口腔鱗癌中EIF3e和MMP-12的表達(dá)意義

李 凱 馬 鍇

(三亞市人民醫(yī)院口腔科，三亞572000)

口腔癌中最常見的類型是鱗狀細(xì)胞癌，好發(fā)于中老年人，臨床癥狀出現(xiàn)的時(shí)間不同，病變形成后預(yù)后差。近年研究認(rèn)為真核翻譯起始因子家族中的相關(guān)成員與腫瘤的形成可能有關(guān)[1]。真核翻譯起始因子3e(Eukaryotic translation initiation factor 3e,EIF3e)是該家族中的重要成員，與腫瘤發(fā)生相關(guān)，對(duì)細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)變有重要意義，EIF3e還能促進(jìn)細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移[2]。基質(zhì)金屬蛋白酶-12(Matrix metalloprotein-12，MMP-12)是MMPs家族中的重要成員，對(duì)Ⅳ型膠原和基底膜降解作用最強(qiáng)，能破壞腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的屏障，誘發(fā)腫瘤的轉(zhuǎn)移[3,4]。本研究應(yīng)用免疫組化方法對(duì)口腔鱗癌中EIF3e和MMP-12的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1資料 選擇在我院2013年1月～2014年10月期間行手術(shù)治療，經(jīng)病理醫(yī)師確診為口腔鱗癌的83例患者作為觀察組，年齡范圍45～87歲，平均(59.4±9.5)歲，其中男性43例，女性40例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合口腔鱗癌的病理診斷標(biāo)準(zhǔn)及分型；②患者或家屬知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①術(shù)前放、化療；②既往有口腔手術(shù)史；③先天發(fā)育異?；蚱渌鞴賽盒阅[瘤。選擇39例距腫物邊緣>5 cm，并經(jīng)病理醫(yī)師閱片確診為正常的口腔黏膜組織作為對(duì)照組，年齡50～80歲，平均(60.1±8.4)歲。其中男性20例，女性19例。2組在常規(guī)資料的比較中差異無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2方法

1.2.1EIF3e和MMP-12表達(dá)的檢測(cè) 留取的組織均經(jīng)常規(guī)取材、脫水、石蠟包埋并切取4 μm的石蠟切片。EIF3e和MMP-12的濃縮液試劑均購自睿贏生物技術(shù)公司。檢測(cè)方法為免疫組化SP法。先行預(yù)實(shí)驗(yàn)，選擇預(yù)實(shí)驗(yàn)中表達(dá)最理想的濃度行正式實(shí)驗(yàn)，即EIF3e(1∶250)、MMP-12(1∶250)。EIF3e和MMP-12的檢測(cè)按說明書操作，DAB顯色，操作均由同一實(shí)驗(yàn)師一次性完成，減少人為誤差。

1.2.2EIF3e和MMP-12結(jié)果判讀 EIF3e和MMP-12的顯色定位是細(xì)胞漿和(或)細(xì)胞膜。以淡黃、黃和棕黃色為陽性細(xì)胞。以著色強(qiáng)度和著色細(xì)胞百分率的評(píng)分相加作為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。著色強(qiáng)度：無著色為0分；弱著色(淡黃)為1分，中等程度著色(黃)為2分，強(qiáng)著色(棕黃)為3分。著色細(xì)胞百分率：選擇熱點(diǎn)區(qū)進(jìn)行觀察，共選擇5個(gè)視野，取平均值，以<5%為0分，5%～25%為1分，以26%～50%為2分，以51%～75%為3分，以>75%為4分。以二者評(píng)分之和≤3分為陰性，以>3分為陽性。

1.2.3相關(guān)臨床病理指標(biāo)的判定方法 腫瘤最大徑由病理醫(yī)師取材時(shí)測(cè)量，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移HE切片由病理醫(yī)師閱片判定，脈管累犯均經(jīng)CD34(工作液購自北京中杉金橋公司)，標(biāo)記血管內(nèi)皮后由病理醫(yī)師閱片判定(病理報(bào)告中均未顯示)。Ki67指數(shù)的判定由病理報(bào)告中獲取，其方法為免疫組化法(工作液購自北京中杉金橋公司)。炎癥細(xì)胞浸潤程度為腫瘤間質(zhì)中炎癥細(xì)胞的數(shù)量，均由病理醫(yī)師再次閱片明確，以間質(zhì)浸潤<1/2為輕度，以間質(zhì)浸潤≥1/2為重度。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 數(shù)據(jù)應(yīng)用SAS6.12完成，率的比較行χ2檢驗(yàn)，并進(jìn)行線性相關(guān)分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1兩組中EIF3e和MMP-12的比較 兩組中EIF3e和MMP-12的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。即觀察組中EIF3e和MMP-12的表達(dá)明顯高于對(duì)照組，見表1、圖1～3。

2.2觀察組不同臨床及病理特征分組中EIF3e和MMP-12表達(dá)的比較 觀察組中EIF3e和MMP-12的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(HE切片)和脈管累犯(免疫組化行CD34后判定)相關(guān)，EIF3e的表達(dá)與Ki67指數(shù)(免疫組化方法)、腫瘤最大徑(病理醫(yī)師取材時(shí)測(cè)量)相關(guān)，MMP-12與間質(zhì)的炎癥細(xì)胞浸潤程度(HE切片)相關(guān)。二者均與分化程度無關(guān)，見表2。

2.3觀察組中EIF3e和MMP-12的相關(guān)性 相關(guān)分析顯示EIF3e和MMP-12之間具有正相關(guān)性(r=0.46，P=0.040 9)，見圖4。

2.4觀察組中EIF3e和MMP-12的表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系 本組患者隨訪時(shí)間6～60個(gè)月，平均25.4個(gè)月。經(jīng)生存分析顯示，EIF3e和MMP-12的表達(dá)與預(yù)后相關(guān)，即EIF3e和MMP-12高表達(dá)患者的預(yù)后差，見圖5、6。

表1 兩組中EIF3e和MMP-12的比較

Tab.1 Comparison of EIF3e and MMP-12 in two groups

GroupsnEIF3e+(%)-(%)χ2PMMP-12+(%)-(%)χ2PObservation group8341(49.4%)42(50.6%)16.3610.00035(42.2%)48(57.8%)17.2280.000Control group393(7.7%)36(92.3%)2(5.1%)37(94.9%)

圖1 口腔鱗癌和正?？谇击[狀上皮組織HE染色Fig.1 Images for HE stain of oral squamous cell carcinoma (A) and normal oral squamous epithelium(B)

圖2 口腔鱗癌和正?？谇击[狀上皮組織中EIF3e的免疫組化檢測(cè)結(jié)果Fig.2 IHC localization of EIF3e in oral squamous cell carcinoma(A) and normal tissue(B)

表2 觀察組不同臨床及病理特征分組中EIF3e和MMP-12表達(dá)的比較

Tab.2 Comparison of EIF3e and MMP-12 in different clinical and pathological characteristic in observation group

CharacteristicnEIF3e+(%)-(%)χ2PMMP-12+(%)-(%)χ2PMetastasisNo6025(41.7%)35(58.3%)5.1770.02318(30.0%)42(70.0%)13.1470.000Yes2316(69.6%)7(30.4%)17(73.9%)6(26.1%)Vascular recidivismNo6830(44.1%)38(55.9%)4.1960.04123(33.8%)45(66.2%)10.7450.001Yes1511(73.3%)4(26.7%)12(80.0%)3(20.0%)Maximum diameter<5 cm3819(39.6%)29(60.4%)9.3220.00212(31.6%)26(68.4%)3.2230.073≥5 cm4532(71.1%)13(28.9%)23(51.1%)22(48.9%)DifferentiationHigh-medium2213(59.1%)9(40.9%)0.2100.64610(45.5%)12(54.5%)0.1330.716Low6138(53.5%)33(46.5%)25(41.0%)36(59.0%)Ki67 index<50%339(27.3%)24(72.7%)10.7280.00115(45.5%)18(54.5%)0.2430.622≥50%5032(64.0%)18(36.0%)20(40.0%)30(60.0%)Inflammatory cell infiltration(HE stain)Light5326(49.1%)27(50.9%)0.0070.93414(26.4%)39(73.6%)14.9220.000Heavy3015(50.0%)15(50.0%)21 (70.0%)9(30.0%)

表3 觀察組中EIF3e和MMP-12的相關(guān)性

Tab.3 Relationship of EIF3e and MMP-12 in observa-tion group

EIF3eMMP-12+-Total+291241-63642Total354883

圖3 口腔鱗癌和正?？谇击[狀上皮組織中MMP-12的免疫組化檢測(cè)結(jié)果Fig.3 IHC localization of MMP-12 in oral squamous cell carcinoma(A) and normal tissue(B)

圖4 EIF3e和MMP-12的相關(guān)性分布圖Fig.4 Correlation between EIF3e and MMP-12

圖5 口腔鱗癌中EIF3e的表達(dá)與生存時(shí)間的關(guān)系Fig.5 Relationship between EIF3e expression and survival time in oral squamous carcinoma

圖6 口腔鱗癌中MMP-12的表達(dá)與生存時(shí)間的關(guān)系Fig.6 Relationship between MMP-12 expression and survival time in oral squamous carcinoma

3 討論

口腔鱗癌的形成與浸潤、炎性刺激及反應(yīng)損傷修復(fù)相關(guān)，病變形成后繼發(fā)直接浸潤及轉(zhuǎn)移。組織病理學(xué)上可見較多不同分化程度的腺管樣結(jié)構(gòu)，低分化腫瘤可以觀察到彌漫分布區(qū)。腫瘤細(xì)胞異型性明顯[5]。病變的進(jìn)展與蛋白的異常表達(dá)有關(guān)。翻譯起始階段40S核糖體是近年關(guān)注的重要因子，作用過程需相關(guān)因子的輔助。相關(guān)輔助因子包括C-Myc和血管內(nèi)皮生長因子等[6]。EIF3e是翻譯起始因子家族的重要成員，是EIF3復(fù)合物的一個(gè)組件，其功能核心由3個(gè)非保守的亞單元共同組成[7]。EIF3e通過誘導(dǎo)細(xì)胞周期停止凋亡來沉默細(xì)胞的增殖。EIF3e是翻譯起始必需的。蛋白質(zhì)合成機(jī)制和翻譯控制改變，可以引起mRNA選擇性地翻譯，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生存、血管新生和轉(zhuǎn)化[8]。轉(zhuǎn)錄因子常與致癌基因在結(jié)構(gòu)和功能上相互影響，且常存在于腫瘤癌變過程中[9]。MMP-12最初認(rèn)為是由炎性巨噬細(xì)胞分泌的一種促彈性纖維溶解的金屬蛋白酶，具有底物特異性，其降解的效果較明顯，作用較強(qiáng)。MMP-12通過水解纖維蛋白后形成血管激活因子[10,11]。有學(xué)者認(rèn)為MMP-12基因結(jié)構(gòu)變異時(shí)能與啟動(dòng)子激活蛋白-1結(jié)合，增強(qiáng)轉(zhuǎn)錄的活性，并使MMP-12的表達(dá)增高，促進(jìn)腫瘤的生長[12]。

本研究結(jié)果顯示觀察組中EIF3e和MMP-12的表達(dá)明顯高于對(duì)照組，提示二者高表達(dá)可以促進(jìn)腫瘤的形成過程。二者均有類似癌基因樣的作用。EIF3e和MMP-12可以對(duì)浸潤性病變形成發(fā)揮促進(jìn)作用。鱗狀上皮形成浸潤性腫瘤后呈樹枝狀向周圍組織生長，對(duì)局部組織和周圍鄰近器官形成明顯的破壞作用，也可以對(duì)周圍組織侵犯起一定的促進(jìn)作用，EIF3e在一定程度上發(fā)揮更明顯的作用[13,14]。結(jié)果顯示觀察組中EIF3e和MMP-12的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和脈管累犯相關(guān)，提示二者可以促進(jìn)腫瘤的遷移。Kim等[15]發(fā)現(xiàn)頭頸部鱗狀細(xì)胞癌中MMP-12高表達(dá)具有促進(jìn)腫瘤生長的作用，可能對(duì)預(yù)示轉(zhuǎn)移有一定價(jià)值。結(jié)果顯示EIF3e的表達(dá)與Ki67指數(shù)、腫瘤最大徑相關(guān)，提示EIF3e可以促進(jìn)腫瘤的生長，進(jìn)而引起腫瘤細(xì)胞增殖，使腫瘤細(xì)胞繁殖加快，腫瘤體積增大。結(jié)果顯示MMP-12與間質(zhì)的炎癥細(xì)胞浸潤程度相關(guān)，提示MMP-12可能參與間質(zhì)的炎性反應(yīng)過程。間質(zhì)反應(yīng)與腫瘤的侵襲相關(guān)。結(jié)果顯示觀察組中EIF3e和MMP-12的表達(dá)呈正相關(guān)，提示二者間具有協(xié)同正向作用，共同促進(jìn)腫瘤的發(fā)展，EIF3e可能是通過調(diào)節(jié)MMP-12發(fā)揮促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移的作用。由于以上因素均與腫瘤的生物學(xué)行為相關(guān)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果也證實(shí)了二者聯(lián)合檢測(cè)對(duì)預(yù)后判斷的價(jià)值，即二者高表達(dá)的患者預(yù)后較差。Han等[16]通過研究食管鱗癌中MMP-12的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)其表達(dá)升高，認(rèn)為MMP-12是腫瘤生長的促進(jìn)因素，可能是一個(gè)潛在的治療靶點(diǎn)，進(jìn)一步研究其作用可能有重要意義。

總之，EIF3e和MMP-12在口腔鱗癌中表達(dá)升高，二者具有正相關(guān)性，促進(jìn)病變的形成和進(jìn)展，二者聯(lián)合檢測(cè)對(duì)判斷預(yù)后有一定價(jià)值。