ALDH1和Musashi-1在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及相關(guān)性研究

黃霽 舒寬勇 鄧秀娟 官定金

[摘要] 探討ALDH1和Musashi-1在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)情況和相互關(guān)系及評(píng)估預(yù)后價(jià)值。 方法 運(yùn)用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)116例子宮內(nèi)膜癌組織中ALDH1和Musashi-1的表達(dá)，分析ALDH1和Musashi-1的表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系及兩者之間的相關(guān)性，并評(píng)估兩者在子宮內(nèi)膜癌預(yù)后中的價(jià)值。 結(jié)果 （1）116例子宮內(nèi)膜癌組織標(biāo)本中ALDH1表達(dá)63例（54.31%），其中低表達(dá)33例（28.45%），中高表達(dá)30例（25.86%）;（2）116例子宮內(nèi)膜癌組織標(biāo)本中Musashi-1表達(dá)83例（71.55%），其中低表達(dá)40例（34.48%），中高表達(dá)43例（45.69%）;（3）ALDH1的表達(dá)在子宮內(nèi)膜癌不同F(xiàn)IGO分級(jí)、組織學(xué)分級(jí)、肌層浸潤(rùn)程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)和脈管浸潤(rùn)中差異顯著（P<0.05）;Musashi-1的表達(dá)在子宮內(nèi)膜癌不同F(xiàn)IGO分級(jí)、組織學(xué)分級(jí)、肌層浸潤(rùn)程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)和脈管浸潤(rùn)中差異亦顯著（P<0.05）;（4）等級(jí)相關(guān)分析顯示ALDH1和Musashi-1在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)顯著正相關(guān)（r=0.262，P=0.004）;（5）Kaplan-Meier生存曲線(xiàn)顯示：ALDH1和Musashi-1中高表達(dá)組患者生存率顯著低于無(wú)表達(dá)組和低表達(dá)組。 結(jié)論 ALDH1和Musashi-1在子宮內(nèi)膜癌中呈高表達(dá)，兩者呈正相關(guān)性，并與子宮內(nèi)膜癌患者的預(yù)后呈負(fù)相關(guān)。ALDH1和Musashi-1高表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的生長(zhǎng)浸潤(rùn)行為相關(guān)，可能與患者預(yù)后密切相關(guān)。通過(guò)檢測(cè)的ALDH1和Musashi-1表達(dá)有助于子宮內(nèi)膜癌的早期發(fā)現(xiàn)及預(yù)后評(píng)估，為今后臨床腫瘤的靶向治療提供新思路。

[關(guān)鍵詞] 子宮內(nèi)膜癌;ALDH1;Musashi-1;免疫組化

[中圖分類(lèi)號(hào)] R737.33? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1673-9701（2019）16-0004-05

[Abstract] Objective To investigate the expression and correlation between ALDH1 and Musashi-1 in endometrial carcinoma and to evaluate the prognostic value. Methods Immunohistochemistry was used to detect the expression of ALDH1 and Musashi-1 in 116 cases of endometrial carcinoma. The relationship between the expression of ALDH1 and Musashi-1 and the clinicopathological parameters of endometrial carcinoma and the correlation between them were analyzed. The value of both in the prognosis of endometrial carcinoma was evaluated. Results （1）There were 63 cases（54.31%）of ALDH1 expression in 116 tissue specimens of endometrial carcinoma， with 30 cases（28.45%） of low expression， and 33 cases（25.86%） of moderate and high expression; （2）There were 83 cases（71.55%）of the expression of Musashi-1 in 116 tissue specimens of endometrial carcinoma， with 40 cases（34.48%） of low expression， and 43 cases（45.69%） of moderate and high expression;（3）The expression of ALDH1 was significantly different in different FIGO grades， histological grades， degrees of myometrial invasion， lymph node metastasis and vascular invasion of endometrial carcinoma（P<0.05）; the expression of Musashi-1 was also significantly different in different FIGO grades， histological grades， myometrial invasion， lymph node metastasis and vascular invasion in endometrial carcinoma（P<0.05）; （4）According to the grade correlation analysis， there was a significant positive correlation between ALDH1 and Musashi-1 expression in endometrial carcinoma（r=0.262， P=0.004）;（5）According to the Kaplan-Meier survival curve， the survival rate of patients in the group of moderate and high expression of ALDH1 and Musashi-1 was significantly lower than that in non-expression group and low expression group. Conclusion ALDH1 and Musashi-1 are highly expressed in endometrial carcinoma. The two were positively correlated between each other， but were negatively correlated with the prognosis of patients with endometrial carcinoma. High expression of ALDH1 and Musashi-1 is associated with the growth and invasive behavior of endometrial carcinoma， and may be closely related to the prognosis of patients. The detection of ALDH1 and Musashi-1 expression contributes to the early detection and prognosis evaluation of endometrial carcinoma， so as to provide new ideas for targeted clinical therapy of tumors in the future.

[Key words] Endometrial carcinoma;ALDH1;Musashi-1;Immunohistochemistry

子宮內(nèi)膜癌是發(fā)生于子宮內(nèi)膜的一組上皮性腫瘤，為女性生殖道三大惡性腫瘤之一，占女性全身惡性腫瘤的7%，占女性生殖道惡性腫瘤的20%～30%。平均發(fā)病年齡60歲，約75%發(fā)生于50歲以上婦女[1]。隨著我國(guó)人口老齡化，子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率呈現(xiàn)上升的趨勢(shì)，且發(fā)病年齡日趨年輕化。在一些發(fā)達(dá)國(guó)家是發(fā)病率居首位的婦科惡性腫瘤，在我國(guó)其發(fā)病率僅次于宮頸癌。如果在早期診斷規(guī)范治療后，5年的生存率高達(dá)80%。然而因早期癥狀不明顯或不典型，很多患者就診時(shí)已錯(cuò)過(guò)最佳治療時(shí)機(jī)，5年生存率明顯下降[2-3]。本研究通過(guò)檢測(cè)ALDH1和Musashi-1在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)情況，分析其之間的相關(guān)性，探討兩者在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后方面的意義。

1 材料與方法

1.1 材料來(lái)源

收集子宮內(nèi)膜癌病例及蠟塊，整理臨床病理參數(shù)及隨訪(fǎng)資料。入選標(biāo)準(zhǔn)：本院2010年1月～2015年12月手術(shù)切除并經(jīng)病理證實(shí)的116例子宮內(nèi)膜癌及癌旁正常子宮內(nèi)膜組織的存檔臘塊，制作成組織芯片。子宮內(nèi)膜癌患者平均年齡（54.00±8.62）歲，術(shù)前均未進(jìn)行放射治療、化學(xué)治療及性激素類(lèi)藥物治療。正常子宮內(nèi)膜來(lái)自相應(yīng)患者的癌旁組織。根據(jù)FIGO標(biāo)準(zhǔn)，Ⅰ期患者98例、Ⅱ期8例、Ⅲ～Ⅳ期10例;根據(jù)組織學(xué)分級(jí)，G1（高分化）23例、G2（中分化）73例、G3（低分化）20例。所選子宮內(nèi)膜癌患者中，脈管浸潤(rùn)37例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移9例。由2名病理科醫(yī)師對(duì)所選的病理切片再次復(fù)核。

1.2 主要試劑

兔抗人ALDH1單克隆抗體和兔抗人Musashi-1單克隆抗體購(gòu)自英國(guó)abcam公司;染色試劑盒及DAB顯色試劑盒購(gòu)于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3 方法

采用MaxVisionTM/HRP兩步法免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)子宮內(nèi)膜癌及癌旁組織中ALDH1和Musashi-1蛋白的表達(dá)情況。主要步驟：所選蠟塊標(biāo)本連續(xù)切片3 μm，HE染色。穿刺針鉆取靶點(diǎn)組織，制作組織芯片，60℃烤箱烘片4 h，然后二甲苯脫蠟至梯度酒精至水化;采用檸檬酸鹽緩沖抗原修復(fù)液煮沸3 min后進(jìn)行抗原修復(fù)，DAB 溶液顯色5 min后，用蘇木精進(jìn)行復(fù)染，最后封片。

1.4 染色結(jié)果判讀及評(píng)分

使用顯微攝像計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)在每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中的陽(yáng)性細(xì)胞，換算成百分比計(jì)數(shù)并取平均值。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)：<10%為0分; 10%～30%為1分;31%～50%為2分;>50%為3分。染色強(qiáng)度：0分：無(wú)染色;1 分：淡黃色;2分：黃色;3分：棕黃色。兩者的乘積即為表達(dá)強(qiáng)度：0分：陰性;1～3分：弱陽(yáng)性為低表達(dá);4～6分：陽(yáng)性為中等表達(dá);7～9分：強(qiáng)陽(yáng)性為高表達(dá)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。ALDH1和Musashi-1在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及其與臨床病理參數(shù)間的關(guān)系采用χ2檢驗(yàn)及χ2趨勢(shì)檢驗(yàn);ALDH1和Musashi-1表達(dá)之間的相關(guān)性采用Spearman相關(guān)性分析。生存曲線(xiàn)用Kaplan-Meier法;P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ALDH1和Musashi-1在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)情況

ALDH1：低表達(dá)33例（33/116，28.45%），中等表達(dá)16例（16/116，25.86%），高表達(dá)14例（14/116，9.48%），總陽(yáng)性表達(dá)率為54.31%（63/116）（封三圖1：A、B、C）。Musashi-1：低表達(dá)40例（40/116，34.48%），中等表達(dá)24例（24/116，20.69%），高表達(dá)19例（19/116，16.38%），總陽(yáng)性表達(dá)率為71.55%（83/116）（封三圖2：D、E、F）。

2.2 ALDH1和Musashi-1的表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌患者各臨床病理參數(shù)間的關(guān)系

ALDH1和Musashi-1在子宮內(nèi)膜癌患者不同妊娠史、年齡的表達(dá)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。ALDH1在子宮內(nèi)膜癌不同F(xiàn)IGO分期（χ2=5.418，P=0.020）、組織學(xué)分級(jí)（χ2=9.291，P=0.002）、肌層浸潤(rùn)深度（χ2=5.54，P=0.019）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)（χ2=4.70，P=0.03）和脈管浸潤(rùn)狀態(tài)（χ2=15.69，P=0.0001）的表達(dá)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。Musashi-1在子宮內(nèi)膜癌不同F(xiàn)IGO分期（χ2=5.73，P=0.017）、組織學(xué)分級(jí)（χ2=11.682，P=0.001）、肌層浸潤(rùn)深度（χ2=7.65，P=0.006）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)（χ2=3.88，P=0.049）和脈管浸潤(rùn)狀態(tài)（χ2=3.99，P=0.046）的表達(dá)，差異也均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表1、2。

2.3 ALDH1和Musashi-1在子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)的相關(guān)性

在116例子宮內(nèi)膜組織中，ALDH1與Musashi-1陽(yáng)性者47例，二者同時(shí)陰性者17例，ALDH1陽(yáng)性同時(shí)Musashi-1陰性者16例，ALDH1陰性同時(shí)Musashi-1陽(yáng)性者36例，Spearman 等級(jí)相關(guān)分析顯示：ALDH1和Musashi-1在子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.262，P=0.004）。見(jiàn)表3。

2.4 ALDH1和Musashi-1在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌患者生存時(shí)間之間的關(guān)系

116例子宮內(nèi)膜癌病例共隨訪(fǎng)40～108個(gè)月，死亡17例，平均生存時(shí)間57.42個(gè)月。分別將ALDH1和Musashi-1表達(dá)分為（陰性組和低表達(dá)組）、（中表達(dá)和高表達(dá)組），制作出Kaplan-Meier生存曲線(xiàn)，結(jié)果顯示：ALDH1陰性組和低表達(dá)組平均生存時(shí)間62.23個(gè)月（隨訪(fǎng)期間內(nèi)），中表達(dá)和高表達(dá)組46.50個(gè)月（隨訪(fǎng)期間內(nèi)），ALDH1中表達(dá)和高表達(dá)患者的生存時(shí)間較陰性組和低表達(dá)組患者顯著減少（P=0.000，封三圖3）;Musashi-1陰性組和低表達(dá)組平均生存時(shí)間67.52 個(gè)月，中表達(dá)和高表達(dá)組平均生存時(shí)間為 45.95個(gè)月，Musashi-1中表達(dá)和高表達(dá)患者的生存時(shí)間較陰性組和低表達(dá)患者顯著減少（P=0.007，封三圖4）。