Livin、Bcl-2在結(jié)直腸癌的表達(dá)及臨床意義

高曉虹 徐曉焱 陳遠(yuǎn)壽 曹永

【摘 ?要】目的：研究Livin和Bcl-2在大腸癌中的表達(dá)及其與侵襲轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系，探討Livin和Bcl-2之間的相關(guān)性。方法：采用免疫組織化學(xué)（SP）法對(duì)大腸癌34例及腺瘤10例和相應(yīng)癌旁組織8例做Livin和Bcl-2的抗原標(biāo)記。結(jié)果：Livin和Bcl-2與年齡、性別、Dukes分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無明顯相關(guān)性（P﹥0.05）。Livin與腫瘤分化程度和浸潤深度呈明顯相關(guān)（P<0.05）;Bcl-2與腫瘤浸潤深度明顯相關(guān)（P<0.05），而與腫瘤分化程度無顯著性差異（P>0.05）。Livin和Bcl-2在大腸癌表達(dá)呈正相關(guān)。結(jié)論：Livin和Bcl-2的表達(dá)與大腸癌發(fā)生和侵襲密切相關(guān)，可作為判斷大腸癌預(yù)后的指標(biāo)。

【關(guān)鍵詞】大腸癌;Livin;Bcl-2

【中圖分類號(hào)】R735 ? ? ?【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A ? ? ?【文章編號(hào)】1004-7484（2019）05-0056-01

惡性腫瘤是當(dāng)前危害人類生命健康最常見的疾病之一。研究表明，90%以上惡性腫瘤患者最終死于腫瘤復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移。凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis protein， IAP）家族是一類調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡的蛋白質(zhì)，IAPs過低或過高表達(dá)影響腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。Livin是IAPs中新近發(fā)現(xiàn)的一員，已發(fā)現(xiàn)在多種腫瘤及細(xì)胞系中高表達(dá)，而在成人正常組織中不表達(dá)或低表達(dá)。Wang TS等發(fā)現(xiàn)ShRNA可抑制SGC-7901細(xì)胞中Livin的表達(dá)并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，livin可作為誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡的重要靶點(diǎn)。大腸癌中Livin表達(dá)或抑制是否與胃癌中的相同，目前仍未明確，因此本研究擬探討Livin、Bcl-2在大腸癌的表達(dá)及與臨床病理特征之間的關(guān)系，分析其在大腸癌轉(zhuǎn)移中的作用和臨床意義。

1 材料與方法

1.1 材料 收集牡丹江市中醫(yī)醫(yī)院2010年～2014年資料完整病理存檔蠟塊52例，大腸癌34例、大腸腺瘤10例和癌旁組織8例。按Dukes分期分類：A期7例，B期15例，C期9例，D期3例;其高分化腺癌13例，中分化腺癌9例，低分化腺癌12例;腺癌30例，粘液腺癌3例，印戒細(xì)胞癌1例;腺瘤組：腺瘤性息肉10例，男性7例，女性3例，8例癌旁組織作對(duì)照。

1.2 試劑和方法 ?10%福爾馬林溶液組織固定，采用S-P（strePtavidin-Perosidase）法，BCL-2抗體（BA0412），Livin抗體（BA1743）。Livin、Bcl-2抗體以1：200比例稀釋，PBS液代替第一抗體做空白對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定 Livin和Bcl-2在胞漿呈棕黃色或棕褐色顆粒，400倍下觀察5個(gè)視野，計(jì)算Livin和Bcl-2陽性的癌細(xì)胞數(shù)。結(jié)腸癌癌細(xì)胞陽性判定標(biāo)準(zhǔn)參照，分級(jí)方法如下：染色強(qiáng)度依次為0、1、2、3;陽性細(xì)胞所占百分比：無著色為0，<10%為1，10%-50%為2，>50%為3，兩種積分相加后進(jìn)行半定量判斷，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析時(shí)（+～+++）皆為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)分析，SPearman相關(guān)分析，Kruskal-Wallis檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Livin、Bcl-2的表達(dá)

Livin、Bcl-2均呈棕黃色顆粒表達(dá)于癌細(xì)胞漿，34例中有17（50.0%）呈陽性表達(dá)，大腸腺瘤和癌旁中未見表達(dá)。癌組織中Livin與癌旁、大腸腺瘤存在明顯差異（P﹤0.05）。Bcl-2在大腸癌組織、大腸腺瘤和癌旁中表達(dá)率分別為58.82%（20/34）、80.00%（8/10）和12.50%（1/8）。癌組織中Bcl-2與癌旁組織差異顯著（0.025﹤P#﹤0.05） ，與大腸腺瘤無顯著性差異（P﹥0.05）。

2.3 Livin、Bcl-2與大腸癌臨床病理特征的關(guān)系

Livin與分化程度、浸潤深度均顯著性差異（P﹤0.05）;Bcl-2與癌組織浸潤深度有顯著性差異（P﹤0.05），與腫瘤分化程度無相關(guān)性（P﹥0.05）;Livin、Bcl-2與有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無明顯關(guān)系（P﹥0.05）;Livin、Bcl-2與年齡、性別及Dukes分期均無明顯差異（P﹥0.05）。

2.4 大腸癌中Livin與bcl-2表達(dá)相關(guān)性

Spearman分析示，大腸癌中Livin與bcl-2表達(dá)呈顯著正相關(guān)（P=0.002<0.01，r=0.519），在大腸癌發(fā)生、發(fā)展中呈相互促進(jìn)作用。

3 討論

Livin作為一個(gè)新發(fā)現(xiàn)的IAP家族成員，在多數(shù)成人組織中不表達(dá)，但在大多數(shù)黑色素細(xì)胞系及很多人類惡性腫瘤細(xì)胞株中高表達(dá)，提示該基因可能在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中起著重要作用。Livin主要表達(dá)于細(xì)胞漿，但在胞質(zhì)內(nèi)呈絲狀表達(dá)，同時(shí)也表達(dá)于胞核，并認(rèn)為Livin C末端的RING結(jié)構(gòu)對(duì)介導(dǎo)其在亞細(xì)胞水平上的分布具有重要作用。最近研究認(rèn)為，Livin的亞細(xì)胞定位決定了抗凋亡和促凋亡之間的精細(xì)平衡調(diào)節(jié)。

我們的研究結(jié)果顯示Livin主要表達(dá)于細(xì)胞漿，癌組織中表達(dá)率明顯高于腺瘤和癌旁組織。Livin表達(dá)與年齡、性別、Dukes分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無明顯相關(guān)性，而與腫瘤分化程度和浸潤深度明顯相關(guān)。

Bcl-2作為公認(rèn)的凋亡抑制基因，許多人類腫瘤中均有Bcl-2的高表達(dá)。本研究結(jié)果示，Bcl-2在大腸癌和腺瘤組織中高表達(dá)，在癌旁組織低表達(dá)。Bcl-2表達(dá)與患者的年齡、性別、分化程度、Dukes分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無明顯相關(guān)關(guān)系，而與腫瘤浸潤深度明顯相關(guān)。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，提示大腸癌組織中Livin與Bcl-2蛋白表達(dá)呈正相關(guān)。在大腸癌的發(fā)病機(jī)制上Livin基因與Bcl-2基因協(xié)同發(fā)揮抑制細(xì)胞凋亡的作用。

總之，Livin、Bcl-2均為凋亡相關(guān)基因，Livin及Bcl-2的作用是抑制細(xì)胞凋亡的發(fā)生，這些基因的異常表達(dá)或突變影響到凋亡的發(fā)生，從而可使具有惡性變的細(xì)胞繼續(xù)存活，為細(xì)胞的DNA進(jìn)一步損傷或突變提供條件。本實(shí)驗(yàn)以大腸癌病理組織為研究對(duì)象探討了Livin及Bcl-2蛋白在大腸癌中的作用及相互關(guān)系，為臨床以Livin及Bcl-2為治療靶點(diǎn)對(duì)大腸癌進(jìn)行基因治療提供理論依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[1]黃青遠(yuǎn)， 趙志龍， 崔肅， et al. Livin在食管癌中的表達(dá)及與Bcl-2相關(guān)性研究[J]. 現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)， 2007， 15（3）：326- 328.

[2]齊鳳杰， 趙樹鵬， 董新茜. Livin蛋白在乳腺癌中的表達(dá)及與Bcl-2的關(guān)系[J]. 中國組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志， 2008 （6）：613-618.