10廠家小劑量阿司匹林腸溶片含量及水楊酸限量對(duì)比分析*

劉泳珊，陳小祝，梁偉光，張焰明 ，聶 鑫△

（1.廣東省佛山市南海區(qū)人民醫(yī)院，廣東 佛山 528200； 2.佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院，廣東 佛山 528000）

阿司匹林酸性較強(qiáng)，小劑量長(zhǎng)期應(yīng)用會(huì)導(dǎo)致胃潰瘍、消化道出血和小腸黏膜糜爛等[1-8]，且在生產(chǎn)和貯存過(guò)程中又易水解為水楊酸，對(duì)胃黏膜有更強(qiáng)的刺激性和損傷[9]。因此小劑量阿司匹林腸溶片中阿司匹林含量和水楊酸限量的控制尤為重要。目前，國(guó)內(nèi)小劑量阿司匹林腸溶片生產(chǎn)廠家眾多，本研究中參考文獻(xiàn)[10-14]，建立了雙波長(zhǎng)紫外分光光度測(cè)定法，快速測(cè)定小劑量阿司匹林腸溶片中阿司匹林含量和水楊酸限量?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

UV-1600PC型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海美譜達(dá)儀器有限公司）；BS-110S型分析天平（十萬(wàn)分之一，北京賽多利斯天平有限公司）；SK2200H型超聲清洗器（上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司）；DHG-9240A型恒溫干燥箱（鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司）。

1.2 試藥

阿司匹林對(duì)照品（批號(hào)為100113-201405），水楊酸對(duì)照品（批號(hào)為100106-201104），均購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院；阿司匹林腸溶片（市售），生產(chǎn)廠家及批號(hào)見(jiàn)表1；乙醇等均為分析純。

表1 阿司匹林腸溶片的生產(chǎn)廠家及批號(hào)

2 方法與結(jié)果

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)確定

稱取適量阿司匹林對(duì)照品和水楊酸對(duì)照品，用適量乙醇分別溶解，在230～360 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，結(jié)果阿司匹林最大吸收波長(zhǎng)為275 nm，此時(shí)水楊酸也有吸收。為了消除水楊酸的干擾，同時(shí)選擇325 nm波長(zhǎng)，且水楊酸吸光度（A）與275 nm波長(zhǎng)處相等，但阿司匹林A值很小，而與275 nm波長(zhǎng)處的A值相差很大，故阿司匹林測(cè)定雙波長(zhǎng)確定為275 nm和325 nm。水楊酸的最大吸收波長(zhǎng)為304 nm，此處阿司匹林的A值接近基線，可忽略不計(jì)，故水楊酸測(cè)定波長(zhǎng)確定為304 nm。紫外吸收光譜見(jiàn)圖1。

圖1 紫外吸收光譜圖

2.2 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：取阿司匹林對(duì)照品50.2 mg，精密稱定，置50mL容量瓶中，加無(wú)水乙醇溶解至刻度，分別制成 20.08，40.16，60.24，80.32，100.40，120.48 μg ／mL系列質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液，以乙醇為空白對(duì)照，按擬訂測(cè)定波長(zhǎng)測(cè)定吸光度，以質(zhì)量濃度（C）對(duì)ΔA進(jìn)行線性回歸，得阿司匹林線性回歸方程Y＝148.63X＋2.6523，r＝0.999 2（n＝5）。同法將水楊酸對(duì)照品配制成 8.01，12.01，16.01，20.02，24.02，28.02 μg ／mL 系列質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液，得水楊酸的線性回歸方程Y＝38.196X＋0.520 6，r＝0.999 0（n＝6）?？梢?jiàn)，阿司匹林和水楊酸質(zhì)量濃度分別在 20.08 ～100.40 μg／mL 和8.0064～24.0192μg／mL范圍內(nèi)與吸光度線性關(guān)系良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：將線性關(guān)系考察項(xiàng)下阿司匹林和水楊酸對(duì)照品溶液分別于 0，0.5，1.0，1.5，2.0 h 時(shí)測(cè)定A。結(jié)果的RSD分別為 0.674% 和 0.472% （n＝5），表明在此條件下供試品溶液穩(wěn)定性良好。

精密度試驗(yàn)：將線性關(guān)系考察項(xiàng)下阿司匹林和水楊酸對(duì)照品溶液，分5次取樣，測(cè)定吸光度。阿司匹林溶液在連續(xù)5次測(cè)定中，測(cè)得的ΔA幾乎不變，平均為0.484，RSD為 0.092 4% （n＝5）；水楊酸在 304 nm 波長(zhǎng)處連續(xù) 5次測(cè)得A的平均值為 0.518，RSD為0.286%（n＝5）。結(jié)果表明，儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取A廠同批號(hào)樣品5份，依法測(cè)定。結(jié)果阿司匹林平均含量為96.35%、RSD為0.513%（n＝5），水楊酸限量平均為 0.52% 、RSD為 1.724%（n＝5），表明方法重復(fù)性良好。

水楊酸干擾試驗(yàn)：取阿司匹林對(duì)照品適量，精密稱定，制備阿司匹林質(zhì)量濃度相同（100.4 μg ／mL）而水楊酸質(zhì)量濃度（1.2，1.6，2.0 μg ／mL）不同的溶液，其中水楊酸質(zhì)量濃度的取值設(shè)定在藥典限量值附近。結(jié)果阿司匹林的 ΔA＝0.590，RSD為 0.204%，表明在 275 nm及325 nm波長(zhǎng)處測(cè)定阿司匹林含量受到水楊酸的干擾極小，雙波長(zhǎng)測(cè)定阿司匹林含量方法可靠。

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量的樣品（批號(hào)為31843）10片，研磨，取100 mg，精密稱定，加乙醇溶解并定容于100 mL 容量瓶中，精密量取 0.8，1.0，1.2 mL 續(xù)濾液，分置3個(gè)25 mL容量瓶中，備用。稱取阿司匹林對(duì)照品約25 mg，精密稱定，用乙醇溶解定容至25 mL容量瓶中，取0.8，1.0，1.2 mL，分別加入上述 3 個(gè)容量瓶中。同理，配制質(zhì)量濃度約為40 μg／mL的水楊酸對(duì)照品溶液，向上述3個(gè)容量瓶中均精密加入2 mL。分別用乙醇定容，搖勻，測(cè)定各溶液的A值，依法計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 阿司匹林加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）

2.3 樣品含量及限度測(cè)定

阿司匹林的含量測(cè)定：分別取標(biāo)示量為100 mg的阿司匹林腸溶片樣品10片，標(biāo)示量為50 mg的樣品20片、標(biāo)示量為25 mg的樣品40片，精密稱定，研細(xì)，并稱取約相當(dāng)于阿司匹林100 mg的樣品，精密稱定，置100 mL容量瓶中，定容，過(guò)濾，取續(xù)濾液2 mL置25 mL容量瓶中，定容，搖勻，測(cè)定A并計(jì)算ΔA及含量。結(jié)果見(jiàn)表 3。按 2015 年版《中國(guó)藥典 （二部 ）》[15]規(guī)定，小劑量阿司匹林標(biāo)示量的百分含量應(yīng)為93.0% ～107.0%，9個(gè)樣品阿司匹林的含量合格，1個(gè)（F廠家）不合格。

表3 10個(gè)廠家樣品中阿司匹林含量測(cè)定結(jié)果（n＝3）

水楊酸限量測(cè)定：同法操作，測(cè)吸光度A，計(jì)算限量，結(jié)果見(jiàn)表4。根據(jù)2015年版《中國(guó)藥典（二部）》規(guī)定，水楊酸限量不得超過(guò)阿司匹林標(biāo)示量的1.5%，本次測(cè)定符合2015年版《中國(guó)藥典（二部）》規(guī)定的樣品只有4個(gè)，不合格率達(dá)60%，限量最高的為3.18%（B廠家），超過(guò)規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)的1倍。

表4 10個(gè)廠家樣品中水楊酸限量測(cè)定結(jié)果（n＝3）

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析，對(duì)樣品測(cè)定數(shù)據(jù)進(jìn)行分組（各廠家各對(duì)應(yīng)1組）獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)分析，以判斷樣品間阿司匹林含量和水楊酸限量的差異。將使用者反饋較好、價(jià)格較高的2個(gè)樣品：某合資藥品（A廠家）及某國(guó)產(chǎn)藥品（H廠家），與其他藥品的數(shù)據(jù)進(jìn)行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。結(jié)果，A組阿司匹林含量與其他9組間無(wú)差異（P＞0.05），而A組＋H組與其他8組間差異顯著（P＜0.01）；A組與其他 9組、A組＋H組與其他 8組間水楊酸限量差異均顯著（P＜0.01）。詳見(jiàn)表5。

表5 統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果

3 討論

10個(gè)廠家的樣品中，絕大多數(shù)阿司匹林含量都符合藥典規(guī)定，但水楊酸限量不合格比例超過(guò)60%，甚至個(gè)別廠家的藥品超過(guò)藥典規(guī)定的2倍以上。另外，不同廠家生產(chǎn)的藥品間差異也較大；水楊酸限量差異極其顯著（P＜0.01）。本研究中僅限于隨機(jī)購(gòu)買的10份市售藥品，但可能在其他市售藥品中也存在，需要引起管理部門的重視。本研究結(jié)果表明，我國(guó)近來(lái)推進(jìn)的藥品一致性評(píng)價(jià)工作非常必要，對(duì)于提高我國(guó)藥品質(zhì)量、維護(hù)百姓用藥安全意義重大。

應(yīng)用紫外分光光度法對(duì)國(guó)內(nèi)10個(gè)廠家的小劑量阿司匹林腸溶片進(jìn)行了定量分析，方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，成本低廉。市售的10種小劑量阿司匹林腸溶片中，阿司匹林含量90%都合格，而水楊酸限量則60%不合格。本研究是建立在紫外分光光度法基礎(chǔ)上的，可能存在一定的方法學(xué)局限，有待今后應(yīng)用高效液相色譜等方法進(jìn)行對(duì)比。建議國(guó)家相關(guān)部門加大執(zhí)法力度，嚴(yán)格管理，尤其是加大對(duì)小型藥企的管理，確保人民群眾的用藥安全。