春雷霉素高效液相色譜分析方法

李麗霞 程倫 王鵬 胡紫微

摘要：于春雷霉素而言，其是一種農(nóng)用抗生素，對防治農(nóng)作物病害具有良好的效果，不會對周圍環(huán)境造成污染，是現(xiàn)階段應用比較廣泛、較為理想的一種殺菌劑。春雷霉素的特點有：無特征的紫外吸收、極性大、易溶于水，在液相色譜柱上的保留時間相對較短，難以與雜質有效分離，這給分析檢測人員帶來了較大的困難。為了將春雷霉素的色譜行為進行改變，需要對春雷霉素高效液相色譜分析方法進行探究，以期使春雷霉素的作用充分發(fā)揮。

關鍵詞：春雷霉素;高效液相色譜分析方法;離子對

1春雷霉素試驗檢測概述

某公司曾經(jīng)利用柱前衍生化方法，并與疏水性發(fā)色團有效結合，通過這樣的方式對春雷霉素的色譜行為進行改變，使其保留時間逐步增加，同時使春雷霉素具有特征的紫外吸收，但是這種操作方法過于復雜，在操作的過程中，不僅需要投入大量的時間，而且需要投入較多的人力，在衍生化反應過程中會產(chǎn)生一種氣體，名為HF氣體，該氣體具有一定的毒性，因此會對操作人員產(chǎn)生不利影響。此外，在使用柱前衍生化方法的過程中，需要使用相應的冷凍設備，這樣才能保證衍生物在短時間內不被分解，從而使分析結果的有效性得到保障。由于該種操作方法相對復雜，并且在操作的過程中容易產(chǎn)生一系列問題，牛長群等人優(yōu)化了分析條件，并構建出了反相離子對高效液相色譜法。筆者將利用此種方法對2%春雷霉素水劑進行分析，并使用島津LC-10AT vp Plus高效液相色譜儀，在這過程中，由于春雷霉素的保留時間如果太長，可能不利于實驗人員的快速分析檢測。

2實驗用具、條件

2.1使用的儀器以及試劑。CBM-10AT vp plus數(shù)據(jù)處理工作站、島津LC-10AT vp plus高效液相色譜儀、SPD-10A vp plus可變波長紫外檢測器。

2%春雷霉素水劑、重蒸二次蒸餾水、磷酸、十二烷基硫酸鈉、春雷霉素標樣、乙腈。

2.2色譜條件。色譜柱顯示為：250mmx4.6mm（i.d.）不銹鋼柱，內裝VP-ODS，粒徑5μm。檢測時的波長為215nm，柱溫顯示為室內的溫度，流動相：乙腈-1.0%SDS水溶液體積比20：80，磷酸調節(jié)PH值控制在2-3之間。流速控制在1.2mL/min，進樣量主要為5μL。研究人員在以上色譜條件下開展了試驗檢測工作，春雷霉素保留時間在14.5分鐘左右。

3測定步驟

3.1標準曲線溶液的配置情況。研究人員稱取春雷霉素標準品100毫克，需要確保稱取量的準確性，將稱取的春雷霉素放入25毫升的容量瓶中，用水進行稀釋，稀釋控制在相應范圍之內，然后使水與春雷霉素有效溶解成為質量濃度在4.0g/L的母液。研究人員利用重蒸二次蒸餾水對母液進行相應的稀釋，總共需要稀釋4次。

3.2回收率方面的測定情況。研究人員稱取標準品312.5毫克，在稱取標準品的過程中一定要保證精確，將其放入25毫升的容量瓶當中，加水溶解，將水與標準品稀釋到相應的刻度，搖勻，然后形成標準品溶液。研究人員稱取2%的春雷霉素水劑試樣，試樣總共分為4份，每份含量為25毫克，將其置入25毫升的容量瓶當中，每一份春雷霉素水劑試樣都需要加入標準品溶液，標準品溶液的加入量為4毫升，然后加水進行稀釋。

3.3標樣溶液的配制。研究人員稱取0.05克的春雷霉素標樣，將其放入25毫升的容量瓶中，用水進行稀釋，稀釋到相應的刻度，然后搖勻，使水與春雷霉素標樣有效溶解。

3.4試樣溶液的配置。研究人員稱取含有0.05克的春雷霉素試樣，將稱取的春雷霉素試樣放置在25毫升的容量瓶中，然后用水進行稀釋，確保稀釋達到相應的刻度，然后使兩者充分溶解。

3.5測定。研究人員在完成以上操作之后，確保儀器基線穩(wěn)定，方可注入數(shù)針標樣溶液，然后根據(jù)相應的計算方法計算出各針的相對響應值。如果相鄰兩針的相對響應值變化在1.5%以內，可以根據(jù)以下步驟開展進樣分析，第一步是標樣溶液，第二步是試樣溶液，第三步是試樣溶液，第四步是標樣溶液，根據(jù)這樣的順序進行測定。

4結果

4.1春雷霉素線性相關性的測定情況。研究人員以峰高或者是峰面積作為縱坐標，而橫坐標是進樣的質量濃度，然后可以得出兩條直線回歸式。研究人員通過計算得出質量濃度對峰面積的直線回歸式，然后算出相關系數(shù)r為1.0。這就表明春雷霉素的進樣量控制在相應的范圍之內，春雷霉素的進樣量與峰面積或峰高呈線性，各點大致保持在一條直線上。

4.2春雷霉素分析的準確度情況。研究人員控制春雷霉素標準品的添加量，添加量控制在25毫克，然后開展含量測定。通過本項研究可以得知，已知添加量與實測添加量較為接近，而回收率控制在98%-102%之間，這就證明本次研究方法十分可行。

4.3春雷霉素分析的精密度情況。下表中將給出三批2%春雷霉素水劑分析的精密度情況，對比三批樣品，每批樣品進行4次采樣，通過下表分析結果顯示，重復性相對較好，變異系數(shù)均在5%以內，2%春雷霉素水劑分析的要求可以滿足。

5討論

春雷霉素對家禽、人以及牲畜的毒性相對較低，是一種比較常用的農(nóng)用殺菌劑，對水稻上的稻瘟病有良好的治療作用。春雷霉素屬于一種由鏈霉菌產(chǎn)生的弱堿性抗菌素，對春雷霉素的高效液相色譜分析進行探究，有利于春雷霉素的有效應用。

本項研究中在儀器色譜工作站默認的條件下，峰面積的積分值有著較大的變化，通過研究得出的峰面積是在改變積分條件后獲得的數(shù)據(jù)，而峰高則較為穩(wěn)定，可直接利用色譜工作站默認的條件下獲得，所以在進行方法定量的過程中應該選用峰高。

在研究過程中，研究人員需要對各個環(huán)節(jié)進行控制，不僅需要控制研究的環(huán)境、研究過程中的取量以及稀釋量等，還需要保證研究過程中儀器的功能，從而保證本項試驗檢測結果的準確性。在這過程中，需要各位研究人員的團結協(xié)作，在研究的過程中將自身能力充分發(fā)揮，對研究中的問題進行詳細分析，在研究過程中確保研究標樣、試樣的取量，從而使整項研究的精準度得到保證。本項研究過程仍然有部分需要改善，希望通過本項研究給予相關人員提供一定的指導，使春雷霉素高效液相色譜分析得到進一步推進，從而為春雷霉素的使用奠定良好基礎。

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（作者單位：華北制藥華勝有限公司）