P16蛋白在胃癌組織中的異常表達(dá)及其意義

李旭峰 白勇 周娟 倪鵬飛

（1 貴陽護理職業(yè)學(xué)院衛(wèi)生管理系 貴州 貴陽 550081）

（2 新疆醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院腫瘤科 新疆 烏魯木齊 830002）

（3 貴陽護理職業(yè)學(xué)院文基部 貴州 貴陽 550081）

P16是一種抑癌基因，有研究表明癌癥的形成與發(fā)展和P16的表達(dá)異常存在一定關(guān)聯(lián)[1]，

這是因為P16為能夠抑制細(xì)胞周期分化依賴激酶（CDK），和CDK產(chǎn)生結(jié)合反應(yīng)，使其失活，從而阻止細(xì)胞進一步增殖。因此當(dāng)P16表達(dá)異常時，可導(dǎo)致細(xì)胞增殖失控，誘發(fā)惡性腫瘤?；赑16在抑制癌癥過程中對細(xì)胞增殖發(fā)生的作用，推斷P16的異常表達(dá)和胃癌存在一定關(guān)系。為進一步驗證此種推斷，明確P16蛋白在胃癌組織中異常表達(dá)的特征，以此為胃癌的臨床癥狀及預(yù)后判斷提供參考，本次選取新疆醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院近年收治的70例胃癌患者為觀察組，另選取同期于新疆醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院健康體檢的70例正常人群為對照組，觀察不同類型人群P16的檢測結(jié)果并比較，現(xiàn)報道如下。

1.資料和方法

1.1 一般資料

選取2017年12月-2018年12月新疆醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院收治的70例胃癌患者為觀察組，另選取同期于新疆醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院健康體檢的70例正常人群歸為對照組。其中觀察組男性52例，女性18例。年齡42-77歲，平均（54.26±2.74）歲。對照組男性49例，女性21例。年齡41-76歲，平均（53.87±3.19）歲。兩組在年齡、性別等一般資料方面沒有統(tǒng)計學(xué)差異，P＞0.05，具可比性。

1.2 方法

取檢驗標(biāo)本后，在半小時內(nèi)通過10%的福爾馬林固定[2]，經(jīng)24h后，通過乙醇脫水，以及二甲苯透明處理2次，之后浸泡包埋，并制作成厚度為4μm的切片。之后分別通過免疫組織化學(xué)SP法兩組組織標(biāo)本切片進行P16檢測，檢測試劑由武漢博士德公司制造，嚴(yán)格根據(jù)檢測試劑說明進行操作。

1.3 判定標(biāo)準(zhǔn)

P16陽性染色細(xì)胞表達(dá)呈胞核型，并為清晰的棕黃色。陽性分級：（-）切片中沒有陽性細(xì)胞。（+）切片中的陽性細(xì)胞在25%以下。（++）切片中的陽性細(xì)胞在25%-50%之間。（+++）切片中的陽性細(xì)胞超過50%。以（+）、（++）、（+++）為陽性。陰性即為P16異常表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

本次實驗數(shù)據(jù)采用SPSS20.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，其中計量資料用t檢驗，計數(shù)資料用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 組間對比

對照組P16陽性例數(shù)為70例，陽性率為100%，觀察組P16的陽性例數(shù)為30例，陽性率為42.86%，對照組陽性率顯著高于觀察組，P＜0.05。

2.2 組內(nèi)對比

胃癌組織分化程度低的患者P16陽性率顯著低于分化程度高的患者，發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者P16陽性率顯著低于未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，TNM分期為Ⅲ-Ⅳ級的患者P16陽性率顯著低于TNM分期為I-Ⅱ級的患者，P＜0.05。但在性別和浸潤程度方面，P16的陽性率沒有差異，P＞0.05，見表。

表 不同類型胃癌組織的P16表達(dá)情況

3.討論

P16蛋白是近年來所發(fā)現(xiàn)可抑制癌癥的基因[3]，由2個內(nèi)含子以及3個外顯子所構(gòu)成，在人類9號位染色體上的p21位置，長度約為8.5kb。之所以認(rèn)為P16為抑癌基因，是因為P16能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞的分化周期，組織細(xì)胞的異常分化與增生，達(dá)到抑制腫瘤的目的[4]，這一功能的實現(xiàn)是因為P16為一種能夠抑制細(xì)胞周期分化依賴激酶（CDK）的蛋白，P16能夠和CDK產(chǎn)生結(jié)合反應(yīng)，使其失活，從而阻止細(xì)胞進一步增殖。

如果P16蛋白出現(xiàn)異常，不能有效起到CDK的一直作用，就無法阻止細(xì)胞的分化增殖，導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)非正常性的增殖，將衍變?yōu)閻盒阅[瘤[5]。胃癌的發(fā)病機理尚不明確，開展胃癌和細(xì)胞增殖周期相關(guān)的基因研究，有助于明確胃癌的發(fā)病機制，并為胃癌的資料提供新思路。目前已發(fā)現(xiàn)食管癌、肺癌、食管癌、卵巢癌等多種原發(fā)惡性腫瘤疾病患者中存在高頻率的異常表達(dá)[6]。但鮮有對于P16異常表達(dá)和胃癌關(guān)系的相關(guān)研究[7]。但經(jīng)P16參與抑制細(xì)胞非正常增殖的原理，推斷胃癌的發(fā)生也和P16表達(dá)異常存在一定關(guān)聯(lián)[8]。為進一步驗證這種推斷，明確P16蛋白在胃癌組織中異常表達(dá)的特征，以此為胃癌的臨床癥狀及預(yù)后判斷提供參考，本次研究就選取新疆醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院近年來收治的70例胃癌患者作為研究對象，通過免疫化學(xué)SP法對患者的胃癌組織進行檢測。檢測結(jié)果顯示，胃癌患者的P16陽性率要顯著低于正常人群，P＜0.05。此外胃癌組織分化程度低的患者P16陽性率顯著低于分化程度高的患者，發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者P16陽性率顯著低于未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，TNM分期為Ⅲ-Ⅳ級的患者P16陽性率顯著低于TNM分期為I-Ⅱ級的患者，P＜0.05?？梢姲┌Y的惡化程度越高，P16的陽性率也就越低，即P16異常表達(dá)。在性別和浸潤程度方面，P16的陽性率沒有差異，P＞0.05?？梢姏]有胃癌的人群其胃黏膜組織中的P16均為正常表達(dá)。而進展到不同階段的胃癌組織，其P16表達(dá)存在差異，胃癌惡化程度越高，異常表達(dá)的頻率也隨之升高，表明P16蛋白基因的異常表達(dá)可能和胃癌癌變以及進展存在關(guān)聯(lián)，促進了胃癌病情的發(fā)展。

綜上，P16異常表達(dá)和胃癌存在相關(guān)性，胃癌患者的P16異常表達(dá)發(fā)生率高，而健康人群的P16沒有異常表達(dá)。且TNM分期越高、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、癌癥組織分化程度越低的胃癌患者期P16基因更容易為異常表達(dá)，故可通過P16對胃癌進行輔助檢測并判斷預(yù)后，具有臨床參考意義。