• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    高氨基酸和高茶氨酸茶樹資源篩選

    2019-08-27 06:57:04方開星姜曉輝秦丹丹李紅建黃華林潘晨東吳華玲
    核農(nóng)學(xué)報(bào) 2019年9期
    關(guān)鍵詞:氨酸茶樹種質(zhì)

    方開星 姜曉輝 秦丹丹 李紅建 黃華林 潘晨東 李 波 吳華玲

    (廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所/廣東省茶樹資源創(chuàng)新利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣東 廣州 510640)

    氨基酸是茶樹中一類重要的化學(xué)物質(zhì)。 茶樹中存在28 種氨基酸,且一般以茶樹的特征性組分茶氨酸含量最多,約占游離氨基酸的30%~70%[1]。 氨基酸總量對(duì)茶葉的滋味、香氣、湯色、葉底等具有影響[2-4],與茶葉品質(zhì)呈顯著正相關(guān)[5]。 此外,大量研究表明,茶氨酸具有鎮(zhèn)靜、安神、保護(hù)神經(jīng)、降血壓、降血脂、抗腫瘤、肝保護(hù)、增強(qiáng)免疫等功能[6-11]。 因此,高氨基酸和高茶氨酸茶樹新品種選育是茶樹遺傳改良的重要方向。

    一般認(rèn)為茶樹一芽二葉氨基酸總量大于5%為高氨基酸資源[12],茶氨酸含量大于3%為高茶氨酸資源[13]。 近年來,諸多研究者以高氨基酸和高茶氨酸含量為參考指標(biāo)對(duì)國(guó)內(nèi)茶葉資源進(jìn)行了廣泛篩選,獲得了一大批高氨基酸茶樹種質(zhì)。 如趙洋等[14]對(duì)湖南湘西保靖縣葫蘆鎮(zhèn)黃金村的一個(gè)高氨基酸茶樹群體共76 份資源進(jìn)行氨基酸含量測(cè)定,獲得36 份高氨基酸茶樹資源,1 份高茶氨酸茶樹資源,并選育了黃金茶1號(hào)、黃金茶2 號(hào)和黃金茶168 號(hào)這3 個(gè)高氨基酸茶樹新品種。 金孝芳等[15]對(duì)湖北的茶樹資源進(jìn)行篩選獲得了E1 和20-2-1 這2 個(gè)高氨基酸茶樹資源。 此外,一些黃化和白化變異品種具有高氨基酸特性,根據(jù)其受環(huán)境影響又可分為光照敏感突變型茶樹(如黃金芽、白雞冠和中黃1 號(hào)等)和溫度敏感突變型茶樹(如安吉白茶)[16-17]。 由于高氨基酸茶樹資源在不同地理環(huán)境條件下含量存在差異且大部分具有高氨基酸,因此在華南地區(qū)篩選綜合性狀優(yōu)良的高氨基酸茶樹資源具有重要意義。

    廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所茶樹資源與育種團(tuán)隊(duì)一直致力于茶樹種質(zhì)資源收集、保存、鑒評(píng)與新品種選育研究,建有“廣東省茶樹種質(zhì)資源庫(kù)”,現(xiàn)保存國(guó)內(nèi)外茶樹種質(zhì)資源共1 800 余份,涵蓋大葉、中葉、小葉、喬木、小喬木、灌木等多種類型。 為充分利用這些資源,從中篩選出高氨基酸和高茶氨酸茶樹種質(zhì),本研究對(duì)收集保存的218 份茶樹核心材料的氨基酸含量和茶氨酸含量進(jìn)行測(cè)定,以期為優(yōu)良高氨基酸和高茶氨酸茶樹新品種選育及其形成機(jī)理研究提供一定的理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料

    以保存于廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所廣東省茶樹資源庫(kù)的218 份茶樹資源[包括茶及其變種(阿薩姆變種、白毛茶變種和毛葉茶變種)]為研究對(duì)象。

    1.2 氨基酸標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

    準(zhǔn)確稱量0.2 g 谷氨酸粉末,溶解于70 mL 水中,并在100 mL 容量瓶中定容,配置成2 mg·mL-1的谷氨酸母液。 用移液管分別吸取0.25、0.375、0.5、0.625、0.75、1、1.25、2.5、3.75 mL 的母液于5 mL 容量瓶中,定容配置成濃度分別為0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.40、0.50、1.00、1.50 mg·mL-1的工作液。

    谷氨酸溶液經(jīng)0.22 μm 濾膜抽濾后,分別取0.5 mL pH 值8.0 的磷酸緩沖液及0.5 mL 2%茚三酮溶液于10 mL 的離心管中混勻,然后置于100℃水浴鍋中加熱15 min,期間每隔3 min 混勻一次。 加熱結(jié)束后取出,在室溫下冷卻。 定容至10 mL 后,取250 μL 于96 孔酶標(biāo)板上,并檢測(cè)吸光度值。 通過吸光度值推算氨基酸含量。 每個(gè)樣品設(shè)4 次重復(fù)。

    1.3 茶氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

    準(zhǔn)確稱量茶氨酸0.2 g 溶解于80 mL 水中,并用容量瓶定容到100 mL,配置成2 mg·mL-1的母液,分別取0.025、0.050、0.075、0.100、0.125、0.150、0.200、0.250、0.500、0.750 mL,用水稀釋定容至100 mL,制備成0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.40、0.50、1.00、1.50 mg·mL-1的工作液。

    茶氨酸檢測(cè)之前根據(jù)安捷倫公司氨基酸衍生試劑包中提供的方法進(jìn)行鄰苯二甲醛(o-phthalaldehyde,OPA)柱前衍生。 流動(dòng)相A 為40 mmol·L-1Na2HPO4(pH 值8.0);流動(dòng)相B 為乙睛∶甲醇∶水(45 ∶45 ∶10,v ∶v ∶v)的混合物。 流速為2 mL·min-1,檢測(cè)波長(zhǎng)為338 nm。 梯度洗脫程序詳見表1。

    表1 梯度洗脫程序Table1 Program of gradient elution

    1.4 樣品制備

    春季采集218 份茶樹種質(zhì)資源新梢一芽二葉,采用蒸氣殺青、烘箱干燥固樣,并用YM203 磨碎機(jī)(奧克斯,中國(guó))進(jìn)行研磨,過0.1 mm 孔徑篩,備用。 準(zhǔn)確稱量0.1 g 樣品于10 mL 玻璃離心管中,用移液管加入10 mL 100℃的超純水并密封。 混勻后置于100℃水浴鍋中加熱45 min,每隔10 min 混勻一次。 每個(gè)樣品設(shè)3 次生物學(xué)重復(fù)。 冷卻后用5417R 離心機(jī)(Eppendorf,德國(guó))低速離心后抽濾。 參照1.2 和1.3 進(jìn)行樣品氨基酸和茶氨酸含量的測(cè)定。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 218 份茶樹資源一芽二葉氨基酸含量測(cè)定

    將10 個(gè)不同梯度濃度的谷氨酸經(jīng)顯色反應(yīng)后冷卻,定容,取250 μL 于96 孔板中。 利用酶標(biāo)儀測(cè)定吸光值,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,標(biāo)準(zhǔn)曲線公式為y=0.601 8x+0.149 2,其中x為氨基酸濃度,y為吸光度值(圖1)。通過推算,氨基酸干物質(zhì)含量=(OD 值×10-1.492)/0.6018×100%。 將218 份種質(zhì)資源的樣品與茚三酮溶液反應(yīng)后,加入到96 孔板中,每列2 個(gè)樣品,每個(gè)樣品4 個(gè)重復(fù),不同樣品在96 孔板中顯色存在差異,表明不同資源的氨基酸含量不同,顏色越深氨基酸含量越高(圖2,因種質(zhì)樣品較多,故僅隨機(jī)選取的23 份種質(zhì)樣品顯色示意圖)。 利用酶標(biāo)儀對(duì)96 孔板進(jìn)行吸光度測(cè)定,結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行換算,獲得不同茶樹種質(zhì)氨基酸含量(表2)。 結(jié)果表明,218 份資源一芽二葉氨基酸含量介于1.50%~8.98%之間,呈正態(tài)分布(圖3),其中氨基酸含量介于3.00%~5.00%之間的樣品有118 個(gè),占樣品數(shù)的54.1%,氨基酸含量介于2.00%~6.00%的樣品有191 個(gè),占樣品數(shù)的87.6%。 氨基酸總量≥5.00%的高氨基酸茶樹資源有55 個(gè),占總量的25.2%,其中含量分布介于5%~6%的資源有37個(gè),占總樣品數(shù)的17.0%;含量分布介于6%~7%的資源有14 個(gè),占總樣品數(shù)的6.4%;含量>7%的資源有4個(gè),占總樣品數(shù)的1.8%,含量介于7%~8%的資源有1個(gè),含量介于8%~9%的資源3 個(gè)(表2)。

    圖1 氨基酸標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 Standard curve of amino acid

    表2 218份茶樹種質(zhì)氨基酸和茶氨酸含量Tbale 2 Content of amino acid and theanine in 218 tea germplasms

    表2 (續(xù))

    表2 (續(xù))

    表2 (續(xù))

    表2 (續(xù))

    圖2 氨基酸顯色反應(yīng)Fig.2 Chromogenic reaction of amino acid

    2.2 218 份茶樹資源一芽二葉茶氨酸含量分析

    利用高效液相色譜儀對(duì)不同濃度的茶氨酸工作液進(jìn)行檢測(cè)(圖4),根據(jù)檢測(cè)結(jié)果繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 通過換算可得茶樹茶氨酸含量=峰面積/52.36×100%。 同時(shí),對(duì)218 份茶樹資源一芽二葉茶氨酸含量進(jìn)行測(cè)定,檢測(cè)結(jié)果表明,218 份茶樹樣品的茶氨酸介于0%~4.03%之間(表2),呈正態(tài)分布(圖5)。 茶氨酸含量主要分布于1%~2%之間,呈中等水平,該區(qū)間樣品數(shù)共111 個(gè),占總樣品數(shù)的50.9%,茶氨酸≥3%的樣品有13 個(gè),占樣品總數(shù)6.0%,分別為凌云11 號(hào)(3.83%)、凌云6 號(hào)(4.03%)、短節(jié)白毫(4.01%)、廣寧大葉青心4 號(hào)(3.88%)、云南大葉(3.64%)、凌云10 號(hào)(3.44%)、云魂(3.38%)、鳳慶1 號(hào)(3.37%)、肯尼亞12 號(hào)(3.37%)、凌云18 號(hào)(3.16%)、黃奇(3.12%)、惠陽小葉1號(hào)(3.04%)和凌云4號(hào)(3.02%)。 此外,MY355、D4、D29 和B22 這4 份毛葉茶資源無茶氨酸,占樣品總數(shù)的1.8%(表2)。

    圖3 218 份茶樹資源氨基酸含量正態(tài)分布圖Fig.3 Normal distribution of amino acid contents of 218 tea germplasms

    2.3 218 份茶樹資源一芽二葉茶氨酸/氨基酸含量的比值

    對(duì)218 份茶樹資源一芽二葉茶氨酸與氨基酸含量的比值進(jìn)行分析,結(jié)果表明,茶氨酸與氨基酸含量的比值在0~0.78 之間(表2),呈正態(tài)分布(圖6)。 茶氨酸與氨基酸含量的比值主要分布于0.2 ~0.5 之間,該區(qū)間樣品數(shù)155 個(gè),占總樣品數(shù)的71.1%。 茶氨酸與氨基酸含量的比值>0.6 的樣品有10 個(gè),占樣品總數(shù)的4.6%,分別為廣寧大葉青心4 號(hào)(0.78)、惠陽小葉2號(hào)(0.78)、新選2 號(hào)(0.77)、凌云16 號(hào)(0.73)、凌云10 號(hào)(0.73)、紅葉22 號(hào)(0.64)、優(yōu)選10 號(hào)(0.62)、紅葉4 號(hào)(0.61)、丹霞1 號(hào)(0.61) 和新選11 號(hào)(0.61)。 對(duì)218 個(gè)樣品的氨基酸和茶氨酸含量進(jìn)行相關(guān)性分析,發(fā)現(xiàn)茶葉中的茶氨酸與氨基酸含量相關(guān)性系數(shù)達(dá)0.752,R2為0.564,呈極顯著正相關(guān)。

    圖4 高效液相色譜法測(cè)定茶葉中茶氨酸含量Fig.4 Theanine contents of tea germplasms determinated by HPLC

    圖5 218 份資源茶氨酸含量正態(tài)分布圖Fig.5 Normal distribution of theanine contents of 218 tea germplasms

    圖6 218 份茶樹資源茶氨酸與氨基酸含量比值的正態(tài)分布圖Fig.6 Normal distribution of ratio value of theanine content to amino acid content of 218 tea germplasms

    3 討論

    氨基酸含量是影響茶樹品種成茶品質(zhì)的重要參考因子,氨基酸尤其是茶氨酸與綠茶品質(zhì)呈顯著正相關(guān)[18-19]。 高氨基酸和高茶氨酸茶樹資源在自然界分布較少,從中選育獲得綜合性狀好的品種更少,安吉白茶是目前報(bào)道最多、應(yīng)用范圍最廣的高氨基酸茶樹品種,由于其鮮爽甘醇的優(yōu)異品質(zhì),其推廣應(yīng)用極大帶動(dòng)了茶葉產(chǎn)業(yè)的發(fā)展,取得了較好的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益[20]。 但由于氨基酸和茶氨酸含量是由多基因控制的數(shù)量性狀,受光照、溫度及土壤養(yǎng)分等環(huán)境影響較大,同一品種在不同地方其含量存在差異[21-22]。 廣東地處熱帶與亞熱帶交融區(qū),溫度相對(duì)較高,低于19℃的時(shí)間短,不利于溫度敏感型的安吉白茶形成高氨基酸特性[23],因此安吉白茶不適合在以廣東為代表的華南地區(qū)種植。 為選育適合廣東乃至華南茶區(qū)種植的高茶氨酸茶樹品種,本研究通過對(duì)保存于廣東省茶樹種質(zhì)資源庫(kù)的218 份核心種質(zhì)進(jìn)行氨基酸及茶氨酸檢測(cè),共獲得了55 份高氨基酸茶樹資源和13 份高茶氨酸資源。

    游離氨基酸是一種含氮化學(xué)物質(zhì)[24-25],國(guó)標(biāo)法利用茚三酮顯色結(jié)合分光光度計(jì)法對(duì)樣品氨基酸含量進(jìn)行測(cè)定[26],測(cè)定樣品用量較大(蒸青樣3 g)。 當(dāng)分析的茶樹種質(zhì)資源數(shù)量較多時(shí),利用國(guó)標(biāo)法進(jìn)行氨基酸測(cè)定非常耗時(shí),且某些稀有種質(zhì)由于可用于分析的樣品有限,而無法進(jìn)行氨基酸檢測(cè)。 而本研究創(chuàng)新開發(fā)的基于茚三酮顯色結(jié)合酶標(biāo)儀的微量法可以快速對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè)[27]。 檢測(cè)結(jié)果顯示茶氨酸與氨基酸含量的比值介于0~0.78 之間,且主要分布于0.2 ~0.5 之間,這與前人研究發(fā)現(xiàn)茶葉中茶氨酸含量約占游離總氨基酸的30%~70%存在差別[28],其原因可能是本研究采用茚三酮顯色法測(cè)定總游離氨基酸含量值偏大的緣故。 相關(guān)性研究表明,茶氨酸與氨基酸含量的相關(guān)系數(shù)為0.752,呈極顯著正相關(guān),因此在大規(guī)模的資源篩選時(shí),可先根據(jù)各資源已知的氨基酸總量推測(cè)其茶氨酸大概的含量,縮小資源篩選范圍,再采用液相色譜進(jìn)行茶氨酸精確測(cè)定,快速定向選育出高茶氨酸種質(zhì)。

    茶葉中游離氨基酸多達(dá)28 種[29],其共同決定了茶葉中總氨基酸含量。 不同的茶樹種質(zhì)體內(nèi)的氨基酸的種類及含量存在較大差異。 如尹杰等[30]對(duì)貴州名茶的氨基酸組成及含量進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn),貴州各種名茶除茶氨酸外還存在其他含量突出的氨基酸,如都勻毛尖的酪氨酸、丙氨酸、谷氨酸含量較高;遵義毛峰的苯丙氨酸、胱氨酸含量高;湄江翠片的谷氨酸;山京翠芽的賴氨酸和羊艾毛峰的天冬氨酸含量較高。 上述結(jié)果表明,不同品種氨基酸種類和含量的差異影響了氨基酸的總量,同時(shí)也造成了茶葉香氣和滋味的不同。 對(duì)于本研究篩選出高茶氨酸茶樹種質(zhì),今后將有必要進(jìn)一步跟蹤測(cè)定各氨基酸組分含量。

    作為茶葉中最重要的氨基酸,茶氨酸是茶葉次生代謝物的重點(diǎn)研究對(duì)象[31]。 茶氨酸的代謝通路基本已經(jīng)探明[32-35],但是有關(guān)茶樹形成高茶氨酸的調(diào)控機(jī)制的研究尚鮮見報(bào)道。 目前已報(bào)道的主要是以低溫敏感型和光照敏感型資源為材料通過多組學(xué)技術(shù)手段,對(duì)其高茶氨酸形成的機(jī)制進(jìn)行解析[36-37]。 正常的茶樹品種受溫度和光照的影響較低溫敏感型和光照敏感型資源小,可能從其他途徑調(diào)控高茶氨酸的形成[38]。本研究篩選了多份高茶氨酸及低茶氨酸茶樹資源,為茶樹高茶氨酸形成的調(diào)控機(jī)理研究提供了豐富的材料。 隨著茶樹基因的公布[39-40],可充分利用茶氨酸特異資源開展數(shù)量性狀位點(diǎn)(quantitative trait locus,QTL)定位、關(guān)聯(lián)分析及多組學(xué)技術(shù)獲得與其相關(guān)的分子標(biāo)記、基因、蛋白及特征代謝物,解析其高含量形成的機(jī)理。

    4 結(jié)論

    本研究對(duì)218 份茶樹資源春季一芽二葉氨基酸及茶氨酸含量進(jìn)行測(cè)定,篩選獲得了55 份高氨基酸茶樹資源,13 份高茶氨酸茶樹資源和4 份無茶氨酸茶樹資源。 本研究為高氨基酸總量及高茶氨酸含量茶樹新品種選育、茶氨酸合成機(jī)理研究提供了材料基礎(chǔ)。

    猜你喜歡
    氨酸茶樹種質(zhì)
    華南地區(qū)最大農(nóng)作物種質(zhì)資源保護(hù)庫(kù)建成
    蒜氨酸抗菌機(jī)制研究
    山茶樹變身?yè)u錢樹
    亞麻抗白粉病種質(zhì)資源的鑒定與篩選
    高羊毛氨酸硒提高豬肌肉中硒沉積
    廣東飼料(2016年7期)2016-12-01 03:43:36
    兩個(gè)推薦茶樹品種
    貴州玉米種質(zhì)資源遺傳多樣性及核心種質(zhì)庫(kù)構(gòu)建
    紅錐種質(zhì)早期生長(zhǎng)表現(xiàn)
    茶樹灣
    蒜氨酸的分離純化研究進(jìn)展
    国产精品国产三级国产专区5o| 国产精品一区二区在线观看99| 蜜桃在线观看..| 美女中出高潮动态图| 中国美白少妇内射xxxbb| 亚洲性久久影院| 人妻 亚洲 视频| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 日韩欧美精品免费久久| 成人漫画全彩无遮挡| 精品一区二区免费观看| 黑丝袜美女国产一区| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 另类精品久久| 热99国产精品久久久久久7| 青春草亚洲视频在线观看| 一区在线观看完整版| 高清黄色对白视频在线免费看| 精品少妇黑人巨大在线播放| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 久热久热在线精品观看| 少妇人妻精品综合一区二区| 丰满迷人的少妇在线观看| 观看美女的网站| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 交换朋友夫妻互换小说| 宅男免费午夜| 黄色 视频免费看| 女性被躁到高潮视频| 卡戴珊不雅视频在线播放| 国产成人精品婷婷| 成人黄色视频免费在线看| 亚洲人成网站在线观看播放| 婷婷色av中文字幕| 一本大道久久a久久精品| 97在线视频观看| 日本vs欧美在线观看视频| 成人毛片a级毛片在线播放| 国产伦理片在线播放av一区| 国产爽快片一区二区三区| 亚洲人与动物交配视频| av卡一久久| 久久久久久伊人网av| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| av.在线天堂| www.av在线官网国产| 亚洲国产看品久久| 纯流量卡能插随身wifi吗| 一级黄片播放器| 日本爱情动作片www.在线观看| √禁漫天堂资源中文www| 国产一区亚洲一区在线观看| 人人妻人人澡人人看| freevideosex欧美| 制服丝袜香蕉在线| 男女边摸边吃奶| 国产有黄有色有爽视频| 亚洲欧美成人精品一区二区| h视频一区二区三区| 国产成人一区二区在线| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 在线免费观看不下载黄p国产| 一本大道久久a久久精品| 精品少妇内射三级| 天堂8中文在线网| √禁漫天堂资源中文www| 五月玫瑰六月丁香| 欧美最新免费一区二区三区| 韩国精品一区二区三区 | 亚洲国产色片| 亚洲欧美清纯卡通| 在线观看免费高清a一片| 日本av手机在线免费观看| 一级a做视频免费观看| 搡女人真爽免费视频火全软件| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 久久av网站| 97超碰精品成人国产| 在线观看人妻少妇| 精品视频人人做人人爽| 精品亚洲成国产av| 国产成人欧美| 国产精品嫩草影院av在线观看| 日日爽夜夜爽网站| 最近中文字幕高清免费大全6| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 欧美bdsm另类| 五月伊人婷婷丁香| 国产成人免费观看mmmm| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 精品卡一卡二卡四卡免费| 午夜91福利影院| 国精品久久久久久国模美| 9色porny在线观看| 一级毛片电影观看| 亚洲精品乱久久久久久| 亚洲国产av新网站| 免费观看a级毛片全部| 亚洲精品自拍成人| 成人毛片a级毛片在线播放| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 精品亚洲成a人片在线观看| 飞空精品影院首页| 欧美成人午夜精品| 亚洲人与动物交配视频| 亚洲av免费高清在线观看| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 国产精品女同一区二区软件| 国产精品欧美亚洲77777| 亚洲国产欧美在线一区| 国产成人免费观看mmmm| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕 | 久久这里只有精品19| 日本午夜av视频| 91aial.com中文字幕在线观看| 免费高清在线观看视频在线观看| 国产福利在线免费观看视频| 永久网站在线| 精品熟女少妇av免费看| 欧美日韩综合久久久久久| 国产男女超爽视频在线观看| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 久久久久久久久久久免费av| 亚洲国产日韩一区二区| 亚洲,欧美,日韩| 国产成人一区二区在线| 高清视频免费观看一区二区| 赤兔流量卡办理| 国产精品国产av在线观看| 午夜免费观看性视频| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 性高湖久久久久久久久免费观看| 看免费成人av毛片| 久久女婷五月综合色啪小说| 亚洲中文av在线| 免费大片黄手机在线观看| 午夜福利,免费看| 黄色一级大片看看| 色94色欧美一区二区| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 久久99一区二区三区| 亚洲av中文av极速乱| 成人黄色视频免费在线看| 国产国语露脸激情在线看| 久久这里只有精品19| 国产成人91sexporn| 日韩三级伦理在线观看| 国产综合精华液| 国产精品久久久久成人av| 国产亚洲一区二区精品| 激情视频va一区二区三区| 黄色 视频免费看| 熟妇人妻不卡中文字幕| 免费黄网站久久成人精品| 一个人免费看片子| 宅男免费午夜| 女人久久www免费人成看片| 老司机影院毛片| 日本-黄色视频高清免费观看| 一级,二级,三级黄色视频| 午夜av观看不卡| 亚洲av男天堂| 一边亲一边摸免费视频| 精品一区在线观看国产| 国产成人av激情在线播放| 午夜福利视频精品| 午夜老司机福利剧场| 老司机影院成人| 三上悠亚av全集在线观看| 精品亚洲成a人片在线观看| 日韩视频在线欧美| 熟女av电影| 精品酒店卫生间| 国产男女超爽视频在线观看| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 日本-黄色视频高清免费观看| 久久久亚洲精品成人影院| 99香蕉大伊视频| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 国产亚洲欧美精品永久| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 秋霞在线观看毛片| 97人妻天天添夜夜摸| 亚洲精品第二区| 18禁动态无遮挡网站| 亚洲少妇的诱惑av| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 在线观看免费高清a一片| 99九九在线精品视频| 久久精品夜色国产| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 午夜福利乱码中文字幕| 五月开心婷婷网| 男的添女的下面高潮视频| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 极品人妻少妇av视频| xxx大片免费视频| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 久久国产亚洲av麻豆专区| 国产精品99久久99久久久不卡 | 亚洲第一区二区三区不卡| 制服丝袜香蕉在线| 成人手机av| 久久久久久伊人网av| 欧美少妇被猛烈插入视频| 国精品久久久久久国模美| 少妇 在线观看| 九九爱精品视频在线观看| 亚洲图色成人| 久热这里只有精品99| 国产男女超爽视频在线观看| 久久免费观看电影| 男女啪啪激烈高潮av片| av福利片在线| xxx大片免费视频| 免费大片18禁| 嫩草影院入口| 曰老女人黄片| 丰满饥渴人妻一区二区三| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| h视频一区二区三区| 亚洲成色77777| 国产精品久久久久久久电影| 亚洲精品aⅴ在线观看| 成人手机av| 日韩中文字幕视频在线看片| 免费大片18禁| 午夜91福利影院| 韩国av在线不卡| 亚洲美女搞黄在线观看| 午夜福利乱码中文字幕| 成年人免费黄色播放视频| 香蕉丝袜av| 国产 一区精品| 国产一区亚洲一区在线观看| 毛片一级片免费看久久久久| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 亚洲中文av在线| 免费观看在线日韩| 亚洲av成人精品一二三区| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 黄色怎么调成土黄色| 成年人午夜在线观看视频| 丝袜在线中文字幕| 丝袜喷水一区| 少妇的逼水好多| 久久久久精品人妻al黑| 大陆偷拍与自拍| 国产一区二区三区av在线| 男女边吃奶边做爰视频| 国产 精品1| 免费黄网站久久成人精品| 精品一品国产午夜福利视频| 性高湖久久久久久久久免费观看| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 亚洲av国产av综合av卡| 国产精品免费大片| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 最新的欧美精品一区二区| 国产男人的电影天堂91| 日日爽夜夜爽网站| 婷婷成人精品国产| 91精品三级在线观看| 伊人亚洲综合成人网| 久久人人爽人人爽人人片va| 亚洲精品av麻豆狂野| 少妇人妻精品综合一区二区| 伊人久久国产一区二区| 色5月婷婷丁香| 国产av码专区亚洲av| 香蕉国产在线看| 多毛熟女@视频| 亚洲精品国产av成人精品| 如何舔出高潮| 秋霞伦理黄片| 伦理电影大哥的女人| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 日韩成人av中文字幕在线观看| 精品一区二区三区视频在线| 内地一区二区视频在线| 欧美变态另类bdsm刘玥| 香蕉丝袜av| 看非洲黑人一级黄片| 国产男女内射视频| 国精品久久久久久国模美| 欧美日韩av久久| 国产乱人偷精品视频| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 边亲边吃奶的免费视频| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 亚洲情色 制服丝袜| 国产精品一区www在线观看| 国产在线一区二区三区精| 18禁国产床啪视频网站| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 国产一区二区在线观看av| 欧美性感艳星| 在现免费观看毛片| 国产亚洲精品第一综合不卡 | 2018国产大陆天天弄谢| 日韩欧美精品免费久久| 久久久久久人妻| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 亚洲第一区二区三区不卡| 最近最新中文字幕免费大全7| 亚洲欧美日韩卡通动漫| a级毛色黄片| 人妻 亚洲 视频| 成人毛片a级毛片在线播放| av片东京热男人的天堂| 久久国产亚洲av麻豆专区| 婷婷成人精品国产| 久久毛片免费看一区二区三区| 成年美女黄网站色视频大全免费| 久久久久精品久久久久真实原创| 久久人妻熟女aⅴ| freevideosex欧美| 精品午夜福利在线看| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 久久久久久人人人人人| 久久久久久久久久成人| 男女啪啪激烈高潮av片| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 毛片一级片免费看久久久久| 飞空精品影院首页| 人妻一区二区av| 蜜臀久久99精品久久宅男| 2018国产大陆天天弄谢| 国内精品宾馆在线| 国产成人精品一,二区| 大陆偷拍与自拍| 一区二区av电影网| 最近中文字幕高清免费大全6| 99热这里只有是精品在线观看| 精品人妻在线不人妻| 国产免费一级a男人的天堂| 日韩大片免费观看网站| 精品卡一卡二卡四卡免费| 男人舔女人的私密视频| 九草在线视频观看| 亚洲美女黄色视频免费看| 青春草亚洲视频在线观看| 久久久精品区二区三区| 国产又色又爽无遮挡免| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 亚洲成国产人片在线观看| 一区二区三区乱码不卡18| 国产在线一区二区三区精| 看十八女毛片水多多多| 日韩伦理黄色片| 黄色毛片三级朝国网站| 久久久久久久国产电影| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 又黄又粗又硬又大视频| 国产色爽女视频免费观看| 日本免费在线观看一区| 成人国语在线视频| 咕卡用的链子| 日日啪夜夜爽| 全区人妻精品视频| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 美国免费a级毛片| 少妇精品久久久久久久| 亚洲第一区二区三区不卡| www.熟女人妻精品国产 | 2022亚洲国产成人精品| 精品少妇内射三级| 丝袜喷水一区| 亚洲av国产av综合av卡| 久久久久人妻精品一区果冻| 三级国产精品片| 成人亚洲精品一区在线观看| 精品一区二区免费观看| 精品久久久精品久久久| 国产日韩欧美在线精品| 日韩av不卡免费在线播放| 精品第一国产精品| 亚洲国产成人一精品久久久| 老司机影院毛片| 亚洲综合色网址| 水蜜桃什么品种好| 欧美人与善性xxx| 最黄视频免费看| 亚洲欧美清纯卡通| 免费少妇av软件| 婷婷色麻豆天堂久久| 人人澡人人妻人| 丝袜在线中文字幕| 女人久久www免费人成看片| 国产成人91sexporn| 国产老妇伦熟女老妇高清| 中国美白少妇内射xxxbb| 国产极品粉嫩免费观看在线| 最近手机中文字幕大全| 久久这里有精品视频免费| 欧美日韩精品成人综合77777| 性色avwww在线观看| 亚洲精品一二三| 久久久久久伊人网av| 欧美3d第一页| 插逼视频在线观看| 激情五月婷婷亚洲| 飞空精品影院首页| 亚洲av日韩在线播放| 国产综合精华液| 国产乱人偷精品视频| 亚洲精品自拍成人| 欧美少妇被猛烈插入视频| 久久久久久人妻| 制服丝袜香蕉在线| 黑人欧美特级aaaaaa片| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 激情五月婷婷亚洲| 亚洲精品一区蜜桃| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 成人影院久久| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| av.在线天堂| 人人澡人人妻人| 91成人精品电影| 国产成人精品无人区| 成人影院久久| 男人舔女人的私密视频| av.在线天堂| xxxhd国产人妻xxx| av黄色大香蕉| 亚洲精品,欧美精品| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 国产av一区二区精品久久| 久久久久久伊人网av| 妹子高潮喷水视频| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 亚洲熟女精品中文字幕| 国产片特级美女逼逼视频| 91精品三级在线观看| 黑人高潮一二区| 亚洲精品456在线播放app| 欧美日韩综合久久久久久| 免费av中文字幕在线| 极品少妇高潮喷水抽搐| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 美女福利国产在线| 成年女人在线观看亚洲视频| 观看av在线不卡| 国产精品久久久久成人av| 深夜精品福利| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 在线观看www视频免费| 少妇熟女欧美另类| 国产麻豆69| 成人国语在线视频| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 成人亚洲欧美一区二区av| 一级毛片电影观看| 亚洲图色成人| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 成人无遮挡网站| 尾随美女入室| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 另类精品久久| 天堂中文最新版在线下载| 黄片播放在线免费| 在线观看一区二区三区激情| 搡女人真爽免费视频火全软件| 亚洲成人一二三区av| 成人亚洲欧美一区二区av| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 久久婷婷青草| 少妇的丰满在线观看| 国产精品久久久久久久久免| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 国产成人a∨麻豆精品| 国产精品人妻久久久久久| 少妇的逼好多水| 国产亚洲精品第一综合不卡 | 看免费av毛片| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 人妻少妇偷人精品九色| 90打野战视频偷拍视频| 激情五月婷婷亚洲| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 男女边摸边吃奶| 一区二区三区乱码不卡18| 午夜福利,免费看| av又黄又爽大尺度在线免费看| 蜜桃国产av成人99| 国产成人精品无人区| 91精品国产国语对白视频| 亚洲人成网站在线观看播放| 亚洲av成人精品一二三区| 亚洲精品成人av观看孕妇| 精品熟女少妇av免费看| 午夜老司机福利剧场| 伦理电影大哥的女人| 各种免费的搞黄视频| 免费黄网站久久成人精品| 免费高清在线观看视频在线观看| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 九草在线视频观看| 久久影院123| 国产免费又黄又爽又色| 又大又黄又爽视频免费| 久久人人爽人人片av| 国产精品久久久久久久电影| 日本爱情动作片www.在线观看| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 极品人妻少妇av视频| 另类精品久久| 国产高清不卡午夜福利| www.熟女人妻精品国产 | 国产成人精品无人区| 美女福利国产在线| 色5月婷婷丁香| 男女边吃奶边做爰视频| 丝瓜视频免费看黄片| 国产精品成人在线| 亚洲国产精品成人久久小说| 久久女婷五月综合色啪小说| 国产成人av激情在线播放| 一区二区日韩欧美中文字幕 | 美女福利国产在线| 国产毛片在线视频| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 老女人水多毛片| 久久精品国产自在天天线| 一边摸一边做爽爽视频免费| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 9191精品国产免费久久| 欧美人与善性xxx| 国产片内射在线| 成人综合一区亚洲| 我的女老师完整版在线观看| 纯流量卡能插随身wifi吗| 超色免费av| 水蜜桃什么品种好| 男女免费视频国产| 亚洲综合精品二区| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 亚洲精品久久午夜乱码| 97超碰精品成人国产| 有码 亚洲区| 日韩视频在线欧美| 爱豆传媒免费全集在线观看| 亚洲精品一区蜜桃| 少妇人妻 视频| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 国产精品成人在线| 国产精品久久久久久精品古装| 亚洲av中文av极速乱| av女优亚洲男人天堂| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 9191精品国产免费久久| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 亚洲高清免费不卡视频| videosex国产| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 成人亚洲精品一区在线观看| 久久韩国三级中文字幕| 欧美日本中文国产一区发布| av在线播放精品| 亚洲在久久综合| 久久影院123| a级片在线免费高清观看视频| 伦理电影免费视频| 国产午夜精品一二区理论片| 日韩av免费高清视频| 精品一品国产午夜福利视频| 国产男女内射视频| 成人综合一区亚洲| 一本色道久久久久久精品综合| 国产乱人偷精品视频| 一区二区av电影网| 欧美成人午夜免费资源| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 夜夜爽夜夜爽视频| 黑人猛操日本美女一级片| 人妻一区二区av| 国产综合精华液| 国产一区二区三区综合在线观看 | 国产色婷婷99| 亚洲综合色网址| 亚洲国产看品久久| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 男人添女人高潮全过程视频| 国产男女内射视频| 亚洲人成网站在线观看播放| 激情五月婷婷亚洲| av视频免费观看在线观看| √禁漫天堂资源中文www| 国产淫语在线视频| 国产男女内射视频| 成年动漫av网址| 国产精品免费大片| 久久这里有精品视频免费| 国国产精品蜜臀av免费| 国产精品国产av在线观看| 欧美另类一区| 国产精品人妻久久久久久| 亚洲国产精品一区三区| 亚洲国产日韩一区二区| 综合色丁香网| 不卡视频在线观看欧美| 免费观看无遮挡的男女| 九九在线视频观看精品| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 一级片免费观看大全|