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    初步探究六味地黃丸對小鼠焦慮行為的影響

    2019-09-10 03:52:13賓有富李佳恒劉苑犇韋武濤黃群梁明坤鐘靜
    健康前沿 2019年2期
    關(guān)鍵詞:焦慮小鼠

    賓有富 李佳恒 劉苑犇 韋武濤 黃群 梁明坤 鐘靜

    摘要:目的:初步探究六味地黃丸對小鼠焦慮行為的影響。方法:將小鼠隨機分為6組,采用不可預(yù)知情緒應(yīng)激法連續(xù)造模7日后,使用不同手段進行為期7日的干預(yù)治療;采用高架十字迷宮實驗測試小鼠焦慮行為變化以及六味地黃丸的作用影響。結(jié)果:造模后,與空白組比較,焦慮模型組OE%、OT%、探頭次數(shù)、探頭總時間減少,提示焦慮造模成功;末次給藥后,與末次給藥前比較,陽性對照組、六味地黃丸高、中、低劑量四組的OE%、OT%、探頭總時間、探頭次數(shù)增加(P<0.05)。結(jié)論:六味地黃丸具有改善小鼠焦慮行為作用。

    關(guān)鍵詞:六味地黃丸 小鼠 焦慮 行為改變

    焦慮性神經(jīng)癥(Anxiety Neurosis)簡稱焦慮癥,現(xiàn)代醫(yī)學(xué)將其分為廣泛性焦慮和急性焦慮,主要表現(xiàn)為莫名緊張或驚恐等神經(jīng)障礙[1]。孫秀麗等[2]的研究報告表明,河北4個地區(qū)廣泛性焦慮的城市患病率為4.87‰,農(nóng)村患病率為8.10‰;女性患病率10.42‰,高于男性4.97‰,男女比例為1:2.1;焦慮癥是臨床上的常見病,它已經(jīng)嚴重的影響了患者的生活質(zhì)量?,F(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療焦慮多以藥物為主,治療效果各有差異。中醫(yī)古代文獻未詳細記載有焦慮癥的病名,但綜合古代醫(yī)家描述,焦慮癥中醫(yī)癥屬情志病范疇,病人時常表現(xiàn)擔憂,緊張或恐懼等癥狀[2],腎陰虛虧為主要病機,故中醫(yī)使用六味地黃丸補腎滋陰以安神定志,緩解焦慮癥狀的發(fā)生。六味地黃丸主要記載于宋代醫(yī)學(xué)家錢乙的《小兒藥證直訣》,是補髓滋腎的經(jīng)典方。后由漢代醫(yī)學(xué)家張仲景在《金匱要略》提出,減去桂枝、附子等偏于補陽的藥物,替換干地黃為熟地黃而成[3]。本實驗主要是初步探究六味地黃丸對腎虧陰虛型小鼠焦慮行為的影響,為臨床用藥提供依據(jù)。

    1 實驗材料

    1.1實驗動物 雄性昆明種小鼠36只,SPF 級,周齡8-12周歲,體質(zhì)量(28.43 ±1.94g)。購自湖南斯萊克景達實驗動物有限公司,許可證號:SCXK(湘)2016-0002。

    1.2 實驗制劑 六味地黃丸(農(nóng)本方顆粒),制造商為培力香港集團附屬培力(南寧)藥業(yè)有限公司。藥物組成:熟地黃、山萸肉、干山藥、澤瀉、牡丹皮、茯苓。在進行首次給藥前,用蒸餾水作為溶劑配置成相應(yīng)濃度,配置好后放入4℃冰箱進行保存。地西泮片1.5 mg/片,購置于濟寧市安康制藥有限責(zé)任有限公司;蒸餾水,購置于東莞市納百川水處理設(shè)備有限公司。

    1.3 實驗器材 高架十字迷宮裝置(the elevated plus-maze,EPM),購置于南寧市辰澤實驗科技有限公司。主要組成:兩個相對的開放臂(open arm,內(nèi)徑:長×寬×高):30cm × 5cm × 15cm;兩個相對的封閉臂(enclosedarm,內(nèi)徑:長×寬×高):30cm × 5cm × 0.5cm;迷宮中心是一個由開放臂和封閉臂交匯而成正方形平臺(centre platform,內(nèi)徑,長×寬):5cm × 5cm。兩個封閉臂的頂部呈敞開狀態(tài),四個實驗臂的內(nèi)側(cè)壁為黑色背景,整個裝置放于鐵質(zhì)的十字支架上,使高架十字迷宮整體的下緣平面距離地面50cm。

    2 實驗方法

    2.1實驗分組

    36只小鼠常規(guī)喂養(yǎng)7d適應(yīng)環(huán)境后,按照隨機分組的原則將小鼠分成6組,每組6只,分別為空白對照組,焦慮模型對照組,陽性地西泮對照組,六味地黃丸高劑量組、六味地黃丸中劑量組、六味地黃丸低劑量組。實驗前,各組別小鼠體質(zhì)量、小鼠肛溫、OE%、OT%、探頭次數(shù)、探頭總時間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P > 0.05),具有可比性。

    2.2 實驗造模和給藥

    本實驗的造模方式參照焦慮造模的相關(guān)文獻[4-7],并作相應(yīng)改變。主要采用不可預(yù)知的情緒應(yīng)激法來進行為期7d的焦慮造模[8]。主要包括噪音應(yīng)激實驗、禁水、禁食、24h光照、24h黑暗、潮濕墊料(質(zhì)量比:墊料:水=1:2)、傾斜等7種應(yīng)激刺激。每天隨機采取一種刺激,連續(xù)7日。造模結(jié)束后,對各組別小鼠進行不同手段的治療措施干預(yù),治療期間,小鼠正常喂食飼養(yǎng)。按照等效量換算法計算。把成年人每日需要的生藥量折算為小鼠所需生藥量。方法如下,成人每日用量為63g,小鼠所需生藥量為63*0.018*5=5.7g/Kg(0.018是根據(jù)中藥藥理學(xué)實驗方法中人與小鼠體表面積的轉(zhuǎn)換系數(shù),于是將30g小鼠所需生藥量換算成Kg后,即小鼠所需的生藥量)。治療期間,空白對照組、焦慮模型組給予蒸餾水(20ml·kg-1·d-1)進行治療干預(yù),六味地黃丸按高(1.35g·kg-1·d-1)、中(0.45g·kg-1·d-1)、低(0.15g·kg-1·d-1)三個劑量進行治療干預(yù),陽性地西泮對照組給予地西泮溶液(0.0003g·kg-1·d-1)進行治療干預(yù),每天1次,于治療期每天上午8:30進行,持續(xù)7日,實驗的總時間長為14日。

    2.3 評定的指標與方法

    本實驗采用高架十字迷宮測試來測定小鼠的行為變化。主要測試時間為造模前(第1天),首次給藥前(第8天),末次給藥后次日(第15天)的8∶00~12∶00AM,測試實驗在安靜環(huán)境中進行。測試前先將小鼠置于開場中活動5 min,然后把小鼠放在迷宮的中間,并把它的頭部朝向開放臂。用迷宮上方的攝像頭錄制小鼠在迷宮內(nèi)的活動情況,錄制時間為5 min。每只小鼠放置迷宮測試行為前,需用配置好的84消毒液與75%酒精進行擦拭與清潔,消除前1只小鼠的留下的氣味和排泄物。計算好小鼠開放臂進入次數(shù)百分比(OE%)即開放臂進入次數(shù)/(開放臂進入次數(shù) + 封閉臂進入次數(shù))和開放臂停留時間百分比(OT%)即開放臂停留時間/(開放臂停留時間 + 封閉臂停留時間)[9],比值大則較少出現(xiàn)焦慮行為,其中出現(xiàn)探頭次數(shù)也可以理解為小鼠有探索欲望,探頭次數(shù)或探頭總時間增多也可認為焦慮行為有改善。體質(zhì)量變化=實驗后-實驗前;體溫(肛溫)=實驗后-實驗前。

    2.4統(tǒng)計學(xué)方法

    所有實驗數(shù)據(jù)運用Microsoft Excel及SPSS20.0forWindows軟件進行處理,結(jié)果以平均數(shù)x±s表示,數(shù)據(jù)進行組間單因素方差分析。P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。

    3.實驗結(jié)果

    造模結(jié)束后,與造模前相比,除空白組外,焦慮模型組等五個組別的小鼠OE%及OT%顯著減少,探頭總時間及探頭次數(shù)也顯著減少(P<0.05),提示小鼠已經(jīng)進入了焦慮的狀態(tài)。給藥結(jié)束后,與模型組相比,六味地黃丸高、中、低劑量組別的OE%、OT%、探頭總時間、探頭次數(shù)顯著增加(P<0.05),與陽性對照組相近,表示對小鼠焦慮行為有改善作用。實驗結(jié)束后,小鼠的體重,肛溫均值總體增加。如圖1,圖2,圖3所示。

    4.討論

    造模結(jié)束后,除空白組外,其余造模的五個組別的小鼠進入開放臂次數(shù)和探頭次數(shù)明顯減少,說明隨機使用傾斜、噪音、黑暗24h、光照24h、無墊料、禁水、禁食等方法焦慮造模成功。與焦慮模型組比較,陽性地西泮對照組能顯著增加小鼠探頭總時間和探頭次數(shù)(P﹤0.05),表現(xiàn)出有抗焦慮作用。實驗表明,六味地黃丸對小鼠的焦慮行為有一定的改善作用,但具體的生理機制還需要進一步的探究。六味地黃丸以熟地黃為君藥,熟地黃入肝腎經(jīng),具有滋補陰血,益精填髓的功效;山茱萸澀精固脫,山藥并補腎脾[10]。茯苓、澤瀉、牡丹皮合為“三瀉”,平秘而補脾胃。六藥合用,使六味地黃丸具有填精益髓,滋養(yǎng)肝腎的功效。但六味地黃丸的作用不僅僅局限于此,它的使用范圍可進一步的擴大。本次實驗只是初步探究了六位地黃丸對焦慮行為的影響作用,其主要的作用機制還需進一步的探究,因此,深入研究六味地黃丸對小鼠焦慮行為的作用機制及將它應(yīng)用于臨床,對進一步發(fā)展中醫(yī)藥的事業(yè)有巨大的意義。

    參考文獻:

    [1]張心保主編 .神經(jīng)精神病學(xué) .北京:科學(xué)技術(shù)出版社,1980:87.

    [2]孫秀麗,栗克清,崔利軍,等.河北省 4 個地區(qū)廣泛焦慮癥的流行病學(xué)調(diào)查[J].中國組織工程研究與臨床康復(fù),2007,11(39):7842-7844.

    [3]崔瑛,馮靜,王世宏,申秀麗. 焦慮癥的中醫(yī)用藥及組方規(guī)律探討[J]. 中國臨床康復(fù),2004(18):3630-3631.

    [4]王萍,王喜軍.六味地黃丸研究現(xiàn)狀[J].中醫(yī)藥信息,2013,30(3):163 -165.

    [5]周奇志,趙紀嵐,蔡定鈞,等.電針對慢性情緒應(yīng)激焦慮大鼠中樞單胺遞質(zhì)與γ-氨基丁酸失平衡的調(diào)節(jié)作用[J].中華中醫(yī)藥雜志,2008,23(10):926.

    [6]徐海洋,周奇志,王薇,等.電針對慢性情緒應(yīng)激焦慮模型大鼠行為學(xué)影響的研究[J].四川中醫(yī),2007,25.

    [7]孫君輝,凌沛學(xué),蔣秋燕,等.焦慮大鼠模型的應(yīng)用及研究進展[J].食品與藥品,2011,13(11):438.

    [8]周寧娜,何曉山,曹東,等.解慮安神湯對社會隔離焦慮小鼠行為學(xué)及腦內(nèi)ALLO水平的影響[J].中國實驗方劑學(xué)雜志,2011,17(13):185.

    [9]閆清偉,田青. 3種干預(yù)方法對焦慮大鼠高架十字迷宮行為的影響[J]. 中國實驗方劑學(xué)雜志,2013,19(19):225-228.

    [10]王萍,王喜軍. 六味地黃丸研究現(xiàn)狀[J]. 中醫(yī)藥信息,2013,30(03):163-165.

    作者簡介:

    賓有富:生于1997年7月28日,漢族,男,廣西博白人,臨床醫(yī)學(xué)方向

    李佳恒:生于1997年9月11日,壯族,男,廣西武鳴人,臨床醫(yī)學(xué)方向

    劉苑犇,生于1998年1月1日,漢族,男,陜西咸陽人,臨床醫(yī)學(xué)方向

    韋武濤,生于1995年2月23日,漢族,男,廣西來賓人,臨床醫(yī)學(xué)方向

    黃群,生于1995年2月15日,壯族,女,廣西那坡人,中醫(yī)學(xué)方向

    梁明坤,生于1983年11月2日,漢族,男,廣西桂平人,廣西中醫(yī)藥大學(xué)附屬瑞康醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科

    通訊作者:鐘靜,生于1983年12月12日,漢族,女,廣西陸川人,廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院博士后,廣西中醫(yī)藥大學(xué)講師,博士學(xué)位,主要從事神經(jīng)精神疾患的研究工作,zhongjing1212@163.com

    基金項目:本文系廣西中醫(yī)藥大學(xué)2017年大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計劃項目,項目編號:J17143008

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