榆林地區(qū)馬鈴薯莖尖脫毒技術(shù)研究

張媛媛 陳勤

摘 ? 要：馬鈴薯脫毒主要是通過(guò)莖尖分生組織培養(yǎng)脫去馬鈴薯 PVX、PVY、PVS、PLRV和PSTV等病毒、類(lèi)病毒。莖尖分生組織脫毒培養(yǎng)的主要技術(shù)步驟有培養(yǎng)基的配置、剝離材料的處理、脫毒苗的病毒檢測(cè)及脫毒苗防蟲(chóng)網(wǎng)棚移栽。通過(guò)科學(xué)化管理，可生產(chǎn)出脫毒種薯用于推廣，這樣可以提高優(yōu)良品種特性，提高種薯產(chǎn)量和質(zhì)量，有效延長(zhǎng)馬鈴薯品種服務(wù)生產(chǎn)的年限。

關(guān)鍵詞：莖尖脫毒技術(shù);原理;可行性;技術(shù)步驟

據(jù)報(bào)道可知，侵染馬鈴薯的病毒約有30種，在我國(guó)廣大馬鈴薯產(chǎn)區(qū)造成顯著影響的有7種，包括6種病毒（PVX，PVY，PVA，PVM，PVS，PLRV）和1種類(lèi)病毒（PSTVd）。

1 ? 榆林地區(qū)脫毒種薯繁育體系概況

榆林市馬鈴薯脫毒技術(shù)應(yīng)用工作始于20世紀(jì)80年代中期，由于當(dāng)時(shí)經(jīng)費(fèi)嚴(yán)重不足、基礎(chǔ)設(shè)施條件太差以及繁種體系極不健全等原因，導(dǎo)致脫毒微型薯生產(chǎn)無(wú)法迅速發(fā)展。

2013年起，該市以探索馬鈴薯原種繁、供、儲(chǔ)、用新模式和補(bǔ)貼新辦法為出發(fā)點(diǎn)，組織實(shí)施馬鈴薯良種繁供“一畝田”工程，按照縣區(qū)每個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)1/3村組實(shí)施的辦法，3年實(shí)現(xiàn)1個(gè)輪回。至2017年，全市馬鈴薯良種覆蓋率達(dá)到80%以上。

2 ? 榆林地區(qū)開(kāi)展馬鈴薯莖尖脫毒技術(shù)的可行性

榆林市位于黃土高原北部，海拔高度為1 000～1 500 m，年均氣溫8 ℃，冬季時(shí)間長(zhǎng)而寒冷，夏季涼爽，晝夜溫差大;光照充足，土層深厚，具備發(fā)展馬鈴薯產(chǎn)業(yè)的自然條件。馬鈴薯耐旱、適應(yīng)性強(qiáng)、營(yíng)養(yǎng)豐富、耐貯藏。因此，馬鈴薯一直是本地大面積種植的主要作物之一，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和農(nóng)民生活中占據(jù)相當(dāng)重要的位置，已被確定為榆林市農(nóng)業(yè)的五大主導(dǎo)產(chǎn)業(yè)之一。

3 ? 馬鈴薯莖尖分生組織培養(yǎng)主要技術(shù)步驟

3.1 ? 培養(yǎng)基的制備

以MS作為基本培養(yǎng)基，通過(guò)添加NAA、6-BA、GA3、泛酸鈣、激動(dòng)素（KT）5種生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，針對(duì)不同的品種設(shè)計(jì)不同激素成分和配比濃度的培養(yǎng)基。

3.2 ? 剝離材料的準(zhǔn)備

選用具備標(biāo)準(zhǔn)薯形的薯塊，在室溫下放置于暗光中萌芽，大約12 d薯塊長(zhǎng)出0.5 cm的白色簇生芽時(shí)，將薯塊放置于自然散射光下繼續(xù)萌芽，長(zhǎng)至1.5～2.0 cm時(shí)取芽。

3.3 ? 剝離材料的處理

用鑷子小心取下薯塊上的短壯芽，放在罩有紗布的燒杯中，用自來(lái)水沖洗30 min。在無(wú)菌操作臺(tái)上，用75%的酒精均勻噴濕靜置1 min，用滅菌水沖洗一遍，再用6%的次氯酸鈉溶液浸泡10 min，之后再用無(wú)菌水沖洗3遍，放置在燒杯內(nèi)備用。

3.4 ? 芽莖尖的剝離和培養(yǎng)

將處理好的芽子用無(wú)菌鑷子夾取放置10倍的體視顯微鏡下，用解剖針剝離1～2個(gè)葉原基的莖尖置于培養(yǎng)基中。將接種后的試管放在日光溫室內(nèi)培養(yǎng)，溫度條件為20～27 ℃，光照時(shí)間為16 h/d。待苗高約1 cm轉(zhuǎn)入MS培養(yǎng)基中培養(yǎng)。生根后的脫毒苗進(jìn)行切段擴(kuò)繁，擴(kuò)繁數(shù)量足夠進(jìn)行病毒檢測(cè)。

3.5 ? 脫毒效果的檢測(cè)

經(jīng)過(guò)脫毒處理的植株必須經(jīng)過(guò)病毒學(xué)檢測(cè)，才能確定是否存在病毒。

3.5.1 ? 6種病毒檢測(cè)方法

目前廣泛沿用的病毒檢測(cè)方法是酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay，ELISA），是一種免疫酶技術(shù)（NY/T 1212-2006），是在不影響酶活性和免疫球蛋白分子共價(jià)結(jié)合成酶標(biāo)標(biāo)記抗體。酶標(biāo)記抗體可直接或通過(guò)免疫橋與包被在固相支持物上帶測(cè)定的抗原和抗體特異性的結(jié)合，再通過(guò)酶對(duì)底物作用產(chǎn)生有顏色或電子密度高的可溶性產(chǎn)物，借以顯示出抗體的性質(zhì)和數(shù)量。

3.5.2 ? 紡錘塊莖類(lèi)病毒（PSTVD）檢測(cè)方法

檢測(cè)原理：將類(lèi)病毒的核酸RNA在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下轉(zhuǎn)錄為cRNA，再以此cRNA為模板，在Taq DNA聚合酶的催化作用下進(jìn)行PCR擴(kuò)增，最后根據(jù)判斷PCR產(chǎn)物中是否有目標(biāo)特異性條帶，從而達(dá)到鑒定類(lèi)病毒的目的。

3.6 ? 脫毒苗防蟲(chóng)網(wǎng)棚移栽

3.6.1 ? 煉苗

從培養(yǎng)室取出放置在溫室里，打開(kāi)瓶蓋放置2～3 d煉苗。

3.6.2 ? 防蟲(chóng)網(wǎng)棚的建立

選擇四周無(wú)高大建筑物，水源、電源、交通便利、通風(fēng)透光的地方建網(wǎng)棚，周?chē)? km內(nèi)不能有馬鈴薯、其他茄科、十字花科作物和桃樹(shù)。網(wǎng)棚用熱鍍鋅鋼管作支撐，隔離網(wǎng)紗的孔徑要達(dá)到60～80目。

3.6.3 ? 移栽前準(zhǔn)備

以蛭石作為主要基質(zhì)。先用園藝地布鋪好地面，再把苗床架好，然后把蛭石和甲拌磷、硫酸鉀、磷酸二銨混合均勻，在移栽前1 d澆水浸透。

3.6.4 ? 移栽

將經(jīng)煉苗的脫毒苗用鑷子取出，洗凈根系殘留的培養(yǎng)基，剪短較長(zhǎng)的根系，然后用生根粉溶液蘸根，按株行距6 cm×7 cm載入基質(zhì)2～2.5 cm深。7～10 d后及時(shí)去掉遮陽(yáng)網(wǎng)，根據(jù)苗情噴施營(yíng)養(yǎng)液;30 d后注意防治晚疫病，每隔7 d噴施代森錳鋅、甲基異硫磷、農(nóng)用鏈霉素等藥劑。收獲時(shí)應(yīng)避免機(jī)械損傷和品種混雜。收獲后攤晾4～7 d，剔除爛薯、病薯及雜物。

因此，本文采用莖尖脫毒技術(shù)來(lái)脫除馬鈴薯體內(nèi)對(duì)生產(chǎn)造成危害的病毒及類(lèi)病毒，恢復(fù)馬鈴薯的優(yōu)良種性、改善品質(zhì)、提高產(chǎn)量，對(duì)提高榆林馬鈴薯生產(chǎn)技術(shù)水平和產(chǎn)業(yè)開(kāi)發(fā)水平、增強(qiáng)市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力、增加農(nóng)民收入、促進(jìn)地方經(jīng)濟(jì)發(fā)展具有重要意義。

（收稿日期：2019-06-13）