Lumipulse G1200基于CLEIA法檢測梅毒抗體應(yīng)用評價

曹永獻 潘華政 劉靜 張娜娜 王麟 朱現(xiàn)菊

[摘要]?目的?探討應(yīng)用日本富士Lumipulse G1200全自動化學(xué)發(fā)光酶免疫分析儀、化學(xué)發(fā)光酶免疫檢測（CLEIA）法檢測梅毒螺旋體抗體（梅毒抗體）與梅毒螺旋體明膠凝集試驗（TPPA）檢測結(jié)果符合率，并確定CLEIA法檢測梅毒抗體最佳臨界值。

方法?用CLEIA法對20 690例血清標本進行梅毒抗體篩查，以TPPA作為確證實驗。對其中陽性（S/CO值≥1.0）標本和隨機選取40例陰性（S/CO值<1.0）標本進行復(fù)檢，制作ROC曲線并獲最佳臨界值。

結(jié)果?CLEIA陽性標本172例，TPPA檢測陽性為166例（96.5%）;CLEIA陰性40例標本TPPA復(fù)檢亦均為陰性;CLEIA與TPPA檢測結(jié)果符合率為97.2%（206/212）。根據(jù)ROC曲線，獲得CLEIA法檢測梅毒抗體的最佳臨界值為2.15;此時，CLEIA與TPPA檢測結(jié)果的符合率為98.1%（208/212）。

結(jié)論?Lumipulse G1200基于CLEIA法檢測梅毒抗體的最佳臨界值為2.15，當S/CO較低（<10.0）時，建議行TPPA確認。

[關(guān)鍵詞]?梅毒血清診斷;化學(xué)發(fā)光酶免疫分析;梅毒螺旋體明膠凝集試驗

[中圖分類號]?R759.1

[文獻標志碼]?A

[文章編號]??2096-5532（2019）06-0667-04

doi：10.11712/jms201906009

[開放科學(xué)（資源服務(wù)）標識碼（OSID）]

APPLICATION VALUE OF LUMIPULSE G1200 BASED ON CHEMILUMINESCENCE ENZYME IMMUNOASSAY IN THE DETECTION OF SYPHILIS ANTIBODY

CAO Yongxian， PAN Huazheng， LIU Jing， ZHANG Na′na， WANG Lin， ZHU Xianju

（Department of Clinical Laboratory， the Affilicated Hospital of Qingdao University， Qingdao 266003， China）

[ABSTRACT] Objective To investigate the coincidence rate of chemiluminescence enzyme immunoassay （CLEIA） results on Lumipulse G1200 （Fujirebio Inc.， Japan） and Treponema pallidum particle agglutination test （TPPA） results in the detection of Treponema pallidum （TP） antibody， and to establish the optimal cut-off value of CLEIA in the detection of TP antibody.

Me-

thods A total of 20 690 serum samples were screened for TP antibody by CLEIA on Lumipulse G1200， with TPPA as a confirmatory test. Retest was performed for positive samples with a signal-to-cut-off （S/CO） ratio of ≥1.0 and 40 negative samples with a S/CO ratio of <1.0， and the receiver operating characteristic （ROC） curve was plotted to obtain the optimal cut-off value.

Results A total of 172 positive samples were detected by CLEIA， among which 166 （96.5%） were detected positive by TPPA， and all the 40 negative samples detected by CLEIA were detected negative by TPPA; the coincidence rate of CLEIA and TPPA results were 97.2% （206/212）. The ROC curve showed an optimal cut-off value of 2.15 for CLEIA in TP antibody detection， and the coincidence rate was improved to 98.1% （208/212）.

Conclusion CLEIA on Lumipulse G1200 has an optimal cut-off value of 2.15 in TP antibody detection， and TPPA should be performed for confirmation when S/CO ratio is below 10.0.

[KEY WORDS] Syphilis serodiagnosis; chemiluminescent enzyme immunoassay; treponema pallidum particle agglutination test

梅毒是由蒼白密螺旋體蒼白亞種感染引起的性傳播疾病，其發(fā)病率和致死率呈逐年上升趨勢[1-2]。梅毒通過性接觸、血液、母嬰等3條途徑傳播，可引起多系統(tǒng)疾病且臨床癥狀和體征表現(xiàn)多樣化，嚴重危害人體健康。目前，由于梅毒螺旋體的體外培養(yǎng)較困難[3]，故其血清學(xué)檢測在梅毒的篩查、診斷及治療效果評價中具有非常重要的意義。人體感染梅毒螺旋體后可產(chǎn)生兩類抗體[4]：一類是特異性的抗梅毒螺旋體抗體（梅毒抗體，IgG、IgM），IgG抗體雖可終身存在，但濃度一般較低，不能預(yù)防再感染，IgM抗體持續(xù)時間短[5];另一類是由螺旋體破壞組織細胞釋放的類脂樣物質(zhì)及螺旋體自身的類脂和脂蛋白刺激機體產(chǎn)生的非特異性抗體（IgA、IgG、IgM）。梅毒的血清學(xué)診斷方法也因此分為非特異性抗體和特異性抗體檢測兩大類，常用方法分別為快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗（RPR）、甲苯胺紅不加熱血清學(xué)試驗（TRUST）、ELISA、梅毒螺旋體明膠凝集試

驗（TPPA）及Western-blot方法等[6]，其中TPPA和Western-blot為確證實驗[7-8]。但這些方法均不能實現(xiàn)自動化從而快速地隨機檢測。隨著體外診斷試劑和儀器設(shè)備的開發(fā)，化學(xué)發(fā)光法作為檢測梅毒特異性抗體的新方法逐漸在實驗室使用，其可以實現(xiàn)全自動高通量的檢測[9]。目前國內(nèi)使用的基于化學(xué)發(fā)光法進行梅毒抗體檢測的儀器主要來自于國內(nèi)科美公司、安圖公司以及國外雅培公司、羅氏公司等，而日本富士Lumipulse G1200全自動化學(xué)發(fā)光酶免疫（CLEIA）分析儀使用尚少，對其應(yīng)用評價亦相對較少。2018年7—12月，我們采用日本富士Lumipulse G1200全自動CLEIA分析儀，對20 690份血清標本進行了梅毒抗體檢測，現(xiàn)報告如下。

1?資料和方法

1.1?標本來源

2018年7—12月，青島大學(xué)附屬醫(yī)院共收到門診、住院病人及產(chǎn)前檢查的孕婦血清標本20 690例，其中男10 634例，女10 056例，年齡0～97歲，平均（49±21）歲。

1.2?試劑及儀器

日本富士Lumipulse G1200全自動CLEIA分析儀及其配套試劑、TPPA試劑盒均由日本富士瑞必歐株式會社提供。

1.3?檢測方法

無菌采集受檢者空腹靜脈血3～5 mL，分離血清于當日或次日先行CLEIA法檢測，S/CO值≥1.0者判定為陽性，<1.0為陰性;對S/CO值≥1.0標本應(yīng)用同方法復(fù)檢，兩次檢驗結(jié)果一致的標本再進行TPPA復(fù)檢。并隨機選取40例CLEIA法檢測陰性（S/CO值<1.0）標本進行TPPA復(fù)檢。所有操作均嚴格按照儀器及試劑盒說明進行。

1.4?統(tǒng)計學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 17.0軟件制作ROC曲線，以靈敏度與特異度均較高時（Youden指數(shù)最大）的S/CO值作為CLEIA檢測的最佳臨界值。

2?結(jié)?果

2.1?CLEIA法及TPPA檢測結(jié)果比較

CLEIA法檢測的20 690份血清標本中，梅毒抗體陽性172例。采用TPPA法對172例陽性標本及40例陰性標本進行復(fù)檢，二者的符合率為97.2%（206/212）。其中，40例陰性標本經(jīng)TPPA復(fù)檢亦均為陰性;CLEIA法檢測172例陽性標本中，TPPA法檢測陽性率為96.5%（166/172）。

2.2?不同S/CO值陽性標本TPPA檢測

CLEIA法檢測不同S/CO值分組分析見表2（以S/CO=1.0為臨界值）。當CLEIA檢測結(jié)果S/CO<1.0、1.0≤S/CO<10.0、S/CO≥10.0時，與TPPA法檢測結(jié)果的符合率分別為100.0%（40/40）、91.7%（66/72）及100.0%（100/100）。見表1。

2.3?ROC曲線分析

以TPPA檢測為確證實驗，對CLEIA法檢測得到的S/CO值作ROC曲線，獲得曲線下面積為0.985，最佳臨界值S/CO=2.15（圖1）。以S/CO=2.15為判斷臨界值時，CLEIA法與TPPA法檢測結(jié)果的符合率為98.1%（208/212），此時CLEIA方法檢測的靈敏度和特異度均較高，分別為92.2%、91.3%。見表2。

各國嚴重的公共衛(wèi)生問題。在我國，隨著術(shù)前、產(chǎn)前、各種有創(chuàng)檢查前對梅毒抗體的廣泛篩查，梅毒抗體檢測的標本量也逐年增加[10]。目前在眾多的方法中，TPPA法是公認的梅毒抗體檢測的確證方法[11-12]。但TPPA法存在標本需要系列稀釋、操作煩瑣、試劑昂貴、檢測時間長難以自動化，以及觀察結(jié)果易受主觀因素影響等缺點，不適用于常規(guī)篩查[13]。衛(wèi)生部臨床檢驗中心網(wǎng)站室間質(zhì)控數(shù)據(jù)分析顯示，參加衛(wèi)生部臨床檢驗中心2018年第二次梅毒抗體實驗室質(zhì)量評價的1 209家實驗室中，篩查實驗采用ELISA方法646家，化學(xué)發(fā)光免疫試驗（CLIA）方法379家，電化學(xué)發(fā)光免疫試驗（ECLA）方法66家，CLEIA方法67家，明膠顆粒凝集試驗（PA）方法7家，時間分辨熒光免疫試驗（TR-FIA）方法35家。由此可以看出，目前國內(nèi)臨床實驗室大多采用ELISA方法作為梅毒抗體的篩查試驗，但該方法影響因素較多，尤其是來自標本及病人自身的因素，故存在一定的假陽性[9，14]。CLEIA因其靈敏度高、特異性好，已經(jīng)成為國外梅毒抗體檢測的主要方法，在國內(nèi)應(yīng)用也逐年增加[15-16]。

日本富士Lumipulse G1200全自動化學(xué)發(fā)光酶免疫分析儀基于CLEIA法對梅毒抗體進行檢測。CLEIA法采用重組的梅毒特異性抗原（TpN15、TpN17和TpN47）進行包被[17-19]。有文獻報道所有Ⅰ期梅毒病人的血清中均表達TP47抗體[20]，提示CLEIA法可用于梅毒早期診斷。目前對于該方法和儀器的應(yīng)用評價尚少。本文研究結(jié)果顯示，以S/CO=1.0為判斷臨界值時，CLEIA法與TPPA法檢測梅毒抗體結(jié)果符合率為97.2%（206/212），說明CLEIA法檢測具有較高的靈感度和特異度，且自動化程度高，避免了手工誤差，適用于梅毒抗體的篩查實驗。同時，本研究顯示，當檢測結(jié)果的S/CO值較低（1.0≤S/CO<10.0）時，CLEIA法檢測梅毒抗體的假陽性率相對較高（8.33%，6/72），此時應(yīng)結(jié)合病人是否有腫瘤、感染性肝炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、麻風(fēng)病史等，尤其當病人為孕婦、老年人時[21-24]，均需做進一步確認實驗。

我們認為，這種假陽性可能與以上人群的基礎(chǔ)疾病、自身免疫狀態(tài)、既往感染某些具有交叉抗原的病原體有關(guān)[25-26]。因此，S/CO低值的陽性結(jié)果（1.0≤S/CO<10.0）如何解讀成為臨床醫(yī)生判讀梅毒檢測結(jié)果的難點[27]，確定本實驗室CLEIA法檢測梅毒抗體的最佳臨界值，也成為本研究的主要目的之一。

本文根據(jù)ROC曲線計算，分別以S/CO=1.0和S/CO=2.15為臨界值時，CLEIA法與TPPA檢測結(jié)果符合率分別為97.2%、98.1%，即在以2.15為臨界值時，兩種方法的檢測結(jié)果呈現(xiàn)高度一致，這為S/CO低值結(jié)果提供了比較明確的臨界分析，使CLEIA法檢測梅毒抗體的實驗結(jié)果對臨床醫(yī)生有更明確的指導(dǎo)意義。CLEIA法檢測梅毒抗體的最佳臨界值為2.15。

目前，實驗室檢測梅毒抗體常用的發(fā)光設(shè)備國內(nèi)主要由科美公司、安圖公司生產(chǎn)，進口主要為雅培公司、羅氏公司、富士公司等生產(chǎn)的全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀?？紤]到各廠家試劑包被抗原的片段以及包被抗原和抗體的親和力有所不同，建議各實驗室針對使用的儀器設(shè)備進行評估，建立各自實驗室的臨界值，更好地為臨床梅毒螺旋體感染的診斷提供科學(xué)的實驗室數(shù)據(jù)。

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