雞大腸桿菌的分離鑒定及藥敏試驗

徐秋鳳

(河南省方城縣動物衛(wèi)生監(jiān)督所,河南方城 473200)

大腸桿菌病是以侵害腸道為主的原發(fā)性傳染病，由致病性大腸桿菌及其毒素引起，其中包括大腸桿菌輸卵管炎、腸炎、關節(jié)炎、腹膜炎等各種疾病，對養(yǎng)雞業(yè)危害極大。

2018年4月，方城縣博望鎮(zhèn)某雞場雞群出現(xiàn)精神萎靡不振、采食減少或不食、離群呆立或蹲伏不動、羽毛松亂、肛門周圍羽毛粘有糞便、綠色或黃白色稀糞、并陸續(xù)出現(xiàn)死亡，對病死雞進行剖檢觀察疑似為大腸桿菌病。但該雞場對此病癥治療狀況不佳。

因此，防止本病時應對分離到的大腸桿菌進行藥物敏感性試驗，在此基礎上篩選出高效藥物用以治療，才能收到預期的效果。本次試驗即對方城縣博望鎮(zhèn)范圍內(nèi)雞大腸桿菌的致病群進行分離鑒定及藥敏試驗，起到對全縣養(yǎng)殖場（戶）雞大腸桿菌病的提供有效幫助。

1 試驗準備

1.1 選取材料

（1）樣品的采集：通過對我縣博望鎮(zhèn)某雞場送檢的疑似大腸桿菌病的病料進行樣品采集，死亡雞只死亡時間不超過24h。

（2）試劑準備：麥康凱瓊脂培養(yǎng)基及生化試劑均由市場采購。

（3）藥片準備：采用市售的多粘霉素E、螺旋霉素、新霉素等含藥紙片。

（4）實驗動物選用昆明系小白鼠雌雄各6只。

1.2 試驗方法

1.2.1 病株的分離與培養(yǎng) 將提前采集的心血、肝、脾、等樣品接種在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上，于恒溫箱內(nèi)37℃培養(yǎng)18～24h，觀察菌落生成情況，從培養(yǎng)基上挑取粉紅色、表面光滑的單個菌落分別接種到營養(yǎng)瓊脂斜面上，于恒溫箱內(nèi)37℃培養(yǎng)18～24h后，置冰箱備用。

1.2.2 染色鏡檢 將以上所得的菌株分別進行涂片，革蘭氏染色后鏡檢，通過觀察細菌形態(tài)和染色特征，選取符合大腸桿菌形態(tài)特征的菌株進行生化實驗。

1.2.3 生化試驗 用分離出的純培養(yǎng)物進行吲哚試驗、枸櫞酸鹽試驗、MR試驗、VR試驗、糖發(fā)酵試驗，根據(jù)觀察變化記錄結果。

1.2.4 毒力實驗 選取通過鏡檢及生化反應的大腸桿菌特性的菌株接種營養(yǎng)瓊脂平板，于恒溫箱內(nèi)37℃培養(yǎng)18h，將菌落制成菌懸液。選取小白鼠公母各3只，一組每只皮下注射0.2ml菌懸液，另一組注射相同劑量的無菌生理鹽水。觀察將1～2d內(nèi)死亡的小鼠立即解剖，采取其心血接種于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，于恒溫箱內(nèi)37℃培養(yǎng)18h，并對分離出的菌株進一步鑒定。

1.2.5 藥敏試驗 將0.1ml稀釋好的菌液接種到平板上，讓菌液均勻鋪滿平板，待干后，將5張藥片貼于一個平板上，每藥片間距3cm之上，全部貼好后置于37℃的恒溫箱中培養(yǎng)18～24h，取出后觀察實驗結果測量每個藥片的抑菌圈直徑，做好記錄，最后依據(jù)藥物的判定標準，判定藥物的敏感度及耐藥性結果。

2 試驗結果

2.1 分離培養(yǎng)情況

培養(yǎng)后可在培養(yǎng)基上發(fā)現(xiàn)邊緣整齊、表面濕潤光滑、呈粉紅色的菌落；在普通瓊脂培養(yǎng)基上出現(xiàn)了濕潤光滑、整齊、圓形、隆起、灰白色的菌落，其菌落特征與大腸桿菌的特征相符。

2.2 染色鏡檢情況

通過革蘭氏染色分離菌株顯示陰性小桿菌，多單個存在，兩端鈍圓，菌株的染色鏡檢與大腸桿菌染色特性相吻合。

2.3 生化試驗鑒定情況

分離出菌株的生化試驗結果能發(fā)酵麥芽糖、乳糖、葡萄糖、甘露醇，均能產(chǎn)酸產(chǎn)氣，大多數(shù)菌株不發(fā)酵蔗糖，少數(shù)緩慢發(fā)酵，VP實驗、枸櫞酸鹽試驗均為陰性，MR試驗、吲哚試驗均為陽性，以上試驗結果可以證明分離出的菌株為大腸桿菌。

2.4 毒力試驗情況

用菌懸液體接種試驗組的小白鼠，于接種后2小時出現(xiàn)精神萎靡，接著出現(xiàn)拉稀腹瀉等臨床癥狀，接種1天后開始1只死亡，2天內(nèi)6只全部死亡，對死小白鼠進行解剖，均見其肝臟腫大，內(nèi)臟淤血，在心、肝中分離出大腸桿菌，而對照組的6只小白鼠無明顯變化，由此可見，從雞內(nèi)臟分離出的大腸桿菌均有較強的致病性。

2.5 藥敏試驗情況

用19種藥物對分離出的菌株進行藥敏試驗，其結果如附表所示。

附表 分離菌株的藥物敏感性實驗結果 （mm）

結果表明，分離菌對慶大霉素、卡那霉素、阿莫西林、新霉素、氨芐青霉素、復方新諾明、強力霉素7種藥物具有耐藥性，對多粘菌素E、阿奇霉素、頭孢噻肟、羅紅霉素、螺旋霉素、頭孢拉啶6種藥物較為敏感，其它藥物中度敏感。

3 討論

（1）通過對我縣博望鎮(zhèn)某雞場發(fā)生的疑似大腸桿菌病樣品的試驗，從菌株特征、染色鏡檢、生化試驗、毒力試驗幾個方面來看均和大腸桿菌特征相符，且有較強的致病性。

（2）藥敏試驗結果表明大腸桿菌分離菌株對多粘菌素E、阿奇霉素、頭孢噻肟、羅紅霉素、螺旋霉素、頭孢拉啶6種藥物較為敏感，對慶大霉素、卡那霉素、阿莫西林、新霉素、氨芐青霉素、復方新諾明、強力霉素7種藥物具有耐藥性，對其它的藥物中度敏感，這為預防和治療該病提供了理論依據(jù)。

4 防治措施

（1）通過使用敏感藥物多粘菌素E、阿奇霉素、頭孢噻肟、羅紅霉素、螺旋霉素、頭孢拉啶進行雞大腸桿菌治療取得了理想的效果，在以后的用藥中建議根據(jù)實際情況交替用藥，以防耐藥情況發(fā)生。

（2）利用分離出菌株培養(yǎng)后制成自家菌滅活苗，于7～15日齡、30日齡、120日齡各免疫一次，可取得良好的效果。

（3）加強消毒，采用戊二醛、聚維酮碘等消毒劑定期消毒。

（4）采用中草藥預防抗生素治療。平時采用黃連、黃芩、黃柏、紅花、白頭翁、板藍根、大蒜等預防，以減少耐藥性，發(fā)病時采用抗生素治療。

（5）提高科學飼養(yǎng)管理能力，全方位提升管理水平，嚴格執(zhí)行消毒制度，搞好環(huán)境衛(wèi)生，按免疫程序科學防疫，加強雞場群體的抗病能力，達到預防和減少疫病發(fā)生，增加養(yǎng)殖效益之目的。