不同濃度OVA溶液對(duì)小鼠OVA致敏性支氣管哮喘模型的影響

楊素明 張帷政 周旸哲 肖圣舟 劉欣佳

摘要：目的使用滴鼻的激發(fā)方式選擇不同濃度卵清蛋白（OVA）對(duì)小鼠OVA致敏性支氣管哮喘模型的影響。方法雌性昆明小鼠24只隨機(jī)分為4組，分別為空白對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)A組（生理鹽水）、實(shí)驗(yàn)B組（50μg/mlOVA溶液）、實(shí)驗(yàn)C組（100μg/ml OVA溶液）;制備OVA致敏性支氣管哮喘模型;模型制備的第21天到第27天用滴鼻法讓實(shí)驗(yàn)組吸入不同的藥物，對(duì)照組正常喂養(yǎng)。第28天顯微觀察肺泡灌洗液，進(jìn)行炎癥細(xì)胞分類細(xì)胞計(jì)數(shù);制備肺組織病理切片，觀察支氣管的炎癥改變。結(jié)果小鼠哮喘激發(fā)后結(jié)果顯示，OVA溶液能夠激發(fā)OVA致敏性支氣管哮喘。炎癥細(xì)胞分類計(jì)數(shù)結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)B組及C組的嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞數(shù)目顯著高于對(duì)照組;實(shí)驗(yàn)B組各類炎癥細(xì)胞數(shù)目最高。切片結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組小鼠肺組織皆有炎癥細(xì)胞侵潤(rùn)，實(shí)驗(yàn)B組及C組有肺泡壁結(jié)構(gòu)損傷，且實(shí)驗(yàn)B組侵潤(rùn)及損傷最明顯。結(jié)論OVA溶液能夠激發(fā)OVA致敏性支氣管哮喘，劑量為50μg/ml時(shí)效果最佳。

關(guān)鍵詞：卵清蛋白;滴鼻;支氣管哮喘

支氣管哮喘（BA）簡(jiǎn)稱哮喘，是由嗜酸性粒細(xì)胞（LOS）、肥大細(xì)胞（MC）、中性粒細(xì)胞（N）、T淋巴細(xì)胞等多種炎性細(xì)胞及其細(xì)胞因子參與的，以氣道高反應(yīng)性等為主要特征的慢性氣道炎性反應(yīng)[1]。不同的激發(fā)方式和激發(fā)時(shí)間使建立小鼠哮喘模型的方法存在較大差異，本實(shí)驗(yàn)采用滴鼻法[2]，研討不同濃度的激發(fā)溶液對(duì)小鼠哮喘激發(fā)的差異，為研究支氣管哮喘動(dòng)物模型提供依據(jù)。

一、材料與方法

（一）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組

6～8周雌性昆明小鼠24只，中南大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，隨機(jī)均數(shù)分配為空白對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)A組（生理鹽水）、實(shí)驗(yàn)B組（50vg/ml0VA溶液）、實(shí)驗(yàn)C組（100wg/mlOVA溶液）。

（二）實(shí)驗(yàn)試劑及儀器

氫氧化鋁[Al（OH）]凝膠，OVA購自美國(guó)Sigma公司;日本OLYMPUS公司BX51T-32P01型顯微鏡，德國(guó)Slee公司MEV型號(hào)冰凍切片機(jī)。

（三）實(shí)驗(yàn)方法

1.模型的制備：小鼠分別于第0、7、14天腹腔注射含100μgOVA和0.1mlAI（OH）凝膠的混懸液0.2ml。

2.哮喘激發(fā)：在第21天到第27天使用乙醚瞬時(shí)麻醉小鼠，通過滴鼻法使不同組的小鼠自然吸入不同的溶液6天（1次/天），對(duì)照組正常喂養(yǎng)。

3.炎癥細(xì)胞分類計(jì)數(shù)使用乙醚瞬時(shí)麻醉小鼠，結(jié)扎全肺，用冷生理鹽水行支氣管肺泡灌洗，0.8ml/次，共3次，回收灌洗液，2000r/min離心5min，細(xì)胞沉淀用lml生理鹽水重懸，制備涂片，以蘇木精一伊紅（HE）染色，顯微鏡下進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)[2]。

4.HE染色組織切片：支氣管肺泡灌洗后，取小鼠全肺組織經(jīng)10%甲醛固定24h后，常規(guī)石蠟包埋切片HE染色，光鏡下觀察各組切片上支氣管的炎癥改變[2]。

5.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：所有數(shù)據(jù)用x±s表示，采用SPSS 22.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

二、結(jié)果

（一）哮喘激發(fā)后表現(xiàn)

激發(fā)5-6天后實(shí)驗(yàn)B組及C組出現(xiàn)尾巴紫紺、呼吸急促、抽搐、倒地并伴有明顯腹式呼吸行為，其中B組小鼠過敏反應(yīng)出現(xiàn)時(shí)間更早且程度更嚴(yán)重。

（二）炎癥細(xì)胞分類計(jì)數(shù)結(jié)果

實(shí)驗(yàn)B組及C組的嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞數(shù)目顯著高于對(duì)照組;實(shí)驗(yàn)B組炎癥粒細(xì)胞及嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)目最高。（見表一）

（三）肺組織病理切片結(jié)果：對(duì)照組小鼠肺組織結(jié)構(gòu)正常;實(shí)驗(yàn)組小鼠肺組織皆有炎癥細(xì)胞侵潤(rùn)，實(shí)驗(yàn)B組及C組有肺泡壁結(jié)構(gòu)損傷，且實(shí)驗(yàn)B組侵潤(rùn)及損傷最明顯。

三、討論

小鼠哮喘激發(fā)后表現(xiàn)結(jié)果表示，OVA溶液能夠激發(fā)OVA致敏性支氣管哮喘。炎癥細(xì)胞分類計(jì)數(shù)結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)B組及C組的嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞數(shù)目顯著高于對(duì)照組;實(shí)驗(yàn)B組炎癥粒細(xì)胞及嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)目最高。切片結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組小鼠肺組織皆有炎癥細(xì)胞侵潤(rùn)，實(shí)驗(yàn)B組及C組有肺泡壁結(jié)構(gòu)損傷，且實(shí)驗(yàn)B組侵潤(rùn)及損傷最明顯。

綜上所述，OVA溶液能夠激發(fā)OVA致敏性支氣管哮喘，劑量為50μg/ml時(shí)效果最佳。

參考文獻(xiàn)：

[1]尹靜波.炎性細(xì)胞因子在支氣管哮喘發(fā)病機(jī)制中的作用[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2011（10）：1087-1089.

[2]程勝，陳輝龍，王正云，王愛利，謝敏，曹勇，謝俊剛，熊維寧，徐永健.滴鼻和霧化兩種不同激發(fā)方式對(duì)小鼠支氣管哮喘模型氣道炎癥的影響[J].華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2014，43（02）：121-124.

基金項(xiàng)目：長(zhǎng)沙醫(yī)學(xué)院2017年大學(xué)生研究學(xué)習(xí)和創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)計(jì)劃項(xiàng)目：長(zhǎng)醫(yī)教[2017]18號(hào)-315。