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    酶解法制備鰻魚內(nèi)臟魚油及品質(zhì)分析*

    2019-08-19 08:09:50鐘佳澤師藝冰岑萬陳由強(qiáng)黃鷺強(qiáng)
    福建輕紡 2019年8期
    關(guān)鍵詞:鰻魚魚油副產(chǎn)物

    鐘佳澤,師藝冰,岑萬,陳由強(qiáng),黃鷺強(qiáng)

    (1.福建師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,福建 福州 350117 2.福建師范大學(xué)南方海洋研究院,福建 福州 350117)

    烤鰻是一種營養(yǎng)價(jià)值高、風(fēng)味好的即食水產(chǎn)品,在日本、韓國、中國香港等國家和地區(qū)深受消費(fèi)者歡迎。福建省是烤鰻加工和出口大省,目前烤鰻加工的大量副產(chǎn)物如魚頭、魚骨、內(nèi)臟等常作為魚粉的生產(chǎn)原料而未深度開發(fā)。但是,這些副產(chǎn)物含有豐富的蛋白質(zhì)、氨基酸、脂肪、微量元素和維生素等,其中鰻魚內(nèi)臟中不飽和脂肪酸含量較高并且富含二十碳五烯酸(DHA)和二十二碳六烯酸(EPA)等多不飽和脂肪酸[1],具有特殊的生理功能[2,3],是生產(chǎn)高品質(zhì)飼用魚油的良好原料。

    目前工業(yè)生產(chǎn)多采用蒸煮法[4]、壓榨法[5]、溶劑抽提法[6,7]、淡堿水解法[8,9]、酶解法[10,11]等方法制備魚油。酶解法[12]具有生產(chǎn)條件溫和、得率高、產(chǎn)品質(zhì)量好的特點(diǎn),蛋白酶水解原料產(chǎn)生的水解液富含氨基酸等物質(zhì),可以得到進(jìn)一步的利用。利用烤鰻副產(chǎn)物鰻魚內(nèi)臟提取不飽和脂肪酸的魚油,可以實(shí)現(xiàn)生產(chǎn)副產(chǎn)物的高值化利用,項(xiàng)目具有良好的經(jīng)濟(jì)、社會和生態(tài)效益。

    本研究以鰻魚內(nèi)臟為材料,采用酶解法研究粗魚油的制備及對魚油的品質(zhì)進(jìn)行分析,通過分析精煉魚油的主要理化指標(biāo)差異和精煉魚油的脂肪酸組成,為烤鰻加工副產(chǎn)物的綜合開發(fā)提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 原料

    鰻魚內(nèi)臟(-20℃冷凍保存),由福建福銘食品有限公司提供。

    1.1.2 試劑

    復(fù)合風(fēng)味蛋白酶(50000 U/g),廣州華琪生物科技有限公司;

    菠蘿蛋白酶(60000 U/g)、木瓜蛋白酶(50000 U/g),上海源葉生物科技有限公司。

    氫氧化鈉、鹽酸、磷酸、乙醇、乙醚、乙酸、異辛烷、硫代硫酸鈉、異辛烷、碘化鉀、硫代硫酸鈉、韋氏試劑、環(huán)己烷等,均為國產(chǎn)分析純,上海國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;

    高嶺土為食品級試劑,上海阿拉丁試劑有限公司。

    1.1.3 儀器

    電熱恒溫水浴鍋,金壇市易晨儀器制造有限公司;

    MQK-WSL-2羅維朋比色儀,上海精密科學(xué)儀器有限公司;

    高速離心機(jī),貝克曼湘儀離心機(jī)儀器(湖南)有限公司;

    pH計(jì),奧豪斯儀器(上海)有限公司;

    旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(帶真空泵),上海亞榮儀器有限公司;

    6890 N-5975C氣相色譜質(zhì)譜色譜儀,美國安捷倫科技有限公司。

    1.2 方法

    1.2.1 粗魚油制備及精煉

    鰻魚內(nèi)臟→原料預(yù)處理→酶解→滅酶→水和魚油混合物→離心分離→粗魚油→脫膠→脫酸→水洗→脫色→脫臭→精煉魚油

    1.2.2 原料預(yù)處理

    將冷凍保存的鰻魚內(nèi)臟用4 ℃低溫解凍,洗凈,切成2~3 cm的小段。

    1.2.3 酶解

    稱取魚油內(nèi)臟組織(濕基),按料液比(w∶w=1∶1)添加等質(zhì)量的水,攪拌均勻。用NaOH溶液和HCl溶液調(diào)節(jié)料液pH至7.0。酶解溫度為50 ℃,酶添加量為1.5%,酶解時(shí)間為2.0 h,在酶解過程中,隔15 min用玻璃棒攪拌15 s,促進(jìn)酶與底物接觸。

    1.2.4 滅酶

    將酶解后的料液置于100 ℃恒溫水浴中處理10 min滅酶。

    1.2.5 離心分離

    取酶解后的料液于離心管中,4000 r/min室溫離心15 min。離心后的魚油與水分層,用移液槍吸出上層的油,即粗魚油,將其置于樣品瓶中密封,冰箱4 ℃冷藏保存。

    1.2.6 脫膠

    取一定量的粗魚油,加入魚油量1%的濃度為60%的磷酸,在65 ℃恒溫水浴下加熱攪拌1 min,取出魚油在5000 r/min的速率下離心10 min,取出上層的油脂,得到脫膠魚油。

    1.2.7 脫酸

    將脫膠魚油加入體積為魚油量1%,濃度為20%的NaOH溶液,攪拌后升溫至65 ℃恒溫水浴加熱30 min。取出魚油在5000 r/min 速率下離心10 min,去除下層沉淀。再向魚油中加入一定量60 ℃的蒸餾水,洗去魚油中殘留的皂腳,然后在5000 r/min的速率下離心10 min,重復(fù)2次,取出上層的油,得到脫酸魚油。

    1.2.8 脫色

    將脫酸魚油加入一定量的高嶺土,攪拌均勻,65 ℃下加熱30 min,然后在5000 r/min的速率下離心10 min,取出上層油脂,得到脫色魚油。

    1.2.9 脫臭

    使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,在50 ℃真空條件下對脫色魚油進(jìn)行脫臭,得到精煉魚油。

    1.3 脂肪酸組成測定

    1.3.1 魚油甲酯化

    準(zhǔn)確稱取1.0 g精煉魚油,加入6 mL 5%鹽酸甲醇溶液,密封,隔絕外界空氣,于60 ℃恒溫水浴3 h,每隔0.5 h上下顛倒一次,充分混勻。結(jié)束后加入適量的水和正己烷,充分混勻,靜置,取上層有機(jī)相,氮吹干,再加入2 mL的正己烷溶解,用0.22μm濾膜過濾于樣品瓶中,用于后續(xù)檢測。

    1.3.2 脂肪酸組成測定

    用氣質(zhì)聯(lián)用儀,對魚油的脂肪酸組成進(jìn)行測定。

    柱類型和條件:SP2560 100 m×0.25 mm×0.2μm。

    色譜條件:升溫程序?yàn)橹鶞?0 ℃保持2 min后,以4 ℃/min升至100 ℃,保持1 min,再以5 ℃/min升至250 ℃,再保持12.5 min。進(jìn)樣口溫度220 ℃,分流比10∶1,載氣為氦氣,流速為 1 mL/min,進(jìn)樣量為1μL,采用峰面積歸一化法計(jì)算脂肪酸相對含量。

    1.4 魚油理化指標(biāo)的測定

    1.4.1 魚油得率的計(jì)算

    魚油得率的計(jì)算采用如下公式

    式中:F—魚油得率,%

    w1—粗魚油質(zhì)量,g

    w2—內(nèi)臟質(zhì)量,g

    1.4.2 色澤測定

    參照張麗等[13]使用羅維朋比色儀檢測油脂的黃值與紅值。

    1.4.3 酸值測定

    按照GB 5009.229-2016測定魚油酸值。

    1.4.4 碘值測定

    按照GB/T 5532-2008 測定魚油碘值。

    1.4.5 過氧化值測定

    按照LS/T 6106-2012 測定魚油過氧化值。

    1.4.6 魚油的理化指標(biāo)評定標(biāo)準(zhǔn)

    按照SC/T 3502-2016 對魚油進(jìn)行評價(jià),如表1所示。

    表1 魚油的理化指標(biāo)的規(guī)定

    1.5 數(shù)據(jù)處理

    數(shù)據(jù)分析與統(tǒng)計(jì)采用SPSS 19.0 軟件,用 Duncan氏多重比較法分析各實(shí)驗(yàn)組間的差異顯著性,圖表制作工具采用origin 8.5。數(shù)據(jù)處理均為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(n=3),柱形圖上標(biāo)有不同字母表示在0.05 水平有顯著差異。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 提取工藝

    2.1.1 蛋白酶

    在酶解溫度50 ℃,酶添加量為1.5%,酶解時(shí)間為2.0 h的條件下,選用木瓜蛋白酶、復(fù)合風(fēng)味蛋白酶、菠蘿蛋白酶進(jìn)行酶解試驗(yàn),結(jié)果見圖1。

    結(jié)果顯示,木瓜蛋白酶酶解未徹底,另外2組酶解較徹底。復(fù)合風(fēng)味蛋白酶的魚油得率最高,為14.0%,其次是菠蘿蛋白酶,木瓜蛋白酶效果最差。相對于木瓜蛋白酶和菠蘿蛋白酶,復(fù)合風(fēng)味蛋白酶酶解效果具有顯著差異(P<0.05)。

    圖1 不同種類的蛋白酶對應(yīng)的魚油提取率

    2.1.2 酶解溫度

    采用復(fù)合風(fēng)味蛋白酶,酶添加量為1.5%,酶解時(shí)間為2.0 h,設(shè)定5組溫度,結(jié)果見圖2。

    結(jié)果表明,溫度55 ℃以下,隨著溫度的升高,魚油得率呈現(xiàn)上升趨勢;55 ℃時(shí)達(dá)到最大值,魚油得率為15.5%;隨后魚油得率隨著溫度的升高而下降。推斷溫度過高導(dǎo)致酶活性降低,從而影響酶解效率。因此,選擇酶解溫度55 ℃時(shí)魚油得率最高,與其它溫度條件比較具有顯著性差異(P<0.05)。

    圖2 不同酶解溫度對魚油得率的影響

    2.1.3 酶解時(shí)間

    圖3 不同酶解時(shí)間對魚油得率的影響

    采用復(fù)合風(fēng)味蛋白酶,酶添加量為1.5%,溫度為55 ℃,設(shè)定酶解時(shí)長,結(jié)果見圖3。

    數(shù)據(jù)顯示,隨著酶解時(shí)間的延長,魚油得率不斷上升,最高得率為15.2%,超過2.0 h魚油得率沒有顯著性差異(p>0.05)。隨著酶解時(shí)間加長,魚油色澤加深,可能是魚油被空氣中的氧氣氧化所致。因此,綜合實(shí)際生產(chǎn)因素考慮,酶解時(shí)間為2.0 h適宜。

    2.1.4 酶添加量

    采用復(fù)合風(fēng)味蛋白酶,酶解時(shí)間為2.0 h,溫度為55 ℃,設(shè)定5組不同的酶添加量結(jié)果見圖4。

    由圖4可以看出,隨著酶添加量的增加,魚油得率上升,當(dāng)酶添加量為2% 時(shí),得率最高為15.7%;但當(dāng)酶添加量大于2% 時(shí),魚油的得率反而略有下降,這可能是蛋白酶添加過多導(dǎo)致其對自身有部分水解作用,導(dǎo)致酶活力降低。綜合各方面因素酶添加量為2%最為合適,其得率相對其它的酶添加量具有顯著性差異(P<0.05)。

    圖4 不同酶添加量對魚油得率的影響

    2.2 魚油的色澤

    經(jīng)羅維朋比色儀測定,發(fā)現(xiàn)魚油精煉前后的色澤變化明顯。黃值和紅值均有下降,紅值變?yōu)?,黃值大幅度下降,從10降到2,黃值和紅值的變化表明精煉魚油的脫色效果好。結(jié)果見表2。

    表2 精煉前后魚油色澤比較

    2.3 精煉前后魚油理化指標(biāo)

    魚油質(zhì)量可以通過魚油理化指標(biāo)高低來評價(jià),具體評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)見表1。

    動植物油脂酸價(jià)、過氧化值、碘價(jià)等高低反映了動植物油脂品質(zhì)。魚油經(jīng)過精煉步驟,可以去除游離脂肪酸,提高不飽和脂肪酸含量。從表3中可知,粗魚油酸值為(4.23±0.12) mg/g(<8 mg/g),精煉魚油的酸值為(0.12±0.02) mg/g(<1 mg/g);粗魚油的過氧化值為(7.08±0.23) mmol/kg,精煉魚油的過氧化值為(4.48±0.15)mmol/k(<5 mmol/kg),這些指標(biāo)均達(dá)到了SC/T 3502-2016 規(guī)定的一級魚油標(biāo)準(zhǔn)。

    表3 精煉前后魚油理化指標(biāo)比較

    2.4 魚油感官評價(jià)

    粗魚油顏色呈紅棕色,稍微渾濁,有較重的魚腥味和輕微酸敗味;精煉魚油呈淡黃色,不含雜質(zhì),具有特有的微腥味,沒有酸敗味。

    2.5 精煉后魚油脂肪酸組成

    精煉魚油經(jīng)甲酯化處理后,用氣質(zhì)聯(lián)用儀對其進(jìn)行脂肪酸組成進(jìn)行分析,結(jié)果見表4。

    從表4可知,鰻魚油主要由C14~C22十種脂肪酸組成,其中不飽和脂肪酸占魚油的比重達(dá)到62.42%,主要以十八碳烯酸為主,其含量為49.90%,可見鰻魚內(nèi)臟可作為提取十八碳烯酸的良好材料。多不飽和脂肪酸的含量達(dá)到9.78%,DHA和EPA含量占9.55%;飽和脂肪酸比例為32.23%,主要以十五酸和十六酸為主。

    表4 精煉魚油的脂肪酸組成

    3 小結(jié)與討論

    本研究采用酶解法從烤鰻加工副產(chǎn)物鰻魚內(nèi)臟中制備魚油,粗魚油通過脫膠、脫酸、脫臭等步驟進(jìn)行精煉,測定精煉前后魚油的主要理化指標(biāo),用氣質(zhì)聯(lián)用儀測定精煉后魚油的脂肪酸組成。

    通過對3種蛋白酶的實(shí)驗(yàn)比較,得出復(fù)合風(fēng)味蛋白酶酶解提油得率最高,此時(shí)酶解溫度55 ℃、酶解時(shí)間2 h、酶添加量2.0%,鰻魚內(nèi)臟魚油得率為15.7%。粗魚油通過精煉之后,魚油的酸值、過氧化值以及碘值分別為(0.12±0.02)mg/g、(4.48±0.15)mmol/kg以及(131.56±2.59)g/100g,除了碘值,其余都達(dá)到了SCT 3502-2016 規(guī)定的一級精煉魚油標(biāo)準(zhǔn),色澤得到改善,黃值從10降為2,紅值降為0。

    通過氣質(zhì)聯(lián)用儀對精煉魚油進(jìn)行檢測,得出:鰻魚油主要由C14~C22十種脂肪酸組成,其中,不飽和脂肪酸占魚油的比重占62.42%,以單不飽和脂肪酸十八碳烯酸為主。在多不飽和脂肪酸中,DHA和EPA含量占9.55%。飽和脂肪酸比重占32.23%,以十五酸和十六酸為主。

    利用酶解法從鰻魚內(nèi)臟中提取魚油,可綜合利用生產(chǎn)副產(chǎn)物,提高綜合效益。同時(shí),由于制備條件溫和,大大保留了魚油的功能性成分,可為進(jìn)一步研究和開發(fā)高品質(zhì)魚油產(chǎn)品提供思路。

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