一種新型抗菌肽Hydramacin-1 在畢赤酵母中的重組表達(dá)、純化及其抗菌活性

孟德梅，石林，李文娟，孫雪晴，郭雅君，賈雪霞，樊振川

(省部共建食品營養(yǎng)與安全國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，食品營養(yǎng)與安全教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津科技大學(xué)食品工程與生物技術(shù)學(xué)院，大健康生物技術(shù)國際科技合作基地，天津市大健康生物技術(shù)國際聯(lián)合研究中心，天津 300457)

抗菌肽(antimicrobial peptides，AMPs)是一種來源于動物、植物及真菌等先天免疫組織的有抑菌活性的小分子短肽[1]，它可有效御防病原體入侵，大部分抗菌肽具有廣譜抗菌活性和抑制細(xì)菌、真菌、寄生蟲和病毒生長的功能，有些抗菌肽對腫瘤具有選擇性殺傷作用[2-4].抗菌肽與傳統(tǒng)抗生素相比，其作用機(jī)理獨(dú)特，不易產(chǎn)生耐藥性，因此成為了有望替代抗生素的理想藥物[5].目前，基因工程法是生產(chǎn)抗菌肽的主要方法之一[6]，其中利用畢赤酵母表達(dá)體系生產(chǎn)抗菌肽是一種重要方式.該表達(dá)體系相比于原核表達(dá)體系具有諸多優(yōu)點(diǎn)[7-9]，如可以將蛋白分泌到胞外，在蛋白質(zhì)的加工、折疊、翻譯后修飾等方面具有諸多優(yōu)勢，從而能較好地保持目的蛋白的生物活性.現(xiàn)在已有諸多來源的抗菌肽在畢赤酵母表達(dá)體系中成功表達(dá)，如人源抗菌肽human cathelicidin[10]、雞源抗菌肽Fowlicidin-3[11]和植物源抗菌肽PaDef[12]等.

抗菌肽Hydramacin-1 來源于大乳頭水螅的上皮防御組織，氨基酸序列與已發(fā)現(xiàn)的抗菌肽氨基酸序列具有極低的相似性，是一種新型抗菌肽[13].該抗菌肽含有60 個氨基酸殘基，凈電荷為+6，結(jié)構(gòu)中具有一個二硫鍵橋.二硫鍵橋?qū)⒃撾闹械囊粋€α-螺旋和β-折疊連接在一起，形成一個結(jié)扣式的結(jié)構(gòu)，有利于維持該結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定.疏水性氨基酸的比例為33%，分布在兩側(cè)，由于帶正電荷的殘基被夾在兩個疏水區(qū)域的中間，疏水區(qū)域的基團(tuán)與細(xì)胞膜上的疏水基團(tuán)相互作用插到磷脂雙分子層中，從而使得細(xì)胞聚集在一起，因此它的抑菌機(jī)制被描述為聚集效應(yīng)模型.Jung等[13]鑒定了由大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)的重組抗菌肽Hydramacin-1 的抗菌活性，結(jié)果顯示Hydramacin-1具有廣譜抗菌特性，對革蘭氏陰性菌具有較好的抑制效果，但對革蘭氏陽性菌的抑制效果并不理想，其中對金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度高于100 μg/mL.因此，本文將抗菌肽Hydramacin-1 在畢赤酵母系統(tǒng)中表達(dá)，獲得重組抗菌肽Hydramacin-1，并檢測其表達(dá)產(chǎn)量和抗菌活性.

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株和質(zhì)粒

畢赤酵母(Pichia pastoris)GS115 和質(zhì)粒pPICZαA 購于Invitrogen 公司；大腸桿菌(Escherichia coli)O157 ATCC35150、大腸埃希氏菌(Escherichia coli)ATCC10305、單增李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)ATCC21633 和金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)ATCC25923 均購于美國菌種保藏中心；枯草芽胞桿菌(Bacillus subtilis)LZZ-133 由中國農(nóng)業(yè)大學(xué)申琳教授惠贈.

1.1.2 主要試劑

博來霉素(Zeocin)，Invitrogen 公司；慶大霉素(Gen)、超低分子質(zhì)量蛋白質(zhì)marker 和BCA Protein Assay Kit，北京索萊寶科技有限公司；限制性核酸內(nèi)切酶EcoRⅠ、KpnⅠ和Taq DNA 聚合酶，F(xiàn)ermentas公司；限制性核酸內(nèi)切酶SacⅠ、dNTPs、1 kbp DNA Ladder、100 bp DNA Ladder 和DNA marker Trans 2 K，全式金生物技術(shù)有限公司；其他試劑均為國產(chǎn)分析純.

1.2 方法

1.2.1 Hydramacin-1 重組表達(dá)載體的構(gòu)建

依據(jù)畢赤酵母密碼子的偏好性[14]優(yōu)化抗菌肽Hydramacin-1 的DNA 序列，在Hydramacin-1 DNA序列的 5′端添加酶切位點(diǎn) EcoRⅠ，起始密碼子ATG，3′端添加終止密碼子TAA，酶切位點(diǎn)KpnⅠ，最終順序?yàn)椋篍coRⅠ-ATG-Hydramacin-1 目的基因-TAA-KpnⅠ.將以上設(shè)計(jì)好的目的基因送往蘇州金唯智生物科技有限公司進(jìn)行全基因合成，并通過EcoRⅠ和KpnⅠ兩個酶切位點(diǎn)將合成的目的基因克隆至載體pPICZαA 上，最終得到含有重組表達(dá)質(zhì)粒pPICZαA-Hydramacin-1 的穿刺菌.

挑取含有重組表達(dá)質(zhì)粒pPICZαA-Hydramacin-1的穿刺菌接種于含有 Zeocin(終質(zhì)量濃度為25 μg/mL)的LB 培養(yǎng)基中，37 ℃、200 r/min 振蕩培養(yǎng)過夜.使用北京索萊寶生物科技有限公司的質(zhì)粒小提試劑盒提取質(zhì)粒.提取的質(zhì)粒用限制性核酸內(nèi)切酶EcoRⅠ和KpnⅠ對其進(jìn)行雙酶切驗(yàn)證，并送往北京奧科生物公司測序驗(yàn)證.

1.2.2 重組抗菌肽Hydramacin-1 的誘導(dǎo)表達(dá)與鑒定

使用限制性核酸內(nèi)切酶SacⅠ對重組表達(dá)質(zhì)粒pPICZαA-Hydramacin-1 在37 ℃進(jìn)行單酶切2 h，使其線性化.經(jīng)DNA 產(chǎn)物回收試劑盒收集的線性化質(zhì)粒與畢赤酵母GS115 感受態(tài)細(xì)胞混勻，置于預(yù)冷的2 mm 電轉(zhuǎn)杯中，以電壓1 500 V、電容25 μF、電阻200 ? 的條件進(jìn)行電擊，最后將電轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布于含有Zeocin(終質(zhì)量濃度為200 μg/mL)的YPD 平板上，30 ℃培養(yǎng)3～4 d，觀察轉(zhuǎn)化子的生長.

利用菌落PCR 驗(yàn)證的方法[15]進(jìn)行陽性轉(zhuǎn)化子的篩選.挑取不同酵母轉(zhuǎn)化子于0.2% SDS 溶液中，混勻，沸水浴 10 min，使菌體細(xì)胞膜破裂釋放出基因組DNA，12 000 r/min 離心10 min，取上清液作為實(shí)驗(yàn)組的PCR 模板；用未轉(zhuǎn)入質(zhì)粒的畢赤酵母GS115 單克隆作陰性對照，同樣上述處理；用重組質(zhì)粒pPICZαA-Hydramacin-1 作陽性對照.利用軟件(Primer premier 5.0)設(shè)計(jì)的特異性引物 P1(5'-GAAGCTGTCATCGGTTACTCA-3')和 P2(5'-TCC GCACAAACGAAGGTC-3')進(jìn)行PCR 驗(yàn)證.PCR 反應(yīng)結(jié)束后，取5 μL PCR 產(chǎn)物進(jìn)行0.8%瓊脂糖凝膠電泳，檢測抗菌肽基因是否成功插入到畢赤酵母基因組中.

挑取不同陽性轉(zhuǎn)化子于5 mL BMGY 培養(yǎng)基中，28 ℃、220 r/min 培養(yǎng)18～24 h 后，按20%的比例轉(zhuǎn)接于25 mL BMGY 培養(yǎng)基中培養(yǎng)；待A600達(dá)8.0～10.0 時，收集菌體，離心棄上清液，用甲醇體積分?jǐn)?shù)為1.0%的25 mL BMMY 培養(yǎng)基重懸菌體，進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)；每隔24 h 補(bǔ)加甲醇，96 h 后，離心收集上清液進(jìn)行Tricine-SDS-PAGE 凝膠電泳[16]，檢測目的蛋白是否表達(dá).

1.2.3 表達(dá)條件的優(yōu)化

將擴(kuò)大培養(yǎng)后的重組酵母轉(zhuǎn)化子離心收集，重懸于甲醇體積分?jǐn)?shù)分別為 0.5%、1%、1.5%、2%的BMMY 培養(yǎng)基中培養(yǎng)，每隔24 h 取樣，并補(bǔ)加甲醇至各自的終濃度，144 h 后終止培養(yǎng)，最后通過BCA Protein Assay Kit 測定發(fā)酵上清液中的總蛋白含量，同時進(jìn)行Tricine-SDS-PAGE 凝膠電泳和銀染實(shí)驗(yàn)檢測目的蛋白，并結(jié)合ImageJ 1.8.0 軟件對電泳結(jié)果進(jìn)行灰度分析，比較不同發(fā)酵時間、不同甲醇體積分?jǐn)?shù)對目的蛋白表達(dá)量的影響.

1.2.4 重組抗菌肽Hydramacin-1 的純化

通過離子交換層析的方法，使用1 mL HiTrap SP柱(GE Healthcare，USA)純化抗菌肽 Hydramacin-1.首先，將發(fā)酵上清液在4 ℃、8 000 g 的條件下離心10 min，去除菌體，并用0.22 μm 的水系濾器過濾發(fā)酵上清液；然后用3 個柱體積的50 mmol/L 磷酸鹽緩沖液(pH 7.0)對發(fā)酵上清液透析置換.HiTrap SP 柱先用5 倍柱體積的含有1 mol/L NaCl 的50 mmol/L磷酸鹽緩沖液(pH 7.0)洗滌，再用5 倍柱體積的50 mmol/L 磷酸鹽緩沖液(pH 7.0)平衡.用注射器將樣品以1 mL/min 的速度注入柱中，用5 倍柱體積的50 mmol/L 磷酸鹽緩沖液(pH 7.0)漂洗；最后用5 倍柱體積的含有150 mmol/L NaCl 的50 mmol/L 磷酸鹽緩沖液(pH 7.0)洗脫目的蛋白，通過Tricine-SDSPAGE 凝膠電泳和銀染實(shí)驗(yàn)，結(jié)合ImageJ 1.8.0 軟件進(jìn)行灰度分析，檢測純化后的抗菌肽純度.將純化后的抗菌肽真空冷凍干燥，保存.

1.2.5 重組抗菌肽Hydramacin-1 的抑菌活力測定

通過測定抗菌肽質(zhì)量濃度分別為30、60、80、100 μg/mL 時對各指示菌的抑制率，進(jìn)而評價(jià)其抗菌活性的高低.挑取指示菌于1 mL LB 培養(yǎng)基中，培養(yǎng)至對數(shù)生長期，再用LB 培養(yǎng)基稀釋菌體至1×105mL-1左右，待用.用無菌的50 mmol/L 磷酸鹽緩沖液(pH 7.0)將抗菌肽溶解至所需濃度，將20 μL 的各濃度抗菌肽加入96 孔板中，再向每個孔中加入100 μL 稀釋完畢的菌液，每個樣品3 個平行，37 ℃過夜振蕩培養(yǎng)16 h，通過酶標(biāo)儀在600 nm 下測定樣品的吸光度.實(shí)驗(yàn)組 A600值記為 A，20 μL 無菌的50 mmol/L 磷酸鹽緩沖液(pH 7.0)和100 μL 的新鮮LB 培養(yǎng)基混合液吸光度為 A1，20 μL 無菌的50 mmol/L 磷酸鹽緩沖液(pH 7.0)與100 μL 的受試菌混合液吸光度為A0，按照式(1)計(jì)算抑制率.

2 結(jié)果與分析

2.1 Hydramacin-1重組表達(dá)載體的構(gòu)建

抗菌肽 Hydramacin-1 的 DNA 序列全長為180 bp，具有60 個氨基酸，根據(jù)畢赤酵母密碼子的偏好性(http：//www.kazusa.or.jp/codon/)對其基因序列進(jìn)行優(yōu)化設(shè)計(jì)(圖1).

圖1 pPICZαA-Hydramacin-1重組表達(dá)載體的構(gòu)建Fig.1 Construction of P.pastoris expression plasmid pPICZαA-Hydramacin-1

優(yōu)化后的DNA 序列如圖1(a)所示；在優(yōu)化后的DNA 序列前加上EcoRⅠ酶切位點(diǎn)和ATG 起始密碼子，序列后加上TAA 終止密碼子和KpnⅠ酶切位點(diǎn)，序列長度為198 bp，如圖1(b)所示；再將其連接至畢赤酵母外泌型表達(dá)載體pPICZαA 中，如圖1(c)所示.

用限制性核酸內(nèi)切酶EcoRⅠ和KpnⅠ對獲得的重組質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切，得到兩條大小分別約為200 bp和3 500 bp 的條帶，與理論上設(shè)計(jì)的載體長度一致(圖2).此后將質(zhì)粒送往北京奧科公司測序，測序結(jié)果同樣證明重組表達(dá)質(zhì)粒pPICZαA-Hydramacin-1 構(gòu)建成功.

圖2 pPICZαA-Hydramacin-1的雙酶切驗(yàn)證Fig.2 Restriction identification of pPICZαA-Hydramacin-1

2.2 高表達(dá)量轉(zhuǎn)化子的獲得

采用菌落PCR 的方法進(jìn)行陽性轉(zhuǎn)化子的驗(yàn)證，結(jié)果如圖3 所示.泳道1 為陰性對照，無條帶出現(xiàn)，證明實(shí)驗(yàn)的可靠性；泳道2 為陽性對照，重組質(zhì)粒作模板，擴(kuò)增出750 bp 的單一目的條帶；泳道3—9 為驗(yàn)證的7 個不同酵母轉(zhuǎn)化子，其所出現(xiàn)的條帶與陽性對照條帶相一致，說明Hydramacin-1 基因已整合到畢赤酵母基因組中，它們均為陽性轉(zhuǎn)化子.

圖3 菌落PCR篩選陽性轉(zhuǎn)化子Fig.3 Positive transformant screening by colony-PCR

由于不同轉(zhuǎn)化子中插入的目的基因片段數(shù)目不相同，導(dǎo)致拷貝數(shù)不同；拷貝數(shù)越高，表達(dá)量越高，因此進(jìn)一步篩選獲得的陽性轉(zhuǎn)化子.取等體積的不同陽性轉(zhuǎn)化子的發(fā)酵上清液進(jìn)行Tricine-SDS-PAGE 凝膠電泳檢測，并對不同轉(zhuǎn)化子的目的蛋白條帶進(jìn)行灰度分析比較，結(jié)果如圖4 所示.7 個陽性轉(zhuǎn)化子表達(dá)的目的蛋白大小均在7.0×103左右，證明其得到了準(zhǔn)確表達(dá)；通過對目的條帶進(jìn)行灰度分析比較，最終選取了蛋白表達(dá)量最高的6 號轉(zhuǎn)化子進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究.

圖4 重組抗菌肽Hydramacin-1在畢赤酵母中的誘導(dǎo)表達(dá)Fig.4 Expressing recombinant Hydramacin-1 in P.pastoris

2.3 發(fā)酵時間和甲醇體積分?jǐn)?shù)對蛋白表達(dá)的影響

2.3.1 誘導(dǎo)表達(dá)條件對總蛋白表達(dá)量的影響

由于實(shí)驗(yàn)中所用載體為外泌型表達(dá)載體，蛋白主要富集在發(fā)酵上清液之中，并且GS115 菌株分泌的自身蛋白量很低[17]，所以通過BCA 法測定上清液中總蛋白的表達(dá)量情況，也可在一定程度上反映目的蛋白的表達(dá)量情況.誘導(dǎo)表達(dá)條件對總蛋白表達(dá)量的影響如圖5 所示.由圖5 可知：轉(zhuǎn)化空白質(zhì)粒的畢赤酵母在不同體積分?jǐn)?shù)甲醇的誘導(dǎo)下，總蛋白表達(dá)水平在72 h 后趨于穩(wěn)定，最高表達(dá)量小于100 μg/mL；而在4 個不同體積分?jǐn)?shù)甲醇的誘導(dǎo)下，轉(zhuǎn)化重組表達(dá)載體的陽性轉(zhuǎn)化子的總蛋白表達(dá)水平均呈上升趨勢，并在144 h 時達(dá)到最高，在甲醇體積分?jǐn)?shù)為1.5%時，陽性轉(zhuǎn)化子分泌的總蛋白量已達(dá)200 μg/mL，是轉(zhuǎn)化空質(zhì)粒畢赤酵母蛋白表達(dá)量的2 倍.

圖5 誘導(dǎo)表達(dá)條件對總蛋白表達(dá)量的影響Fig.5 Effect of expression conditions on total protein expression

2.3.2 誘導(dǎo)表達(dá)條件對目的蛋白表達(dá)量的影響

通過Tricine SDS-PAGE 凝膠電泳結(jié)合灰度分析，在甲醇體積分?jǐn)?shù)為1.5%時，目的蛋白表達(dá)量隨誘導(dǎo)時間的延長而增加，在誘導(dǎo)時長為120 h 時，灰度分析值最大，目的蛋白表達(dá)量達(dá)到最高(圖6).

圖6 誘導(dǎo)表達(dá)時間對目的蛋白表達(dá)量的影響Fig.6 Expression of recombinant Hydramacin-1 at different induction time

在誘導(dǎo)表達(dá)時間為120 h 的條件下，目的蛋白表達(dá)量隨甲醇體積分?jǐn)?shù)的提高而增加，在甲醇體積分?jǐn)?shù)為1.5%時，目的蛋白表達(dá)量達(dá)到最高(圖7).

圖7 甲醇體積分?jǐn)?shù)對目的蛋白表達(dá)量的影響Fig.7 Expression of recombinant Hydramacin-1 induced with different methanol concentrations

因此，甲醇體積分?jǐn)?shù)為1.5%，發(fā)酵時間為120 h為發(fā)酵最優(yōu)條件，總蛋白表達(dá)量可達(dá)166 μg/mL.由灰度分析得知，目的蛋白表達(dá)量占總蛋白量的50%以上，由此可計(jì)算出目的蛋白的產(chǎn)量可達(dá)83 mg/L.

2.4 重組抗菌肽Hydramacin-1的純化

通過HiTrap SP 柱對發(fā)酵上清液進(jìn)行純化，得到了純度較高的目的蛋白，如圖8 所示.

圖8 陽離子交換柱純化重組抗菌肽Hydramacin-1Fig.8 Cation exchange column purified recombinant Hydramacin-1

泳道1 為流穿液，雜蛋白流出，目的蛋白僅有微小損失；泳道2 為漂洗液，未見目的蛋白被洗下來，可見漂洗液的離子強(qiáng)度與pH 條件選擇正確；泳道3—5 為洗脫液對目的蛋白進(jìn)行洗脫的結(jié)果，得到單一目的條帶，經(jīng)灰度分析，蛋白純度達(dá)90%以上.

2.5 重組抗菌肽Hydramacin-1的抑菌活力測定

使用純化后的目的蛋白進(jìn)行抑菌活力測定，結(jié)果如圖9 所示.由圖9 可知：重組抗菌肽Hydramacin-1具有廣譜抗菌特性，8 0 μ g/m L 的重組抗菌肽Hydramacin-1 可將大腸桿菌O157 ATCC35150 全部抑制，抑制率達(dá)100%；100 μg/mL 的重組抗菌肽Hydramacin-1 對大腸埃希氏菌ATCC10305 的抑制率為100%，而對革蘭氏陽性菌單增李斯特氏菌ATCC 21633、金黃色葡萄球菌ATCC25923 和枯草芽胞桿菌LZZ-133 的抑制率僅分別為38%、72%和64%.由此可見，相比于革蘭氏陽性菌，重組抗菌肽Hydramacin-1 對革蘭氏陰性菌具有更好的抑制作用.

圖9 不同蛋白質(zhì)量濃度下的重組抗菌肽Hydramacin-1對指示菌的抑制率Fig.9 Inhibition rate of the purified recombinant Hydramacin-1 with different concentration against the tested bacterial strains

3 討 論

抗菌肽來源廣泛，穩(wěn)定性好，并且不易產(chǎn)生耐藥性，可應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、飼料等不同領(lǐng)域，因此抗菌肽成為了當(dāng)前研究的熱點(diǎn).例如，由于Nisin[18]可以很好地抑制單增李斯特菌和梭狀肉毒桿菌的生長，進(jìn)而有效保證食品安全，延長貨架期，很多國家如美國、中國等均允許其應(yīng)用到食品防腐保鮮上，尤其是應(yīng)用于易被單增李斯特菌污染的乳制品上.本研究中的抗菌肽Hydramacin-1 若直接從生物體Hydra magnipapillata 中分離制備，存在著成本高、效率低、分離難度大等諸多問題.為解決這個問題，本實(shí)驗(yàn)選用畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)，制備了可高效表達(dá)重組抗菌肽Hydramacin-1 的基因工程菌株.通過多次實(shí)驗(yàn)以及對總蛋白表達(dá)量和目的蛋白表達(dá)量進(jìn)行分析，120 h為最佳誘導(dǎo)表達(dá)時間.超過120 h，目的蛋白表達(dá)量降低，分析原因可能為發(fā)酵時間過長，目的蛋白發(fā)生降解，雜蛋白增多所致.此外，誘導(dǎo)所使用的甲醇體積分?jǐn)?shù)也不宜過高，這是因?yàn)榧状俭w積分?jǐn)?shù)過高會對細(xì)胞造成毒害作用.本實(shí)驗(yàn)顯示重組抗菌肽Hydramacin-1 在畢赤酵母中的最優(yōu)表達(dá)條件是：培養(yǎng)溫度為28 ℃，甲醇體積分?jǐn)?shù)為1.5%，發(fā)酵時間為120 h.在此條件下，目的蛋白表達(dá)量可達(dá)83 mg/L.許多其他類型的抗菌肽，如 Mytichitin-A[19]、Scygonadin[20]和VpDef[21]也已在畢赤酵母中成功表達(dá)，并且在最佳培養(yǎng)條件下，這些重組肽的產(chǎn)量分別可達(dá)到45.5、70、60 mg/L.以上結(jié)果均可表明，畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)有利于重組抗菌肽Hydramacin-1 的高效表達(dá).后續(xù)可通過發(fā)酵及進(jìn)一步優(yōu)化發(fā)酵條件的方式提高其產(chǎn)量.

重組抗菌肽Hydramacin-1 的高抗菌活力非常重要.本文測定了不同濃度下的重組抗菌肽Hydramacin-1 對5 株受試菌的抑制率，可知其具有廣譜抗菌活性，對革蘭氏陰性菌的抑菌效果明顯優(yōu)于革蘭氏陽性菌，大腸桿菌O157 對其最為敏感.這一特點(diǎn)與大腸桿菌體系所表達(dá)的Hydramacin-1[22]的抗菌特點(diǎn)相一致.本研究中的重組抗菌肽Hydramacin-1 相比于Defensing-TK[23](對金黃色葡萄球菌的 MIC 為3 μg/mL)和rMP1106[24](對金黃色葡萄球菌的MIC為0.06 μg/mL)等抗菌肽的抗菌活性，還需進(jìn)一步提高.目前主要是通過分子設(shè)計(jì)與結(jié)構(gòu)改造的方法來提高肽的生物活性[25-26]，例如氨基酸的替換，將一個或多個氨基酸經(jīng)定點(diǎn)突變技術(shù)替換為精氨酸、賴氨酸等帶正電的氨基酸，增加抗菌肽的帶正電性，進(jìn)而提高抗菌肽的生物活性.目前本實(shí)驗(yàn)室也正在對抗菌肽進(jìn)行定向改造，以期獲得活性更高的抗菌肽.

綜上所述，本研究首次成功制備了具有高效表達(dá)能力和較好生物活性的重組抗菌肽Hydramacin-1 的畢赤酵母表達(dá)菌株，為后續(xù)抗菌肽Hydramacin-1 更深入的科學(xué)研究和應(yīng)用奠定了基礎(chǔ).