蘆筍莖枯病菌對苯醚甲環(huán)唑的敏感性及3種殺菌劑的田間防效

石妞妞 杜宜新 阮宏椿 甘林 代玉立 楊秀娟 陳福如

摘 要：【目的】明確蘆筍莖枯病菌對苯醚甲環(huán)唑的敏感性及3種殺菌劑對蘆筍莖枯病的田間防效。【方法】采用菌絲生長速率法測定采集分離自福建、河南、湖南、山西、山東的132株蘆筍莖枯病菌對苯醚甲環(huán)唑的敏感性，并分析10%苯醚甲環(huán)唑WG、35%氟吡菌酰胺·戊唑醇SC和325 g·L-1嘧菌酯·苯醚甲環(huán)唑SC 3種殺菌劑對蘆筍莖枯病的田間防效。【結果】供試的132株蘆筍莖枯病菌對苯醚甲環(huán)唑的有效抑制中濃度EC50在0.010 8～2.654 8 μg·mL-1，其平均值為（0.6934±0.0441） μg·mL-1。供試菌株對苯醚甲環(huán)唑的敏感性頻率分布不符合正態(tài)性分布。福建省的供試菌株與山東省、湖南省的供試菌株對苯醚甲環(huán)唑的敏感性差異達顯著水平（P<0.05），同一省份內(nèi)的供試菌株個體間對苯醚甲環(huán)唑的敏感性差異也較大。田間藥效試驗結果表明，10%苯醚甲環(huán)唑WG 135.00 g·hm-2兩年試驗對蘆筍莖枯病的防效分別為75.60%和75.91%，而35%氟吡菌酰胺·戊唑醇SC 118.13+118.13 g·hm-2的兩年防效分別為82.08%和82.32%，325 g·L-1嘧菌酯·苯醚甲環(huán)唑SC 84.38+135.00 g·hm-2的兩年防效分別為82.74%和83.23%，兩者的防治效果均顯著優(yōu)于10%苯醚甲環(huán)唑WG 135.00 g·hm-2的防治效果（P<0.05）?！窘Y論】田間存在蘆筍莖枯病菌對苯醚甲環(huán)唑的敏感性下降的亞群體;氟吡菌酰胺·戊唑醇SC和嘧菌酯·苯醚甲環(huán)唑SC供試劑量對蘆筍莖枯病的防治效果較好，對蘆筍安全，可作為防治蘆筍莖枯病的殺菌劑進行輪換使用。

關鍵詞：蘆筍莖枯病菌;苯醚甲環(huán)唑;敏感性;田間防效

中圖分類號：S 435文獻標識碼：A文章編號：1008-0384（2019）06-684-06

Abstract： 【Objective】 The sensitivity of Phomopsis asparagi to difenoconazole， and the disease control efficacies of 3 fungicide products in the field were studied. 【Method】Pathogen samples of the stem blight disease on asparagus were collected from Fujian， Henan， Hunan， Shanxi， and Shandong provinces and isolated to determine their mycelial growth on a medium laden with difenoconazole. The disease control efficacies of 3 fungicide products， i.e.， （a） 10% difenoconazole WG， （b） 35% fluopyram+tebuconazole SC， and （c） 325 g·L-1 difenoconazole+azoxystrobin SC， were assessed in the field. 【Result】 The EC50 of the 132 isolates to difenoconazole ranged between 0.010 8 μg·L-1 and 2.654 8 μg·mL-1 averaging （0.693? 4±0.044 1）μg·mL-1. The data did not exhibit a normal distribution pattern. A significant difference in difenoconazole sensitivity was found between the isolates from Fujian and Shandong or Hunan （P<0.05）. Even the pathogen samples from a same province varied in their sensitivity toward the fungicide. The field test demonstrated that when （a） was applied at 135.00 g·hm-2 the disease severity was reduced by 75.60% in 2017 and 75.91% in 2018; when （b） was employed at 118.13+118.13 g·hm-2? the severity was lessened by 82.08% in 2017 and 82.32% in 2018; and， when （c） was used at 84.38+135.00 g·hm-2 the severity was decreased by 82.74% in 2017 and 83.23% in 2018. It indicated that the latter two applications were significantly more effective than the first one for the disease control （P<0.05）. 【Conclusion】 The non-normal distribution of the? sensitivities to difenoconazole of the pathogen isolates from various localities suggested the existence of resistant subpopulations of P. asparagi in the field. Being safe to Asparagus officinalis， the application of either 35% fluopyram+tebuconazole SC or 325 g·L-1difenoconazole+azoxystrobin SC was recommended for the control of stem blight disease on asparagus.

Key words： Phomopsis asparagi; difenoconazole; sensitivity; control efficacy

0 引言

【研究意義】蘆筍Asparagus officinalis L.又稱石刁柏或龍須菜，是一種深受消費者喜愛的營養(yǎng)高檔的保健型蔬菜，有“蔬菜之王”的美譽。我國作為蘆筍種植面積最大的國家，蘆筍栽培面積占全球的50%以上。蘆筍莖枯病是由天門冬擬莖點霉菌Phomopsis asparagi（Sacc.）Bubak侵染引起的一種毀滅性的真菌病害，嚴重影響蘆筍的產(chǎn)量和質(zhì)量[1]。蘆筍是多年生雌雄異株的植物，育種周期長，抗病育種工作進展緩慢，目前育成的蘆筍品種大多不抗蘆筍莖枯病[2]?；瘜W防治仍然是控制蘆筍莖枯病的主要手段。苯醚甲環(huán)唑是三唑類殺菌劑，是我國登記用于防治蘆筍莖枯病的主要殺菌劑，已在生產(chǎn)上使用多年，當前我國不同地域蘆筍莖枯病菌對其敏感性的研究尚未見報道。因此，建立我國蘆筍莖枯病菌對苯醚甲環(huán)唑的敏感性基線，明確苯醚甲環(huán)唑對蘆筍莖枯病的田間防效，篩選可輪換用于防治蘆筍莖枯病的殺菌劑，對蘆筍莖枯病的防治意義重大?！厩叭搜芯窟M展】防治蘆筍莖枯病的殺菌劑主要有苯醚甲環(huán)唑、代森鋅、代森錳鋅、烯唑醇、甲基硫菌靈等[3]。代森鋅、代森錳鋅是廣譜保護性的殺菌劑（DMI），不具有內(nèi)吸特性，依靠施用后在植物表面形成的藥膜，抑制病菌孢子的萌發(fā)和侵入，破壞病菌正常生理代謝所需各種酶的活性，從而達到殺菌防病的目的，通常使用濃度較高，在蘆筍的表面形成的藥膜影響蘆筍的品質(zhì)，降低了蘆筍的商品價值。甲基托布津和多菌靈均屬于苯并咪唑類殺菌劑（MBC），具有內(nèi)吸性，殺菌譜廣，其作用機制是通過與微管蛋白結合影響微管的正確組裝，從而破壞紡錘絲的形成，最終阻礙細胞正常的有絲分裂而起到殺菌的作用，但其作用位點單一，極易產(chǎn)生抗藥性[4]。已有報道表明分離自江蘇、河北、福建的菌株分別對甲基托布津、多菌靈、代森錳鋅產(chǎn)生抗藥性[4-6]。【本研究切入點】殺菌劑抗性委員會（FRAC）認為苯醚甲環(huán)唑是一類具有中等抗藥性風險的殺菌劑[13]，而從病原菌的角度分析，蘆筍莖枯病菌繁殖周期短，再侵染頻繁，風、雨和農(nóng)事操作均可傳播，可全年危害蘆筍，是中到高等抗藥性風險的病原菌。因此，明確我國蘆筍莖枯病菌對苯醚甲環(huán)唑的敏感性，測定苯醚甲環(huán)唑的田間防效，將有助于評價蘆筍莖枯病菌對苯醚甲環(huán)唑的抗藥性風險?！緮M解決的關鍵問題】建立我國主要蘆筍種植區(qū)的蘆筍莖枯病菌對苯醚甲環(huán)唑的敏感基線，明確苯醚甲環(huán)唑對蘆筍莖枯病的田間防治效果，篩選可輪換用于防治蘆筍莖枯病的殺菌劑，為科學評價蘆筍莖枯病菌對苯醚甲環(huán)唑的抗藥性風險奠定基礎，為防治蘆筍莖枯病提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試藥劑

96.1%苯醚甲環(huán)唑原藥（江蘇耕新化學有限公司），用二甲基亞砜配成1×103 μg·mL-1溶液，置于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

10%苯醚甲環(huán)唑WG（瑞士先正達作物保護有限公司），35%氟吡菌酰胺·戊唑醇SC（拜耳作物科學中國有限公司），325 g·L-1嘧菌酯·苯醚甲環(huán)唑SC（瑞士先正達作物保護有限公司）。

1.1.2 供試菌株及蘆筍品種

從福建、河南、湖南、山西和山東5個省采集蘆筍莖枯病樣本，并用單孢分離法分離和鑒定了132株蘆筍莖枯病菌菌株。其中福建省33株，河南省24株，湖南省20株，山西省30株，山東省25株。采用濾紙片法保存于-20℃冰箱中，備用。

蘆筍品種：格蘭德F1。

1.2 方法

1.2.1 蘆筍莖枯病菌對苯醚甲環(huán)唑的敏感性測定 采用生長速率法[7]。將蘆筍莖枯病菌置于PDA培養(yǎng)基上25℃培養(yǎng)7 d后，用直徑5 mm的打孔器打取菌餅，將菌餅接種于含有不同質(zhì)量濃度苯醚甲環(huán)唑的PDA平板上（苯醚甲環(huán)唑終質(zhì)量濃度分別為：0.018 75、0.037 50、0.075 00、0.150 00、0.300 00、1.500 00、5.000 00 μg·mL-1），以只含有相同濃度二甲基亞砜的PDA平板為對照。每藥劑濃度處理5個重復。置于25℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7～9 d后，用十字交叉法測量菌落的直徑。

1.2.2 3種殺菌劑對蘆筍莖枯病的防治效果 試驗地點選在福建省莆田市莊邊鎮(zhèn)吉云村，蘆筍品種格蘭德F1于2014年移栽種植。株距0.25 m，行距1.5 m，該地塊蘆筍莖枯病發(fā)生較重。試驗按隨機區(qū)組排列，每個小區(qū)面積30 m2。按照藥劑標簽上防治蘆筍莖枯病或其他病害的使用劑量分別將10%苯醚甲環(huán)唑WG、35%氟吡菌酰胺·戊唑醇SC和325 g·L-1嘧菌酯·苯醚甲環(huán)唑SC 3種藥劑設置3個不同用量處理，其有效成分用量分別為：45.00、67.50、135.00 g·hm-2;59.06+59.06、78.75+78.75、118.13+118.13 g·hm-2;42.19+67.50、56.25+90.00、84.38+135.00 g·hm-2。每個處理重復3次，以清水處理為對照。分別于2017年9月5～19日和2018年4月28日至5月11日，每隔7 d噴藥1次，共噴藥3次。最后一次施藥后14 d調(diào)查發(fā)病情況，計算防治效果。病害調(diào)查采取每小區(qū)五點取樣，每點取25根已分枝的蘆筍莖稈。病情分級參照楊迎青等[8]制定的標準，略有修改，0級：無發(fā)病;1級：發(fā)病面積占總面積的5%以下;3級：發(fā)病面積占總面積的5%～15%;5級：發(fā)病面積占總面積的16%～25%;7級：發(fā)病面積占總面積的26%～50%;9級：發(fā)病面積占總面積的50%以上。

1.3 數(shù)據(jù)分析

病情指數(shù)=∑（各級病株數(shù)×相對級數(shù)值）調(diào)查的總株數(shù)×9×100

防治效果=對照區(qū)病情指數(shù)-處理區(qū)病情指數(shù)對照區(qū)病情指數(shù)×100%

菌株間變異系數(shù)=最大的EC50值最小的EC50值

采用SPSS 16.0軟件進行相關性分析和正態(tài)性檢驗，采用Duncan氏新復極差法（DMRT）進行差異顯著性分析（P = 0.05）。菌株間變異系數(shù)的計算參照Dai等[9]的研究方法。

2 結果與分析

2.1 蘆筍莖枯病菌對苯醚甲環(huán)唑的敏感性

供試的132株菌株對苯醚甲環(huán)唑的EC50值為0.010 8～2.654 8 μg·mL-1，平均值為（0.6934±0.0441）μg·mL-1（表1）。其敏感性頻率分布呈單峰曲線，但是有一條長的右手尾巴（圖1）。K-S法正態(tài)性檢驗結果顯示供試菌株對苯醚甲環(huán)唑的敏感性頻率分布不符合正態(tài)性分布（P = 0.01），表明蘆筍莖枯病菌對苯醚甲環(huán)唑的敏感性發(fā)生了分化，已出現(xiàn)敏感性下降的亞群體。曲線右側拖尾部分對苯醚甲環(huán)唑的EC50值大于1.500 0 μg·mL-1的菌株有10株，其中福建省、河南省、山西省和山東省的供試菌株分別為5株、1株、3株和1株。

3 討論與結論

苯醚甲環(huán)唑是三唑類殺菌劑中的重要成員，具有良好的預防、保護和治療作用。其作用機理通過抑制麥角甾醇的生物合成而干擾病菌的正常生長，對多種植物的病原菌有較好的抑制作用[10-12]，同時苯醚甲環(huán)唑還對植物病原菌的孢子形成也有強烈的抑制作用[13]。

殺菌劑抗性委員會（FRAC）認為苯醚甲環(huán)唑是一類具有中等抗藥性風險的殺菌劑[14]。本研究中，從全國5省分離的132株蘆筍莖枯病菌對苯醚甲環(huán)唑的敏感性頻率分布呈連續(xù)單峰曲線。K-S法檢驗結果顯示供試菌株對苯醚甲環(huán)唑的EC50值不符合正態(tài)分布，出現(xiàn)了右側拖尾，表明田間出現(xiàn)了敏感性下降的亞群體。福建、河南、湖南、山西、山東5省供試菌株對苯醚甲環(huán)唑的敏感性有一定差異，其中福建省供試菌株對苯醚甲環(huán)唑的EC50值的平均值最大，為（0.9184±0.1489）μg·mL-1，顯著高于湖南和山東供試菌株對苯醚甲環(huán)唑的EC50值平均值。福建省的供試菌株中以東山縣、云霄縣菌株對苯醚甲環(huán)唑的EC50值最大，這可能與這兩個縣蘆筍栽培歷史最悠久，長期以來蘆筍莖枯病發(fā)生嚴重，施藥次數(shù)多，病原菌藥劑選擇壓力大相關。 福建省莆田市涵江區(qū)莊邊鎮(zhèn)6株供試菌株對苯醚甲環(huán)唑的EC50值平均值（0.7024±0.1132）μg·mL-1，與本研究全國5省132株蘆筍莖枯病菌對苯醚甲環(huán)唑的EC50值平均值相當，在該地區(qū)開展的田間藥效試驗表明，施用10%苯醚甲環(huán)唑WG最高供試劑量135.00 g·hm-2兩年防效分別為75.60%和75.91%，而35%氟比菌酰胺·戊唑醇SC供試劑量78.75+78.75 g·hm-2的兩年防效分別為80.09%和79.46%，325 g·L-1嘧菌酯·苯醚甲環(huán)唑SC供試劑量56.25+90.00 g·hm-2的兩年防效分別為78.99%和79.34%，均顯著高于10%苯醚甲環(huán)唑WG135.00 g·hm-2的防效。35%氟吡菌酰胺·戊唑醇SC中的有效成分戊唑醇和氟吡菌酰胺分別屬于三唑類殺菌劑（DMIs）和琥珀酸脫氫酶抑制劑類（SDHI），325 g·L-1嘧菌酯·苯醚甲環(huán)唑SC的有效成分苯醚甲環(huán)唑和嘧菌酯分別屬于三唑類殺菌劑（DMIs）和甲氧基丙烯酸酯類（QoIs）殺菌劑?？梢姡蝾悮⒕鷦┖筒煌饔脵C理殺菌劑的混配制劑防治蘆筍莖枯病具有較好的防治效果。

從病原菌的角度分析，蘆筍莖枯病菌屬于中到高等抗藥性風險的病原菌，而苯醚甲環(huán)唑又是中到高等抗藥性風險的殺菌劑，因此，防治蘆筍莖枯病時應輪換使用其他不同作用機理的殺菌劑或將苯醚甲環(huán)唑與其他作用機理的殺菌劑混配使用，同時要做好蘆筍莖枯病菌對苯醚甲環(huán)唑的敏感性監(jiān)測工作，這將對指導田間蘆筍莖枯病的防治具有重要的實踐意義。

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（責任編輯：林海清）