗爐在550℃條件下失重法（GB/T 6438—2007）測定。

1.5 水樣采集及指標(biāo)測定

從試驗(yàn)中期（第29天）開始封閉循環(huán)水，充氣養(yǎng)殖12 d，其間正常投喂，同樣在投喂30 min后吸出殘餌，并記錄殘餌數(shù)量，同時(shí)補(bǔ)充水量至規(guī)定水位。分別在封閉循環(huán)水后的第3、6、9、12天取水樣，方法如下：充分混勻養(yǎng)殖桶內(nèi)水體，在離水面15 cm處取水樣，用來分析水體中氨氮、亞硝酸鹽含量和化學(xué)需氧量。12 d之后，恢復(fù)循環(huán)水養(yǎng)殖，直至試驗(yàn)結(jié)束。水樣的氨氮、亞硝酸鹽含量和化學(xué)需氧量的測定分別采用納氏試劑法、重氮偶氮光度法和酸性高錳酸鉀法[8]。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。以枯草芽孢桿菌和酵母培養(yǎng)物添加量為影響因素，進(jìn)行雙因素方差分析（two-way ANOVA），且交互作用不顯著時(shí)，分析枯草芽孢桿菌和酵母培養(yǎng)物的主效應(yīng)。另外，將兩者視為一個(gè)因素，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析（one-way ANOVA），用Tukey檢驗(yàn)方法對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行多重比較，P＜0.05表示處理組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)。

2 結(jié)果

2.1 枯草芽孢桿菌和酵母培養(yǎng)物對(duì)幼魚生長性能的影響

如表2所示：飼料中枯草芽孢桿菌和酵母培養(yǎng)物水平對(duì)幼魚存活率（91.11%～98.89%）的影響差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。在每個(gè)酵母培養(yǎng)物添加水平下，飼料中枯草芽孢桿菌水平能夠顯著影響幼魚SGR，且在0.5%添加水平幼魚獲得最高SGR（P＜0.05）。在每個(gè)枯草芽孢桿菌添加水平下，隨著飼料中酵母培養(yǎng)物添加量的增加，幼魚SGR先升高后降低，且也在0.5%添加組中幼魚SGR較高（P＜0.05）。試驗(yàn)結(jié)果也顯示，幼魚SGR在Y1B1和Y1B2組處于較高水平，顯著高于對(duì)照組（Y0B0）和Y2B2組，而枯草芽孢桿菌和酵母培養(yǎng)物對(duì)幼魚SGR沒有表現(xiàn)出顯著的交互作用（P＞0.05）。同時(shí)，結(jié)果顯示，F(xiàn)E和PER呈現(xiàn)同SGR相似的變化趨勢，且枯草芽孢桿菌和酵母培養(yǎng)物對(duì)兩者均未表現(xiàn)出顯著的交互作用（P＞0.05）。另外，不同試驗(yàn)組間幼魚攝食率無顯著性差異（P＞0.05），而主效應(yīng)分析顯示，枯草芽孢桿菌對(duì)幼魚攝食率具有顯著性影響（P＜0.05）。

2.2 枯草芽孢桿菌和酵母培養(yǎng)物對(duì)幼魚全魚體組成的影響

飼料中枯草芽孢桿菌和酵母培養(yǎng)物水平對(duì)幼魚全魚體組成的影響如表3所示。幼魚在攝食不同飼料8周后，其全魚粗蛋白、粗脂肪、粗灰分和水分含量在各組之間有一定的波動(dòng)，但是均無顯著性差異（P＞0.05）。同時(shí)，枯草芽孢桿菌和酵母培養(yǎng)物對(duì)幼魚體組成各項(xiàng)指標(biāo)也均未表現(xiàn)出顯著的交互作用（P＞0.05）。

表2 枯草芽孢桿菌和酵母培養(yǎng)物對(duì)幼魚生長性能的影響Table 2 Effects of dietary B.subtilis and yeast culture on growth performance of juveniles

表3 枯草芽孢桿菌和酵母培養(yǎng)物對(duì)幼魚全魚體組成的影響Table 3 Effects of dietary B.subtilis and yeast culture on whole fish body composition of juveniles %

2.3 枯草芽孢桿菌和酵母培養(yǎng)物對(duì)養(yǎng)殖水體中氨氮含量的影響

試驗(yàn)結(jié)果（表4）顯示，隨著養(yǎng)殖時(shí)間的增加，各試驗(yàn)組養(yǎng)殖水體中氨氮含量均呈顯著上升趨勢，且Y0B0、Y2B0和Y2B2試驗(yàn)組增幅較大，而Y1B1和Y1B2試驗(yàn)組的增幅較小。與對(duì)照組相比，在第6天時(shí)，Y1B1和Y1B2試驗(yàn)組氨氮含量分別降低了47.83%和45.65%；在第9天時(shí)分別降低了48.53%和46.57%；在第12天時(shí)分別降低了32.84%和27.16%。結(jié)果也顯示，枯草芽孢桿菌和酵母培養(yǎng)物對(duì)養(yǎng)殖水體中氨氮含量表現(xiàn)出顯著的交互作用（P＜0.05）（除第3天外）。

2.4 枯草芽孢桿菌和酵母培養(yǎng)物對(duì)養(yǎng)殖水體中亞硝酸鹽含量的影響

如表5所示，在第3天時(shí)，各試驗(yàn)組養(yǎng)殖水體亞硝酸鹽含量還未表現(xiàn)出顯著性差異。而在第6天時(shí)，不同試驗(yàn)組間已表現(xiàn)出顯著性差異，與對(duì)照組相比，Y1B1和Y1B2試驗(yàn)組亞硝酸鹽含量分別降低了28.00%和24.00%；在第9天時(shí)分別降低了34.15%和29.27%；在第12天時(shí)分別降低了28.81%和27.12%。同時(shí)，在第6、9、12天時(shí)，枯草芽孢桿菌和酵母培養(yǎng)物對(duì)養(yǎng)殖水體中亞硝酸鹽含量均表現(xiàn)出顯著的交互作用（P＜0.05）。

2.5 枯草芽孢桿菌和酵母培養(yǎng)物對(duì)養(yǎng)殖水體中化學(xué)需氧量的影響

由表6可以看出：與對(duì)照組相比，在第3天時(shí)，Y1B1和Y1B2試驗(yàn)組化學(xué)需氧量分別降低了20.59%和18.72%；在第6天時(shí)分別降低了28.99%和25.58%；在第9天時(shí)分別降低了33.18%和30.59%；在第12天時(shí)分別降低了31.65%和28.57%。結(jié)果顯示，在水質(zhì)監(jiān)控期間，隨著試驗(yàn)天數(shù)的延長，各試驗(yàn)組中化學(xué)需氧量均在升高，且Y1B1和Y1B2試驗(yàn)組與對(duì)照組和Y2B2組相比有一定幅度的降低趨勢。同時(shí)，試驗(yàn)結(jié)果表明，在第3、6、9、12天時(shí)，枯草芽孢桿菌和酵母培養(yǎng)物對(duì)養(yǎng)殖水體中化學(xué)需氧量均表現(xiàn)出顯著的交互作用（P＜0.05）。

3 討論

3.1 枯草芽孢桿菌和酵母培養(yǎng)物對(duì)幼魚生長性能有一定的影響

枯草芽孢桿菌是當(dāng)前水產(chǎn)養(yǎng)殖中應(yīng)用較為廣泛的一種飼料添加劑，具有較強(qiáng)的耐酸、耐高溫等特征，在飼料制作及動(dòng)物腸道內(nèi)均能保持較高的穩(wěn)定性，能夠產(chǎn)生多種營養(yǎng)物質(zhì)如維生素、氨基酸、促生長因子等，參與機(jī)體的新陳代謝，同時(shí)進(jìn)入腸道后，能夠在腸道上部迅速復(fù)活與定殖，并產(chǎn)生作用較強(qiáng)的蛋白酶、淀粉酶、纖維素酶等，從而提高營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，維持和調(diào)節(jié)魚體腸道菌群生態(tài)平衡，促進(jìn)動(dòng)物的生長[9]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，當(dāng)飼料中添加0.5%枯草芽孢桿菌時(shí)，能夠顯著提高珍珠龍膽石斑魚幼魚的特定生長率和飼料效率，說明飼料中適宜的枯草芽孢桿菌能夠?qū)φ渲辇埬懯唪~幼魚的生長性能產(chǎn)生顯著的促進(jìn)作用，這同LIU等[10]在斜帶石斑魚（Epinephelus coioides）、孫盛明等[11]在團(tuán)頭魴（Megalobrama amblycephala）、程遠(yuǎn)等[12]在吉富羅非魚（Oreochromis niloticus）、劉曉勇等[13]在雜交鱘（Acipenser baeri♂×Acipenser schrenkii♀）中的研究結(jié)果相一致。另外，AI等[14]、仇明等[15]的研究結(jié)果還表明，當(dāng)飼料中枯草芽孢桿菌添加量過高時(shí)，魚體的生長性能會(huì)受到一定的抑制；本試驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)，當(dāng)飼料中枯草芽孢桿菌添加量為1.0%時(shí)，幼魚的SGR會(huì)低于相應(yīng)的0.5%添加組，同先前的研究結(jié)果一致。產(chǎn)生這一結(jié)果的原因可能是，魚體攝食含枯草芽孢桿菌較高的飼料后，導(dǎo)致其腸道內(nèi)枯草芽孢桿菌數(shù)量過高，破壞了腸道內(nèi)原有的微生物動(dòng)態(tài)平衡，使得腸道內(nèi)菌群結(jié)構(gòu)失衡，抑制了魚體內(nèi)內(nèi)源酶的活性，降低了其對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收能力，從而使得魚體的生長性能受到抑制。

表4 枯草芽孢桿菌和酵母培養(yǎng)物對(duì)養(yǎng)殖水體中氨氮含量的影響Table 4 Effects of dietary B.subtilis and yeast culture on NH3-N content in farming water mg/L

表5 枯草芽孢桿菌和酵母培養(yǎng)物對(duì)養(yǎng)殖水體中亞硝酸鹽含量的影響Table 5 Effects of dietary B.subtilis and yeast culture on NO2－-N content in farming water mg/L

表6 枯草芽孢桿菌和酵母培養(yǎng)物對(duì)養(yǎng)殖水體化學(xué)需氧量的影響Table 6 Effects of dietary B.subtilis and yeast culture on chemical oxygen demand(COD)content in farming water mg/L

本研究顯示，在每個(gè)枯草芽孢桿菌水平上，當(dāng)飼料中酵母培養(yǎng)物添加量為0.5%時(shí)，幼魚獲得最佳的SGR、FE和PER。這同樣也說明，飼料中適宜水平的酵母培養(yǎng)物對(duì)魚體的生長具有一定的促進(jìn)作用。何遠(yuǎn)發(fā)等[16]研究證實(shí)，飼料中添加0.30%～0.50%酵母培養(yǎng)物能夠顯著提高凡納濱對(duì)蝦（Litopenaeusvannamei）的增重率；溫俊[17]在牙鲆（Paralichthys olivaceus）研究中也發(fā)現(xiàn)，酵母培養(yǎng)物在促進(jìn)牙鲆的生長和免疫方面具有積極作用。

同時(shí)，本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)飼料中酵母培養(yǎng)物和枯草芽孢桿菌的添加水平為0.5%+0.5%（Y1B1組）或0.5%+1.0%（Y1B2組）時(shí)，幼魚的SGR、FE顯著高于對(duì)照組，生長性能處于較佳水平，而不同試驗(yàn)組間幼魚的攝食率并無顯著性差異，這也說明飼料利用率的提高是枯草芽孢桿菌和酵母培養(yǎng)物促進(jìn)珍珠龍膽石斑魚幼魚生長的重要方式之一。推測其原因：一方面，可能是因?yàn)榭莶菅挎邨U菌在腸道內(nèi)定殖，抑制了有害菌繁殖，促進(jìn)了腸道黏膜（絨毛）的生長，同時(shí)，枯草芽孢桿菌通過分泌蛋白酶和淀粉酶增加了腸道的消化吸收功能。另一方面，可能是因?yàn)榻湍概囵B(yǎng)物中含有豐富的氨基酸、葡萄糖、維生素、有機(jī)酸等營養(yǎng)物質(zhì)及一些未知的促生長因子，為幼魚的生長提供了營養(yǎng)物質(zhì)；另外，酵母培養(yǎng)物中含有的甘露寡糖成分可以促進(jìn)腸道中有益菌的生長，阻止病菌侵入，從而維持腸道菌群的平衡。同時(shí)，本試驗(yàn)添加的是原籍枯草芽孢桿菌，在酵母培養(yǎng)物的基礎(chǔ)上，有可能更好地在腸道內(nèi)定殖和繁殖，這也暗示兩者在功能上可能形成相互協(xié)同的作用，從而對(duì)幼魚生長產(chǎn)生積極的影響。

3.2 枯草芽孢桿菌和酵母培養(yǎng)物對(duì)幼魚全魚體組成有一定的影響

體組成是影響水產(chǎn)動(dòng)物肉質(zhì)品質(zhì)的重要因素，而目前國內(nèi)外尚無就枯草芽孢桿菌和酵母培養(yǎng)物與水產(chǎn)動(dòng)物體組成相關(guān)性的確切研究定論。本試驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)飼料中添加不同水平的枯草芽孢桿菌和酵母培養(yǎng)物時(shí)，幼魚全魚體組成并未受到顯著影響。這與先前的部分研究結(jié)果相似。沈斌乾等[18]在青魚（Mylopharyngodon piceus）幼魚、MERRIFIELD等[19]在虹鱒（Oncorhynchus mykiss）幼魚、溫俊[17]在牙鲆中的研究結(jié)果表明，飼喂枯草芽孢桿菌對(duì)全魚體組成均無顯著影響。另外，康學(xué)會(huì)等[20]在飼料中添加酵母培養(yǎng)物替代魚粉的研究中發(fā)現(xiàn)，異育銀鯽（Carassius auratus gibelio）全魚體組成均未受到顯著影響，但6%替代組的全魚粗蛋白和粗脂肪含量高于對(duì)照組、8%和10%替代組。邱燕[21]在草魚（Ctenopharyngodon idellus）中的研究表明，在飼料中添加酵母培養(yǎng)物并未對(duì)全魚體成分產(chǎn)生顯著的影響。然而，也有一些研究報(bào)道，枯草芽孢桿菌和酵母培養(yǎng)物會(huì)對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物體組成產(chǎn)生顯著影響。王彥波[22]在羅非魚的研究中發(fā)現(xiàn)，添加芽孢桿菌后魚體肌肉中粗脂肪含量顯著降低，而粗蛋白、粗灰分和水分含量并無顯著變化。李高鋒[23]研究表明，添加酵母培養(yǎng)物后，團(tuán)頭魴全魚、肌肉和肝胰臟中的粗蛋白含量均顯著高于對(duì)照組。另外，BAGHERI等[24]在用含有芽孢桿菌的飼料喂養(yǎng)虹鱒幼魚后，發(fā)現(xiàn)幼魚體脂肪含量同菌劑的添加量呈反比，同時(shí)魚體粗蛋白和水分含量也受到一定的影響。這種差異可能是由添加的枯草芽孢桿菌的菌株和劑量不同、酵母培養(yǎng)物的來源不同、養(yǎng)殖種類和養(yǎng)殖規(guī)格及環(huán)境因子的不同等各種因素造成的。

3.3 枯草芽孢桿菌和酵母培養(yǎng)物對(duì)養(yǎng)殖水質(zhì)有一定的影響

一系列研究表明，養(yǎng)殖中使用的益生菌能夠分泌多種酶、抗生素和抑菌物質(zhì)，抑制水中病原菌的生長，競爭排斥水體中的有害菌，同時(shí)能夠分解水中一些低分子有機(jī)物，同化氨氮等，使水體中氨基氮、硫化物和亞硝基氮等濃度顯著降低，從而使水質(zhì)得到有效改善[25-26]。在本研究中，通過12 d的水質(zhì)監(jiān)測發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，Y1B1、Y1B2和Y2B1試驗(yàn)組水體中氨氮含量和化學(xué)需氧量從第3天開始上升幅度明顯降低，同時(shí)均在第9天出現(xiàn)最大降幅。另外，從第6天開始，不同試驗(yàn)組水體中亞硝酸鹽含量的增幅出現(xiàn)顯著差異，其中Y1B1、Y1B2和Y2B1組增幅顯著低于對(duì)照組。這一結(jié)果表明，飼料中添加枯草芽孢桿菌和酵母培養(yǎng)物能夠顯著改良養(yǎng)殖水體的水質(zhì)狀況，這同先前的眾多研究結(jié)果基本一致。齊欣等[27]在彭澤鯽的研究中表明，飼料中添加枯草芽孢桿菌后，養(yǎng)殖水體中亞硝酸鹽氮、化學(xué)需氧量（chemical oxygen demand,COD）和氨氮含量顯著降低；胡凡光等[28]選用從健康大菱鲆（Scophthalmus maximus）魚體腸道分離培養(yǎng)的同源枯草芽孢桿菌制成的飼料添加劑（活菌數(shù)2.0×109CFU/g），分別按不同添加量添加到飼料中用于飼喂大菱鲆，結(jié)果表明，添加一定比例的枯草芽孢桿菌能夠顯著降低養(yǎng)殖水體中的NH4+-N、NO2－-N、NO3－-N濃度；仇明等[15]等在斑點(diǎn)叉尾鮰（Ietalurus punetaus）試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)枯草芽孢桿菌濃度在1×1010～1×1011CFU/m3時(shí)，水體中氨氮和亞硝酸鹽含量顯著低于對(duì)照組，能夠維持良好的養(yǎng)殖水體生態(tài)環(huán)境；賀國龍等[29]研究發(fā)現(xiàn)，草魚在攝食含有枯草芽孢桿菌的飼料后，經(jīng)過10 d的水質(zhì)監(jiān)測發(fā)現(xiàn)，養(yǎng)殖水體中亞硝酸鹽和氨氮含量均有降低趨勢，而對(duì)COD無顯著影響；黃權(quán)等[30]在鯉魚的研究中表明，飼料中添加0.5%的酵母培養(yǎng)物可顯著降低養(yǎng)殖水體中的氨氮濃度和活性磷酸鹽含量，為鯉魚的生長提供了良好的水質(zhì)環(huán)境。枯草芽孢桿菌和酵母培養(yǎng)物能夠改善水質(zhì)的原因可能是：在酵母培養(yǎng)物的基礎(chǔ)上，枯草芽孢桿菌能夠較快地在腸道內(nèi)定殖和生長，從而能夠在幼魚腸道中消耗硝酸鹽和亞硝酸鹽，進(jìn)而從源頭上減少了亞硝酸鹽的排放；另外，隨糞便排到水體中的枯草芽孢桿菌能利用水體中的有機(jī)物，減少水體中有機(jī)物濃度，降低因有機(jī)物發(fā)酵分解耗氧和水體中還原性物質(zhì)因水體pH值變化而發(fā)生氧化反應(yīng)的耗氧，即降低了水體中的COD，同時(shí)，能夠通過自身的自養(yǎng)亞硝化和自養(yǎng)反硝化的脫氮作用，進(jìn)而降低水體中亞硝酸鹽氮和氨氮含量[31]。

同時(shí)，本研究結(jié)果表明，枯草芽孢桿菌和酵母培養(yǎng)物對(duì)養(yǎng)殖水體中亞硝酸鹽、氨氮和COD均表現(xiàn)出顯著的交互作用，這也暗示兩者在功能上可能具有相輔相成的作用，這也同上述幼魚的生長性能結(jié)果相一致。但是，研究也發(fā)現(xiàn)，當(dāng)兩者添加量均為1.0%時(shí)，養(yǎng)殖水質(zhì)并不能得到進(jìn)一步改善，反而出現(xiàn)惡化的趨勢，這可能是因?yàn)?，幼魚攝食兩者含量較高的飼料后，魚體腸道內(nèi)微生物平衡被打破，不能完全消化吸收攝食的營養(yǎng)物質(zhì)，導(dǎo)致過剩的營養(yǎng)物質(zhì)排到水體中，從而使得水體的富營養(yǎng)化程度升高，進(jìn)而導(dǎo)致水體進(jìn)一步惡化。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)飼料中酵母培養(yǎng)物和枯草芽孢桿菌添加水平為0.5%+0.5%（4.03×106CFU/g）和0.5%+1.0%（7.95×106CFU/g）時(shí)，珍珠龍膽石斑魚幼魚獲得最佳的生長性能，且全魚含有較高的粗蛋白，同時(shí)，養(yǎng)殖水質(zhì)也得到明顯改善。