南天竹根浸液的急性毒理實(shí)驗(yàn)*

邱志潔 王 滔 李茹茹 顏珍瑜

中藥南天竹根，又名鉆石黃、土黃連、山黃連等，據(jù)《福建民間草藥》記載，其性苦寒，具有清熱除濕、祛風(fēng)止癢、止咳化痰等功效，常用于治療急性黃疸、各類風(fēng)濕痛、瘡瘍毒腫等疾患。前期研究小組用被動皮膚過敏方法[1，2]來建立大鼠 I型過敏反應(yīng)動物模型， 使用南天竹根浸液進(jìn)行干預(yù)處理，結(jié)果顯示小鼠背部皮膚過敏反應(yīng)明顯降低，血清中的 IgE含量也明顯減少， 從而初步肯定了南天竹根浸液對過敏反應(yīng)的治療作用及抗過敏機(jī)制[3]。 為進(jìn)一步研究南天竹根浸液臨床應(yīng)用的安全性，本研究將通過小鼠灌胃給藥，觀察小鼠中毒癥狀，計算小鼠的半數(shù)致死量或最大耐受量，為指導(dǎo)臨床用藥提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物40只ICR小鼠，半雄性半雌性，排除特定病原體環(huán)境(SPF級)，8～12周齡，體質(zhì)量18～22 g。由福建中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供實(shí)驗(yàn)動物并飼養(yǎng)于SPF級環(huán)境。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物南天竹根浸液的制備：南天竹根200 g，加水浸泡30 min，煎煮2次，第1次2 h，第2次1.5 h，合并煎液，濾過，離心，濃縮到500 ml濾液備用。0.9%的氯化鈉注射液：由福建省第三人民醫(yī)院提供。

1.3 儀器電子天平(精確到0.01 mg)、醫(yī)用注射器、組織剪、有齒鑷等均由福建中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供。

1.4 動物分組將40只ICR小鼠隨機(jī)分成南天竹根浸液組和對照組，每組小鼠20只(半雄性和半雌性)，用3%苦味酸標(biāo)記小鼠，并在耳朵上使用籠牌進(jìn)行標(biāo)記。

1.5 灌胃方法將40只小鼠(半雌性半雄性)禁食12 h，仍然正常飲水，使用南天竹根浸液組以3次/d的頻率給予小鼠灌胃，每次給藥時間間隔8 h；對照組給予相同劑量的生理鹽水對照灌胃。

1.6 半數(shù)致死量(LD50)的測定南天竹根浸液組小鼠按最大灌胃體積0.05 ml·g-1給藥，3次/d，對照組同上。灌胃后每天早、晚各觀察1次，同時連續(xù)觀察2周。使用 Bliss’s 法觀察2組小鼠死亡數(shù)量并計算相應(yīng)的 LD50。動物急性毒理實(shí)驗(yàn)觀察項目見表1。

表1 動物急性毒理實(shí)驗(yàn)觀察表

1.7 最大給藥量的測定每次給藥后，觀察以下檢測指標(biāo):動物自由攝取食物量和飲水量，根據(jù)表1觀察動物的一般活動和存活情況，并詳細(xì)記錄小鼠自發(fā)活動、肌肉運(yùn)動、對外反應(yīng)、精神狀態(tài)、呼吸飲食、大小二便及毛色、分泌物情況等；若在給藥時間段內(nèi)出現(xiàn)小鼠死亡，則要詳細(xì)記錄該時間段內(nèi)小鼠死亡發(fā)生時間、死亡數(shù)量和主要毒性反應(yīng)表現(xiàn)等。通過2周的持續(xù)觀察，分別記錄1、4、7、14 d 體質(zhì)量變化及小鼠死亡情況。在給藥第14天后，處死存活的小鼠并進(jìn)行逐只處死解剖，肉眼觀察心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟和胃、腸以及胸腔、腹腔等重要臟器、器官是否發(fā)生顏色變化、形態(tài)異常改變以及其他病理改變等。

2 結(jié)果

2.1 半數(shù)致死量(LD50)的測定結(jié)果給藥后，小鼠狀態(tài)正常，觀察期間，所有老鼠全部存活，未表現(xiàn)出明顯的異常，因此，未測得LD50。

2.2 最大給藥量的測定結(jié)果小鼠最大給藥劑量=0.4(南天竹根浸液最大濃度)×0.5(最大給藥體積)×20.4(小鼠平均質(zhì)量)×3(灌胃次數(shù))×1000(單位統(tǒng)一換算)=122.4 g·kg-1。灌胃給藥后，小鼠無明顯中毒反應(yīng)，呼吸、心率、自主和行為活動均無明顯異常改變，未觀察到眼球出現(xiàn)分泌物、眼球突出等現(xiàn)象，大小二便情況也均無異常。觀察期間，實(shí)驗(yàn)小鼠攝食飲水正常，體質(zhì)量增加，一般情況良好。見表2。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后對處死動物進(jìn)行解剖、形態(tài)學(xué)觀察未見明顯的臟器官改變。

表2 南天竹根浸液急性毒理實(shí)驗(yàn)小鼠體質(zhì)量變化 (只，

注：與對照組比較，P>0.05

3 討論

隨著城市化加劇和工業(yè)化水平的飛速提升，過敏反應(yīng)性疾病的患病幾率在全世界范圍內(nèi)呈現(xiàn)出逐年增加的勢頭，過敏性疾病已經(jīng)成為現(xiàn)階段各個國家政府部門高度關(guān)注的全球性健康問題。世界變態(tài)反應(yīng)組織(World Allergy Organization)在世界首個過敏疾病日發(fā)布了對全世界30多個國家進(jìn)行的過敏性疾病流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果，調(diào)查結(jié)果表示在這30多個國家的12億總?cè)藬?shù)中，超過22%的人口患有由傳統(tǒng)免疫途徑IgE介導(dǎo)的過敏性疾病[4]。近年來我國針對0～24個月城市小兒過敏性疾病也展開了流行病學(xué)的調(diào)查，其結(jié)果顯示小兒過敏性疾病的發(fā)病率已經(jīng)超40.9%[5]，過高的發(fā)病率在給人們生命健康財產(chǎn)造成威脅的同時，也在經(jīng)濟(jì)上帶來了沉重的負(fù)擔(dān)。有研究機(jī)構(gòu)調(diào)查顯示過敏性疾病所造成的社會負(fù)擔(dān)甚至大于艾滋病與肺結(jié)核的總和。因此，進(jìn)一步探索過敏性疾病的發(fā)病機(jī)制以及積極尋求有效的診療手段和治療方法已成為目前廣泛關(guān)注和亟需解決的難題。

南天竹根是福建地區(qū)特有的一味中藥，臨床上常用于小兒濕疹、皮炎等疾病的治療，且療效顯著。前期實(shí)驗(yàn)已初步證實(shí)了南天竹根對過敏性小鼠皮炎有著良好的治療作用，本課題進(jìn)一步研究顯示南天竹根浸液作用于小鼠的最大給藥量為122.4 g·kg-1，相當(dāng)于成人用量的195.8倍，從而可以看出南天竹根口服毒性極小，其用量安全可靠。