宮頸癌浸潤(rùn)侵襲性與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)水平的相關(guān)性▲

劉寧寧 馮 蓓 段 偉 李紅霞

(延安大學(xué)附屬醫(yī)院1腫瘤科，2婦科，陜西省延安市 716000，電子郵箱：283132024@qq.com)

宮頸癌是女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率居女性生殖道惡性腫瘤的首位，且我國(guó)宮頸癌的發(fā)病率不斷上升，并呈低齡化，對(duì)女性健康造成嚴(yán)重影響[1-2]。目前宮頸癌的治療方式主要有化療、放療、手術(shù)等，但中晚期宮頸癌患者的腫瘤浸潤(rùn)侵襲以及預(yù)后不良問(wèn)題仍無(wú)法有效解決[3]。有學(xué)者認(rèn)為宮頸癌的浸潤(rùn)侵襲性是患者治療失敗及死亡的主要原因[4-5]，而我國(guó)宮頸癌患者的早期診斷率落后于發(fā)達(dá)國(guó)家，患者確診時(shí)大多數(shù)已為中晚期，多伴有浸潤(rùn)侵襲性，預(yù)后較差[6-7]。近年來(lái)，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，通過(guò)檢測(cè)腫瘤細(xì)胞特異抗原等進(jìn)行宮頸癌早期診斷已成為可能[8]。研究表明，腫瘤的形成是腫瘤細(xì)胞異常增殖的結(jié)果，其發(fā)生發(fā)展涉及多中心、多環(huán)節(jié)、多通路[9]。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)可以促進(jìn)體內(nèi)血管內(nèi)皮細(xì)胞分化，產(chǎn)生金屬蛋白酶、內(nèi)皮細(xì)胞間質(zhì)膠原酶，增強(qiáng)血管通透性，促進(jìn)腫瘤侵襲與轉(zhuǎn)移[10]。本文分析宮頸癌浸潤(rùn)侵襲性與癌組織中VEGF表達(dá)水平的相關(guān)性，探討宮頸癌浸潤(rùn)侵襲的機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 回顧性分析2013年8月至2017年2月在我院就診的120例宮頸癌患者(觀察組)的臨床資料。納入標(biāo)準(zhǔn)：臨床與病理資料完整；病理診斷為宮頸癌；非其他部位轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)的宮頸癌病例。排除標(biāo)準(zhǔn)：精神疾病患者；未行手術(shù)或活檢病例；組織病理學(xué)不明確的病例；妊娠孕婦與哺乳期婦女。年齡35～83(54.21±4.22)歲；體質(zhì)指數(shù)(22.44±1.48)kg/m2；臨床分期：Ⅱ期48例，Ⅲ期40例，Ⅳ期32例；分化程度：高分化60例，中分化40例，低分化20例；浸潤(rùn)侵襲：有60例，無(wú)60例。抽取我院同期收治的無(wú)宮頸疾病的婦科就診患者120例作為對(duì)照組，納入標(biāo)準(zhǔn)：因良性病變行子宮切除術(shù)的、具有正常宮頸組織的患者；排除標(biāo)準(zhǔn)同觀察組。年齡32～81(53.42±3.42)歲；體質(zhì)指數(shù)(23.92±1.48)kg/m2。兩組患者的年齡、體質(zhì)指數(shù)等一般資料比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。本研究獲得本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者均在自愿條件下簽署知情同意書(shū)。

1.2 方法 取得兩組患者的宮頸標(biāo)本后立即用10%甲醛固定、石蠟包埋，給予免疫組化分析，VEGF抗體(批號(hào)：201245933)由Abcam公司提供，工作濃度為1 ∶500。以磷酸緩沖鹽溶液代替一抗作為陰性對(duì)照。分別由兩名有經(jīng)驗(yàn)的病理科醫(yī)生在雙盲情況下根據(jù)切片的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)比例和染色深度進(jìn)行判定。染色結(jié)果判斷：組織切片中胞質(zhì)染為淡黃色至棕褐色者為陽(yáng)性細(xì)胞。標(biāo)本結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)參照文獻(xiàn)[2]，4分：陽(yáng)性細(xì)胞>60%；3分：30%<陽(yáng)性細(xì)胞≤60%；2分： 5%<陽(yáng)性細(xì)胞≤30%：1分：陽(yáng)性細(xì)胞0%<陽(yáng)性細(xì)胞≤5%；0分：陰性?！?分為VEGF表達(dá)陽(yáng)性。對(duì)宮頸癌患者隨訪至2018年8月，記錄復(fù)發(fā)與死亡情況。比較觀察組和對(duì)照組患者的宮頸組織VEGF表達(dá)陽(yáng)性率，并分析觀察組患者宮頸癌VEGF表達(dá)情況與腫瘤浸潤(rùn)侵襲性的相關(guān)性，以及影響宮頸癌患者宮頸組織VEGF表達(dá)的因素。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。對(duì)符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以(x±s)表示，比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和百分比表示，比較采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析；影響因素分析采用Logistic回歸分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組患者宮頸組織VEGF表達(dá)陽(yáng)性率比較 觀察組宮頸組織VEGF表達(dá)陽(yáng)性90例，陽(yáng)性率為75.0%；對(duì)照組宮頸組織VEGF表達(dá)陽(yáng)性4例，陽(yáng)性率為3.3%。觀察組宮頸組織VEGF表達(dá)陽(yáng)性率高于對(duì)照組(χ2=129.338，P<0.001)。

2.2 有無(wú)浸潤(rùn)侵襲宮頸癌患者宮頸組織VEGF表達(dá)情況比較 60例有浸潤(rùn)侵襲性患者中，宮頸組織VEGF表達(dá)陽(yáng)性59例，陽(yáng)性率為98.3%；60例無(wú)浸潤(rùn)侵襲性宮頸癌患者中，宮頸組織VEGF表達(dá)陽(yáng)性31例，陽(yáng)性率為51.7%。有浸潤(rùn)侵襲性宮頸癌患者的宮頸組織VEGF表達(dá)陽(yáng)性率高于無(wú)浸潤(rùn)侵襲患者(χ2=13.938，P<0.001)。

2.3 影響宮頸癌患者宮頸組織VEGF表達(dá)水平的多因素Logistic回歸分析 以宮頸癌患者宮頸組織VEGF的表達(dá)情況作為因變量(VEGF表達(dá)陽(yáng)性=1；VEGF表達(dá)陰性=0)，以浸潤(rùn)侵襲情況、臨床分期、分化程度作為自變量(變量賦值：浸潤(rùn)侵襲=1，非浸潤(rùn)侵襲=0；臨床分期：Ⅳ期=1，Ⅱ期+Ⅲ期=0；分化程度：低分化=1，中分化+高分化=0)，進(jìn)行多因素Logistic回歸分析。結(jié)果顯示，浸潤(rùn)侵襲、臨床分期為Ⅳ期、低分化為影響宮頸癌患者宮頸組織VEGF陽(yáng)性表達(dá)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(均P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 影響宮頸癌患者宮頸組織VEGF陽(yáng)性表達(dá)的多因素Logistic回歸分析(n=120)

2.4 宮頸癌患者預(yù)后與宮頸組織VEGF表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)的相關(guān)性 所有觀察組患者平均隨訪時(shí)間為(32.10±3.50)個(gè)月，其中復(fù)發(fā)25例，復(fù)發(fā)率為20.8%；死亡12例，死亡率為10.0%；相關(guān)分析顯示宮頸癌患者的復(fù)發(fā)率和死亡率均與宮頸組織VEGF陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均存在正相關(guān)性(rs=0.543，P=0.007；rs=0.459，P=0.013)。

3 討 論

調(diào)查顯示，宮頸癌5年生存率約70%，其中無(wú)浸潤(rùn)侵襲者5年生存率達(dá)80%～90%，而局部晚期或浸潤(rùn)侵襲者5年生存率均在50%以下，因此，宮頸癌的浸潤(rùn)侵襲性是影響宮頸癌預(yù)后的重要因素[11]。目前該病的發(fā)病機(jī)理尚未完全明確，但可歸因于基因—環(huán)境的相互作用[12]。腫瘤的浸潤(rùn)侵襲性與相關(guān)基因的異常表達(dá)有關(guān)，VEGF是特異性的促淋巴管內(nèi)皮生成因子，其可誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞使其鈣濃度在短時(shí)間內(nèi)升高，還可提升基底膜的降解速度，影響內(nèi)皮細(xì)胞的基因表達(dá)，并促進(jìn)血管生成[13]。此外，VEGF還能夠提升血管通透性，并為內(nèi)皮細(xì)胞的遷移提供網(wǎng)架，導(dǎo)致血漿蛋白外滲，同時(shí)也為腫瘤浸潤(rùn)侵襲提供基質(zhì)。本研究結(jié)果顯示，觀察組的宮頸組織VEGF表達(dá)陽(yáng)性率高于對(duì)照組(P<0.05)，這可能與VEGF可與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體(vascular endothelial growth factor receptor,VEGFR)相結(jié)合而促進(jìn)淋巴管內(nèi)皮的生長(zhǎng)[14]，還可通過(guò)抑制促血管生長(zhǎng)因子與其在內(nèi)皮細(xì)胞表面的受體結(jié)合而間接抑制血管新生有關(guān)[15]。

在人體正常組織當(dāng)中VEGF呈微量表達(dá)，而在腫瘤組織中，VEGF呈高表達(dá)[16]。VEGF與VEGFR結(jié)合后可誘導(dǎo)淋巴管生成，促進(jìn)腫瘤淋巴轉(zhuǎn)移[17]。本研究結(jié)果顯示，在120例觀察組患者中，有浸潤(rùn)侵襲性的宮頸癌患者宮頸組織中VEGF表達(dá)陽(yáng)性率高于無(wú)浸潤(rùn)侵襲者(P<0.05)，這提示宮頸癌組織的浸潤(rùn)侵襲多伴有VEGF的陽(yáng)性表達(dá)。在各種高危因素的基礎(chǔ)上，致癌因子利用不同途徑導(dǎo)致細(xì)胞增生及凋亡失調(diào)而促進(jìn)宮頸癌的發(fā)生發(fā)展[18]。腫瘤浸潤(rùn)侵襲的過(guò)程非常復(fù)雜，包含多個(gè)步驟和因素，且與宿主和腫瘤細(xì)胞的復(fù)雜作用密切相關(guān)[19]。本研究結(jié)果顯示，浸潤(rùn)侵襲、臨床分期為Ⅳ期、低分化程度為影響宮頸癌VEGF陽(yáng)性表達(dá)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(均P<0.05)。VEGF作為分泌型糖蛋白，隨著其自身的逐步水解，其對(duì)于VEGFR的親和力逐步升高，而在VEGF的誘導(dǎo)下，內(nèi)皮細(xì)胞大量增殖，導(dǎo)致人體的血管出現(xiàn)分支，對(duì)腫瘤的發(fā)展及轉(zhuǎn)移具有促進(jìn)作用，使腫瘤朝著肌層深部方向發(fā)展[20]。

宮頸癌復(fù)發(fā)是一個(gè)多因素多步驟的復(fù)雜病理過(guò)程。有研究顯示，宮頸癌患者治療后的5年生存率為75%左右，其主要死因是術(shù)后復(fù)發(fā)，因此預(yù)測(cè)復(fù)發(fā)對(duì)宮頸癌預(yù)后判斷具有重要意義[21]。相關(guān)研究表明，VEGF與VEGFR高表達(dá)是腫瘤增殖與轉(zhuǎn)移的主要影響因素，VEGF在具有高轉(zhuǎn)移潛能的宮頸癌細(xì)胞系中高表達(dá)，且轉(zhuǎn)移程度越高表達(dá)越強(qiáng)[22]。本研究結(jié)果顯示，觀察組患者的復(fù)發(fā)率為20.8%，死亡率為10.0%；宮頸癌患者的復(fù)發(fā)和死亡均與宮頸組織VEGF陽(yáng)性表達(dá)數(shù)存在正相關(guān)性(均P<0.05)，與上述研究結(jié)果相似，但由于本研究中的樣本數(shù)有限，后續(xù)研究仍需進(jìn)一步搜集病例，增大樣本量，以進(jìn)一步驗(yàn)證該結(jié)論。

綜上所述，宮頸癌患者宮頸組織VEGF表達(dá)上調(diào)發(fā)展，其與宮頸癌組織浸潤(rùn)侵襲相關(guān)，或可預(yù)測(cè)患者的復(fù)發(fā)與死亡情況。