不同劑型桂枝茯苓丸的溶出度比較*

張佳歡 李智慧 石森林 葛衛(wèi)紅 吳素香

浙江中醫(yī)藥大學(xué) 浙江 杭州 311402

桂枝茯苓丸由桂枝、茯苓、牡丹皮、赤芍、桃仁組成，桂枝為君藥，赤芍和牡丹皮等為臣藥，主要有效成分分別為肉桂酸、芍藥苷和丹皮酚等，其極性差別較大，溶解性能不同。丸劑是一種傳統(tǒng)劑型，多為復(fù)方，成分復(fù)雜，體外溶出研究對(duì)其質(zhì)量評(píng)價(jià)意義重大。本文測定了桂枝茯苓方大蜜丸、小蜜丸、水泛丸、濃縮丸和蠟丸的體外溶出度，采用相似因子f2對(duì)5種丸劑的溶出曲線進(jìn)行比較，為桂枝茯苓丸的質(zhì)量控制和評(píng)價(jià)提供了依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器：高效液相色譜儀（德國Kanuer，LUMTECH，檢測器 UV DETECTOR K-2501）；Hypersol C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm，大連依利特）；KQ5200DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；BP-211D分析電子天平（十萬分之一，德國Sartorius公司）；ZRS-6G型智能釋放試驗(yàn)儀（天津市天大天發(fā)科技有限公司）；DK-S24電熱恒溫水浴鍋（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；DFY-400搖擺式高速萬能粉碎機(jī)（溫嶺市林大機(jī)械有限公司）。

1.2 藥品及試劑：肉桂酸對(duì)照品（批號(hào)：110786-200503）購自中國藥品生物制品檢定所；芍藥苷對(duì)照品（批號(hào)：YY20100505），丹皮酚對(duì)照品（批號(hào)：20110422）均購自上海源葉生物科技有限公司；桂枝茯苓丸均為實(shí)驗(yàn)室自制（批號(hào)如下：大蜜丸：1203201，小蜜丸：1203202、水泛丸：1203203，濃縮丸：120225、120318、120426，蠟丸：1203205）；甲醇、乙腈為色譜純；純水；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件：色譜柱為Hypersol C18(250mm×4.6mm，5μm)；流動(dòng)相A為乙腈，B為0.1%磷酸水溶液；梯度洗脫（0～17min，14%A～45%A；17～24min，45%A～44%A；24～26min，44%A～14%A)，流速為 1.0ml/min，柱溫30℃；檢測波長在0～17min時(shí)為230nm，17～26min時(shí)為274nm；進(jìn)樣量20μl。上述色譜條件下，桂枝茯苓丸中肉桂酸、丹皮酚以及芍藥苷色譜成分峰與其他成分色譜峰分離度良好，見圖1。

圖1 桂枝茯苓丸HPLC色譜圖

2.2 對(duì)照品溶液制備：精密稱取肉桂酸、芍藥苷及丹皮酚對(duì)照品適量，置于棕色量瓶中，用甲醇溶解并定容，分別制成肉桂酸0.5mg/ml、芍藥苷2.5mg/ml及丹皮酚2.5mg/ml的混合對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液制備：按照2015年版《中華人民共和國藥典》四部通則0931溶出度與釋放度測定法第二法（槳法），溶出條件為pH1.2的溶出介質(zhì)900ml，溫度37±0.5℃，轉(zhuǎn)速100r/min。取桂枝茯苓濃縮丸6份，分別投入6個(gè)溶出杯內(nèi)，立即啟動(dòng)并開始計(jì)時(shí)，在規(guī)定時(shí)間點(diǎn)吸取溶液適量，經(jīng)0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.4 陰性對(duì)照溶液制備：根據(jù)桂枝茯苓丸處方比例，按“2.3”方法制成缺桂枝、赤芍、牡丹皮的陰性對(duì)照溶液。

2.5 專屬性實(shí)驗(yàn)：取對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照品溶液和供試品溶液各20μl，進(jìn)樣，按照“2.1項(xiàng)”下色譜條件進(jìn)行測定，結(jié)果表明在肉桂酸、芍藥苷以及丹皮酚的保留時(shí)間處，陰性對(duì)照無干擾，說明專屬性良好。

2.6 線性關(guān)系考察：精密吸取混合對(duì)照品溶液適量，分別置于10ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，配制成一系列濃度的混合對(duì)照品溶液，肉桂酸0.0005、0.0025、0.005、0.025、0.05、0.06mg/ml；芍 藥 苷0.0075、0.0375、0.075、0.375、0.75、0.9mg/ml；丹皮酚0.0075、0.0375、0.075、0.375、0.75、0.9mg/ml。按“2.1”下色譜條件分別進(jìn)樣20μl，以對(duì)照品的濃度X（mg/ml）為橫坐標(biāo)，對(duì)照品色譜峰面積Y為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。結(jié)果得肉桂酸標(biāo)準(zhǔn)曲線方程Y=215.06X+39.87，r=0.9994，芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)曲線方程Y=94.25X+40.63，r=0.9996，丹皮酚標(biāo)準(zhǔn)曲線方程Y=27.20X+19.64，r=0.9997。上述色譜條件下，肉桂酸 0.0005～0.06mg/ml，芍藥苷0.0075～0.9mg/ml，丹皮酚0.0075～0.9mg/ml范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性相關(guān)性。

2.7 體外溶出試驗(yàn)：取桂枝茯苓丸，按照2015年版《中華人民共和國藥典》四部通則0931溶出度與釋放度測定法第二法（槳法），pH1.2的溶出介質(zhì)900ml，轉(zhuǎn)速為100r/min，溫度為37±0.5℃，依法測定。分別于0.5、1、2、4、6、8、10、12h取樣5.0ml（同時(shí)補(bǔ)充等溫等量溶出介質(zhì))，離心，經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液20μl進(jìn)樣測定，計(jì)算累積溶出度。

2.8 不同丸劑的體外溶出比較：分別測定不同丸劑在pH1.2溶出介質(zhì)中的溶出度，以時(shí)間為橫坐標(biāo)，累積溶出度為縱坐標(biāo)，繪制溶出曲線。結(jié)果如圖2、圖3。2h內(nèi)溶出速率較快的是濃縮丸、水泛丸和小蜜丸，濃縮丸＞水泛丸＞小蜜丸，2～4h累積溶出度增值較大的是大蜜丸，而蠟丸釋放速率及最終累積溶出度都相對(duì)較小。

2.9 溶出曲線相似因子擬合及溶出差異比較：為更精確地對(duì)不同丸劑的溶出度進(jìn)行比較，本文采用相似因子法對(duì)各溶出曲線進(jìn)行分析。相似因子法基本公式：

f2為相似因子，如果50≤f2≤100，表示兩制劑的溶出度相似，越接近100，相似程度越高，無顯著性差異。其中R t，Tt分別為各時(shí)間點(diǎn)參比制劑和供試制劑的溶出度，n為測試點(diǎn)數(shù)。根據(jù)公式，計(jì)算濃縮丸、大蜜丸、小蜜丸、水泛丸及蠟丸的f2。結(jié)果見表1，由表可得，以濃縮丸為參比制劑，水泛丸中肉桂酸、芍藥苷和丹皮酚的相似因子f2均＞50，表明水泛丸中肉桂酸、芍藥苷和丹皮酚的溶出度與濃縮丸中肉桂酸、芍藥苷和丹皮酚基本相似。以大蜜丸為參比制劑，小蜜丸中肉桂酸、芍藥苷和丹皮酚的相似因子f2均＞50，表明小蜜丸中肉桂酸、芍藥苷和丹皮酚的溶出度與大蜜丸中肉桂酸、芍藥苷和丹皮酚基本相似。因此，可初步認(rèn)定水泛丸和濃縮丸的溶出度基本相似；大蜜丸和小蜜丸中各指標(biāo)成分溶出度基本相似；而大蜜丸、小蜜丸和蠟丸中各指標(biāo)成分與濃縮丸各指標(biāo)成分的溶出度有較大差異。

表1 桂枝茯苓丸相似因子f2擬合結(jié)果

3 討論

桂枝茯苓丸溶出曲線中10h后測定丹皮酚的累積釋放度有所降低，分析原因可能是因?yàn)榈てし拥牟环€(wěn)定性所致[1]。此外，各丸劑均有緩釋特征，小蜜丸、水泛丸及濃縮丸前期的體外釋放速度較快，2h后開始緩慢釋放；而大蜜丸、蠟丸在2～4h時(shí)間段的釋放速率達(dá)到最大。結(jié)果顯示大蜜丸能夠持續(xù)較長時(shí)間發(fā)揮藥效，但蠟丸的累積釋放度相對(duì)最低，分析其原因，可能是因?yàn)檩o料石蠟為水不溶性物質(zhì)，將藥材包裹后有效成分的溶出比較困難。一般來說，體外溶出度是評(píng)價(jià)不同品種藥品質(zhì)量的重要依據(jù)，食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）推薦使用相似因子法評(píng)價(jià)試驗(yàn)藥品與對(duì)照藥品間的溶出度差異，且認(rèn)定試驗(yàn)藥品的相似因子f2＞50為等效[2-3]。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)5種不同的劑型丸劑的指標(biāo)成分溶出行為并不一致，存在顯著性差異，這也表明了桂枝茯苓丸劑型的改變會(huì)影響有效成分的溶出行為，繼而影響藥物療效。