山羊偽結(jié)核棒狀桿菌的分離鑒定及耐藥性分析

黃麗麗 林裕勝 江錦秀 張靖鵬 游偉 肖義軍 胡奇林

摘?要：【目的】分離、鑒定福建省某養(yǎng)殖場病死山羊的病原，明確山羊病死原因，為山羊偽結(jié)核棒狀桿菌病的防治提供科學(xué)依據(jù)?！痉椒ā恳詿o菌采集的病羊肺臟為材料，進(jìn)行細(xì)菌分離純化，鑒定分離菌株的形態(tài)特征及培養(yǎng)特性;提取菌株DNA，利用特異性引物和16S rRNA通用引物進(jìn)行PCR，16S rRNA擴(kuò)增片段送公司進(jìn)行克隆測序并對序列進(jìn)行分析;并進(jìn)行生化、藥敏和動物攻毒試驗?！窘Y(jié)果】該分離菌株在含10%脫纖維綿羊血的瓊脂培養(yǎng)基上，生長成直徑1 mm左右、中央凸起、乳白色、邊緣不整齊、伴有β溶血環(huán)的菌落，在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上生長不良，在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上不能生長。16S rRNA測序結(jié)果經(jīng)NCBI在線軟件Blast后顯示與GenBank上的偽結(jié)核棒狀桿菌的同源性高達(dá)100%;山羊偽結(jié)核棒狀桿菌特異性PCR有目的擴(kuò)增條帶;生化試驗結(jié)果與伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊中偽結(jié)核棒狀桿菌相符，表明分離菌為山羊偽結(jié)核棒狀桿菌，命名為FJ-PN。小鼠攻毒試驗結(jié)果顯示，小鼠腹腔與皮下注射0.3 mL含量為4×105CFU·mL-1的分離菌，在40 h內(nèi)全部死亡;山羊攻毒試驗結(jié)果顯示，山羊經(jīng)皮下注射2 mL、鼻腔接種1 mL含量為4×105CFU·mL-1的分離菌3 d后死亡。藥敏試驗結(jié)果顯示該菌對克拉霉素、環(huán)丙沙星、青霉素、四環(huán)素、左氟沙星、氧氟沙星、慶大霉素高度敏感，對紅霉素、氯霉素、氨芐西林、頭孢噻肟、頭孢西丁、利福平低度敏感，對鏈霉素、甲氧芐啶表現(xiàn)耐藥?！窘Y(jié)論】本研究分離到的1株細(xì)菌為山羊偽結(jié)核棒狀桿菌，具有較強的致病性，且對抗生素表現(xiàn)出一定的耐藥性，為該病的診斷和合理用藥提供了理論支持。

關(guān)鍵詞：偽結(jié)核棒狀桿菌;山羊;耐藥性;分離;鑒定

中圖分類號：S 855.1+2文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A文章編號：1008-0384（2019）08-925-08

Abstract：【Objective】To identify the pathogen that caused the death of goats in a farm in Fujian for prevention and treatment of Pseudotuberculosis. 【Method】Aseptically collected specimens of lung tissues from the dead goats were used to isolate the microbes for morphological observation and strain identification. DNA of the isolates were extracted， and the specific and 16S rRNA universal primers selected for PCR. The 16S rRNA amplified fragment was cloned， sequenced and analyzed. Biochemical， drug sensitivity， and animal challenge tests were performed on the isolate for taxonomic identification. 【Results】The isolated strain was cultured on an agar medium containing 10% defibrated sheep blood to grow into a colony with a diameter of about 1 mm， a central bulge， a milky white color， an irregular edge， and a beta hemolysis ring. It did not grow well on a nutrient agar nor a MacConkey agar medium. The 16S rRNA sequencing showed an up to 100% homology with Corynebacterium pseudotuberculosis on GenBank by the NCBI online software Blast. Like the specific PCR of C.pseudotuberculosis， that of the isolate also had the same amplified targeted bands. In addition， the biochemical test on the isolate duplicated the characteristics of C. pseudotuberculosis shown in the Berger's Bacterial Identification Manual. Hence， the isolated pathogen named as FJ-PN was verified to be C. pseudotuberculosis. A challenge test on mice with an intraperitoneal or subcutaneous injection of 0.3 mL of 4×105 CFU·mL-1 of the isolate died within 40 h. Furthermore， two goats injected subcutaneously with 2 mL of 4×105 CFU·mL-1 and intranasal inoculated simultaneously with 1 mL of 4×105 CFU·mL-1 of the isolate died within 72 h. The drug sensitivity test showed that the strain was highly sensitive to clarithromycin， ciprofloxacin， penicillin， tetracycline， levofloxacin， ofloxacin， and gentamicin， slightly sensitive to erythromycin， chloramphenicol， ampicillin， cefotaxime， cefoxitin， and rifampicin， and resistant to streptomycin or trimethoprim. 【Conclusion】The pathogenic bacteria isolated from the diseased goats was identified as C. pseudotuberculosis. It had a strong pathogenicity with varying degrees of drug resistance to antibiotics.

Key words：Corynebacterium pseudotuberculosis; goat; antibiotics resistance;isolation; identification

0?引言

【研究意義】羊偽結(jié)核棒狀桿菌病Pseudotuberculosis是由偽結(jié)核棒狀桿菌（Corynebacterium pseudotuberculosis，CP）引起的人和多種動物共患的一種接觸性慢性細(xì)菌性傳染病[1]，其臨床特征主要表現(xiàn)為淺表淋巴結(jié)腫大，呈膿性干酪樣壞死，部分羊只組織臟器內(nèi)出現(xiàn)干酪樣膿腫，故該病也稱為干酪樣淋巴結(jié)炎 （Caseouslymphadenitis，CLA）[2]。該病的發(fā)病率一般在8.36%～30%[3-4]，一年四季均可發(fā)病[5]，且患病率隨年齡增大而升高[6]。該病主要發(fā)生于綿羊和山羊，此外，該菌也可感染駱駝、馬、牛、兔等多種動物[7-8]。其感染途徑主要是體內(nèi)外創(chuàng)傷引起，也可通過破損的皮膚、污染的飼料及破潰的膿汁在羊群中直接接觸傳播，此外，該病也可經(jīng)呼吸道、消化道或吸血昆蟲傳播[9]。由于該病發(fā)病緩慢且致死率低，難以引起養(yǎng)殖戶重視，而該病一旦侵入羊群則很難徹底清除，是當(dāng)今世界公認(rèn)的難以防治的傳染病之一，世界上幾乎所有養(yǎng)羊的國家或地區(qū)甚至大部分羊場都有該病存在[10]?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】偽結(jié)核棒狀桿菌隸屬棒狀桿菌屬，放射菌科，兼性胞內(nèi)寄生，為革蘭氏陽性菌[11]，該菌能夠產(chǎn)生壞死性、溶血性外毒素，其成分以磷脂酶為主[5]。1888年EDWARD從奶牛的淋巴管炎中首次分離出偽結(jié)核棒狀桿菌[12]，1891年P(guān)reisz 和Guinard從羊的腎臟膿腫中再次分離到[13]，此后，一些學(xué)者相繼從馬、駱駝、羊和人的病變材料中分離到[14-18]。1956年我國在羊結(jié)核結(jié)節(jié)中分離到該菌[19]。1989年，Zhao等成功研制出該菌分離用選擇培養(yǎng)基， 并用該培養(yǎng)基分離到偽結(jié)核棒狀桿菌[18，20]。至今，該菌能從羊鼻腔、咽腔及羊體內(nèi)外生長膿皰處分離得到。由其引起的羊偽結(jié)核棒狀桿菌病在世界范圍內(nèi)廣泛流行，我國內(nèi)蒙古、陜西、甘肅、新疆、云南和廣東等[18，21]地區(qū)均有該病發(fā)生的報道，給養(yǎng)羊業(yè)的發(fā)展造成極大損失，已引起廣大學(xué)者的關(guān)注[22-23]，各個國家都對該病的防治和檢測都非常重視，因此被農(nóng)業(yè)部列為三類動物疫病[24]。羊偽結(jié)核棒狀桿菌病根據(jù)其病變類型分為體表型和內(nèi)臟型，有時兩種類型可以同時見于同一只病羊。目前，該病的診斷方法主要有血清學(xué)診斷和細(xì)菌分離鑒定，血清學(xué)診斷方法以酶聯(lián)免疫吸附試驗 （ELISA）為主，王韡等[7]、霍寧寧等[11]和王璇等[25]通過ELISA 法診斷;鄭敏等[26]、韋志鋒等[27]、朱偉英等[28]通過分離羊偽結(jié)核棒狀桿菌并鑒定來診斷該病?！颈狙芯壳腥朦c】從病羊皮膚膿腫中分離出偽結(jié)核棒狀桿菌的報道較多，然而國內(nèi)尚未有從肺臟膿腫中分離出該菌的報道。本研究從福建省某羊場病死山羊的肺臟膿腫中分離出1株細(xì)菌，疑似山羊偽結(jié)核棒狀桿菌。【擬解決的關(guān)鍵問題】為了明確該分離菌株的分類地位、致病性及藥物敏感性，本研究對分離菌株進(jìn)行了系統(tǒng)鑒定、致病性和藥物敏感性試驗，為福建省山羊偽結(jié)核棒狀桿菌病的診斷和合理用藥提供理論依據(jù)。

1?材料與方法

1.1?病料來源與采集

福建省屏南縣某山羊養(yǎng)殖場某棟羊舍約有10%山羊出現(xiàn)皮膚膿腫、部分病羊膿腫處流出濃汁，病羊精神較差、食欲降低，2019年3月23日， 1頭山羊出現(xiàn)急性死亡。對送檢病死羊進(jìn)行剖檢，可見肺臟腫大、有膿腫、出血，心臟、脾臟、肝臟、腎臟未見明顯病變。無菌采取病變肺組織，4～8℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2?相關(guān)試劑及動物來源

Premix-Taq酶、DNA Marker等購自TaKaRa公司;微生物藥敏試紙購自溫州市康泰生物科技有限公司;營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、生化鑒定管購自青島高科技工業(yè)園海博生物技術(shù)有限公司;Ezup柱式動物基因組DNA抽提試劑盒、血液瓊脂培養(yǎng)基、LB培養(yǎng)基等購自生工生物工程（上海）股份有限公司; 試驗用Balb/c小白鼠購自福州吳氏實驗動物貿(mào)易有限公司;試驗用山羊購自無偽結(jié)核棒狀桿菌感染羊場。

1.3?細(xì)菌的分離培養(yǎng)

無菌挑取肺臟膿腫處組織劃線接種于血瓊脂平板上，37℃培養(yǎng)24 h后再挑取單個的溶血菌落接種到含10%胎牛血清的LB肉湯培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。將培養(yǎng)后的菌液稀釋后再次接種于血瓊脂平板上，挑取單個的菌落接種到含有10%胎牛血清的LB肉湯培養(yǎng)基上進(jìn)行增菌培養(yǎng)。

1.4?引物設(shè)計

細(xì)菌16S rRNA通用引物參照Weisburg等[29]設(shè)計合成，山羊偽結(jié)核棒狀桿菌磷脂酶D （phospholipase D，PLD）基因特異性引物參照許國洋等[30]設(shè)計合成，引物由鉑尚生物技術(shù)（上海）有限公司合成，其序列見表1。

1.5?細(xì)菌的形態(tài)觀察

挑取純化后接種血瓊脂平板上的單個菌落，進(jìn)行革蘭氏染色、鏡檢以及細(xì)菌形態(tài)觀察。

1.6?16S rRNA序列分析和特異性PCR鑒定

取純化培養(yǎng)后菌液200 μL，使用生工生物工程（上海）股份有限公司生產(chǎn)的動物基因組DNA提取試劑盒抽提DNA。以抽提后的DNA為模板進(jìn)行16S rRNA 基因的PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增體系為：Premix-Taq酶20 μL，16S rRNA上、下游引物（10 μmol·L-1）各2 μL，DNA模板6 μL，ddH2O補足40 μL，PCR程序為：95℃預(yù)變性5 min;95℃變性45 s，52℃退火30 s，72℃延伸1 min，30個循環(huán);72℃終延伸10 min，4℃保存。將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物送鉑尚生物技術(shù)（上海）有限公司進(jìn)行克隆測序，獲得的序列與GenBank中細(xì)菌16S rRNA 基因序列進(jìn)行比較。山羊偽結(jié)核棒狀桿菌特異性PCR鑒定，20 μL反應(yīng)體系：Premix-Taq酶10 μL，上、下游引物（10 μmol·L-1）各1 μL，DNA模板3 μL，ddH2O 5 μL，PCR反應(yīng)條件：94℃預(yù)變性5 min;95℃變性45 s，55℃退火45 s，72℃延伸45 s，30個循環(huán);72℃終延伸 10 min。反應(yīng)結(jié)束后取5.0 μL PCR擴(kuò)增產(chǎn)物在1%瓊脂糖凝膠上電泳檢測，凝膠成像儀拍照分析。

1.7?生化試驗

取處于指數(shù)生長期的分離菌按照青島高科技工業(yè)園海博生物技術(shù)有限公司生化反應(yīng)試劑盒說明書進(jìn)行操作，操作后的生化管置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24～48 h，觀察其生化特性。

1.8?藥敏試驗

取處于對數(shù)生長期的分離菌懸液0.2 mL均勻涂布在血瓊脂平板上，涂布好的血瓊脂平板靜置片刻，將藥敏試紙片放置在平板上并用鑷子輕壓以防脫落，37℃倒置培養(yǎng)24 h，測量抑菌圈（含藥敏紙片）的大小，每種藥片作3次重復(fù)，取平均值為抑菌圈直徑（mm）。按照溫州市康泰生物科技有限公司提供的生物藥敏試紙說明書，判定分離菌株對抗生素的敏感（S）、中介（I）及耐藥（R）性。

1.9?動物攻毒試驗

1.9.1?小鼠攻毒試驗

取14只Balb/c小鼠，隨機(jī)分成3組，攻毒組2組，每組5只，空白組4只。攻毒組分別進(jìn)行皮下和腹腔注射接種，每只小鼠接種0.3 mL含量為4×105 CFU·mL-1的分離菌，空白對照組腹腔和皮下各注射0.?3 mL PBS。接種后觀察臨床癥狀及死亡情況等。同時分別取皮下注射組與腹腔注射組小鼠的肝臟、脾臟及皮下膿腫物再進(jìn)行細(xì)菌分離鑒定。

1.9.2?山羊攻毒試驗

取3月齡健康山羊3只，2只皮下接種2 mL含量為4×105 CFU·mL-1的分離菌，同時經(jīng)鼻腔接種1 mL含量為4×105CFU·mL-1的分離菌，另1只皮下和鼻腔分別接種2 mL和1 mL生理鹽水作為空白對照。接種后觀察臨床癥狀及死亡情況等。試驗結(jié)束后采集攻毒山羊的腎臟、肝臟及肺臟再進(jìn)行細(xì)菌分離鑒定。

2?結(jié)果與分析

2.1?細(xì)菌的分離培養(yǎng)

無菌挑取病死羊肺臟膿腫處組織，接種在血瓊脂平板上，在37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后可見平板上長出針尖大小的菌落，不透明，呈乳白色，菌落周圍有狹窄的β型溶血環(huán)，隨著培養(yǎng)時間延長菌落變?yōu)榛野咨?，光滑，半透明，且有明顯的溶血現(xiàn)象。在普通瓊脂培養(yǎng)基上生長不良，在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上不能生長。

2.2?細(xì)菌染色特性

對分離的細(xì)菌進(jìn)行涂片染色、鏡檢，可見革蘭氏陽性短球桿菌，菌體兩端鈍圓且著色較深，菌體單個、散在排列。

2.3?分離菌16S rRNA 基因序列鑒定及特異性PCR鑒定

通過對分離菌株16S rRNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳后可見1條目的片段，其大小為1 500 bp左右，與預(yù)期目的片段大小相符（圖略）?？寺y序結(jié)果顯示，所擴(kuò)增的片段大小為1 512 bp;與GenBank中收錄的CP003152.1、CP026374.1、CP036535.1、CP036257.1、CP014543.1、CP003062.1、CP002924.1、CP013146.1、CP003385.1、CP013698.1、CP024995.1、CP012022.2、CP002251.2等（表2）山羊偽結(jié)核棒狀桿菌的16S rRNA同源性高達(dá)100%。遺傳進(jìn)化樹結(jié)果顯示（圖1），分離菌與山羊偽結(jié)核棒狀桿菌在同一分支上，表明該分離菌為山羊偽結(jié)核棒狀桿菌，命名為FJ-PN。同時用偽結(jié)核棒狀桿菌特異性引物進(jìn)行PCR驗證，結(jié)果如圖2所示，在290 bp左右有一條帶，與預(yù)測值相符，證實分離菌為山羊偽結(jié)核棒狀桿菌。

2.4?生化試驗

將分離的山羊偽結(jié)核棒狀桿菌接種到微量生化管中，在37℃培養(yǎng)24～48 h后觀察，結(jié)果顯示，該分離菌能夠分解尿素酶、苯丙氨酸脫羧酶，不能分解3%氯化鈉氨基酸脫羧酶、賴氨酸脫羧酶、氨基酸脫羧酶、鳥氨酸脫羧酶;能發(fā)酵1%NaCl甘露糖和1%NaCl乳糖，不能發(fā)酵核糖醇、肌醇、甘露醇、蜜二糖、棉子糖;10%NaCl胰胨水、半固體瓊脂、氰化鉀試驗均呈陽性，硫化氫、西蒙氏枸櫞酸鹽和MR-VP試驗均呈陰性。其生化特性與《伯杰細(xì)菌鑒定手冊》[31]中的偽結(jié)核棒狀桿菌的生化特性相符。

2.5?山羊偽結(jié)核棒狀桿菌分離株的藥敏試驗

將涂布菌液且貼有藥敏片的血瓊脂平板37℃培養(yǎng)24 h 進(jìn)行觀察，結(jié)果顯示該分離菌對克拉霉素、環(huán)丙沙星、青霉素、四環(huán)素、左氟沙星、氧氟沙星、慶大霉素高度敏感，對紅霉素、氯霉素、氨芐西林、頭孢噻肟、頭孢西丁、利福平低度敏感，對鏈霉素、甲氧芐啶耐藥。

2.6?小鼠攻毒試驗

小鼠在經(jīng)過腹腔注射0.3 mL含量為4×105CFU·mL-1的山羊偽結(jié)核棒狀桿菌后，16 h攻毒小鼠出現(xiàn)精神不佳、活力下降、背部毛蓬松豎起等癥狀，24 h 3只小鼠死亡，其余2只萎靡不振，32 h后攻毒小鼠全部死亡。皮下注射組攻毒后20 h小鼠精神不佳，24 h有 1只小鼠死亡，其余4只活力下降、背部毛蓬松豎起，32 h 有4只小鼠死亡，余1只萎靡不振，40 h后全部小鼠死亡?？瞻讓φ战M小鼠均正常。無菌剖檢病死小鼠，發(fā)現(xiàn)腹腔注射攻毒小鼠肝臟和脾臟腫大、出血且切面有小白點，皮下注射攻毒小鼠的皮下有淡黃色針尖至粟粒大小的結(jié)核樣膿腫，空白對照組小鼠均正常（圖3）。從腹腔注射組小鼠的肝臟、脾臟以及皮下注射組小鼠的皮下膿腫物中再次分離到細(xì)菌，分別提取其DNA，用偽結(jié)核棒狀桿菌特異性引物進(jìn)行PCR鑒定，腹腔注射組和皮下注射組小鼠分離到的細(xì)菌均有特異性的擴(kuò)增條帶（圖略）。

2.7?山羊攻毒試驗

山羊經(jīng)過皮下接種2 mL、鼻孔接種1 mL含量為4×105CFU·mL-1的山羊偽結(jié)核棒狀桿菌后，20 h攻毒山羊出現(xiàn)精神不佳、活力降低等癥狀，48 h山羊表現(xiàn)出精神極度沉郁、采食量嚴(yán)重降低等癥狀，攻毒3 d后山羊死亡。剖檢病死山羊，發(fā)現(xiàn)攻毒山羊皮下出血、肺部有纖維素粘連、腹腔出血、腎臟表面有出血點（圖4）。從攻毒山羊腎臟、肝臟以及肺臟組織中再次分離到細(xì)菌，分別提取其DNA，用偽結(jié)核棒狀桿菌特異性引物進(jìn)行PCR鑒定，結(jié)果顯示，腎臟、肝臟以及肺臟中分離到的細(xì)菌均有山羊偽結(jié)核棒狀桿菌特異性的擴(kuò)增條帶（圖略）。

3?討論與結(jié)論

偽結(jié)核棒狀桿菌引起的結(jié)核棒狀桿菌病目前在世界范圍內(nèi)廣泛流行，給養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大損失，已引起廣大學(xué)者的關(guān)注[22-23]。

PCR作為快速檢測技術(shù)，在病原鑒定中得到廣泛應(yīng)用，偽結(jié)核棒狀桿菌的PCR鑒定中常以16S rRNA、rpoB和PLD基因作為靶基因進(jìn)行檢測[32]。鄭敏等[26]、韋志鋒等[27]、朱偉英等[28]和李基棕等[33]根據(jù)16S rRNA對分離的山羊偽結(jié)核棒狀桿菌進(jìn)行鑒定;許國洋等[30]根據(jù)偽結(jié)核棒狀桿菌的磷脂酶D基因建立了山羊偽結(jié)核棒狀桿菌PMA-PCR檢測方法。因此，本研究通過細(xì)菌16S rRNA基因通用引物和針對偽結(jié)核棒狀桿菌特異性PCR引物對分離菌進(jìn)行鑒定，經(jīng)16S rRNA克隆測序和偽結(jié)核棒狀桿菌特異性PCR鑒定后，證實分離菌為山羊偽結(jié)核棒狀桿菌。通過細(xì)菌形態(tài)觀察及生化試驗結(jié)果顯示，該菌在血瓊脂平板上呈現(xiàn)針尖大小的菌落，且有明顯的溶血現(xiàn)象;該菌能夠發(fā)酵1%NaCl甘露糖和1%NaCl乳糖，不能發(fā)酵核糖醇、肌醇、甘露醇、蜜二糖、棉子糖，這與鄭敏等[26]、王志芳等[34]、李國平等[35]、朱偉英等[28]和李基棕等[33]報道的一致，符合偽結(jié)核棒狀桿菌的生化特性。

動物攻毒試驗結(jié)果顯示，經(jīng)腹腔注射和皮下注射2種方法接種的小鼠，在40 h內(nèi)全部死亡;經(jīng)皮下注射途徑接種的山羊在攻毒3 d后死亡，剖檢發(fā)現(xiàn)皮下出血、肺部有纖維素粘連、腎臟表面有出血點，從攻毒山羊腎臟、肝臟以及肺臟組織中再次分離到山羊偽結(jié)核棒狀桿菌，證明本研究分離的山羊偽結(jié)核棒狀桿菌具有較強的毒力。

羊偽結(jié)核棒狀桿菌病目前尚未有商品化疫苗，因此臨床上該病的發(fā)病率居高不下，發(fā)病羊只能通過抗生素進(jìn)行治療，但是最近的研究表明，偽結(jié)核棒狀桿菌已對如復(fù)方新諾明、鏈霉素、呋喃妥因等藥物產(chǎn)生了耐藥性[33，36-37]，因此通過藥敏試驗尋找高敏藥物治療該病是指導(dǎo)臨床生產(chǎn)的重要手段之一。本研究的藥敏試驗結(jié)果顯示，分離的山羊偽結(jié)核棒狀桿菌對克拉霉素、環(huán)丙沙星、青霉素、四環(huán)素、左氟沙星、氧氟沙星、慶大霉素為高度敏感，對紅霉素、氯霉素、氨芐西林、頭孢噻肟、頭孢西丁、利福平為低度敏感，對鏈霉素、甲氧芐啶表現(xiàn)耐藥。該結(jié)果與潘淑惠等[38]、王璇等[10]、張夢思等[36]、吳浩陽等[37]研究結(jié)果一致，而與王志芳等[34]、韋志鋒等[27]研究結(jié)果不一致，側(cè)面反映了不同地區(qū)分離株的耐藥性有所差異。

綜上所述，本研究從福建省病死山羊肺臟中分離出1株山羊細(xì)菌，經(jīng)系統(tǒng)鑒定證明該菌為山羊偽結(jié)核棒狀桿菌，致病性試驗結(jié)果顯示分離的山羊偽結(jié)核棒狀桿菌具有較強的毒力，藥敏試驗結(jié)果顯示該菌對克拉霉素、環(huán)丙沙星等高度敏感，對紅霉素、氯霉素等低度敏感，對鏈霉素、甲氧芐啶表現(xiàn)耐藥，為該病的診斷和合理用藥提供了科學(xué)依據(jù)。

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（責(zé)任編輯：張?梅）