丹參酮抗小鼠輻射損傷實(shí)驗(yàn)研究*

龔 睿，蔡周權(quán)，謝 晨，徐麗萍

（四川省科學(xué)城醫(yī)院藥劑科，四川 綿陽(yáng) 621900）

目前，許多天然藥物中提取的有效成分均證實(shí)其能抑制自由基的產(chǎn)生，增強(qiáng)機(jī)體的自身抗氧化能力，發(fā)揮抗輻射作用。中藥丹參為唇形科丹參Salvia miltiorrhizaBge.的干燥根，主要成分為脂溶性和水溶性化學(xué)成分[1]。丹參酮是中藥丹參根中的脂溶性成分，包括10多種單體，均具有鄰醌或?qū)︴Y(jié)構(gòu)，由于此類(lèi)化合物易被還原為二酚類(lèi)衍生物，后者又易被氧化為醌，在轉(zhuǎn)變過(guò)程中起電子傳遞作用，在生物體內(nèi)的代謝產(chǎn)物易參與機(jī)體的多種生物化學(xué)反應(yīng)，從而表現(xiàn)出多種藥理作用[2]。目前，相關(guān)研究更傾向于其抗腫瘤[3]、抗肝纖維化[4]、抗炎[5]等作用。本課題組曾在體外試驗(yàn)中證實(shí)丹參酮具有一定的體外抗氧化作用，本研究中擬對(duì)丹參酮體內(nèi)的抗氧化作用進(jìn)行探討，為臨床開(kāi)發(fā)有效且毒副作用少的抗輻射藥物?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物、試藥與儀器

動(dòng)物：BALB／c小鼠30只，SPF級(jí)，雄性，年齡12～16周，體質(zhì)量為（20±2）g，購(gòu)自成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，動(dòng)物合格證編號(hào)為SCXK＜川＞015-030。適應(yīng)性喂養(yǎng)7d，實(shí)驗(yàn)期間自由飲水、進(jìn)食，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后采用斷頸法處死。

試藥：98%丹參酮ⅡA提取物（西安開(kāi)來(lái)生物工程有限公司，批號(hào)為K176845）；維生素C（成都麥卡?；び邢薰荆?hào)為2017041301，分析純）；水為蒸餾水；薇婷脫毛膏（利潔時(shí)家化＜中國(guó)＞有限公司）；谷胱甘肽還原酶（GR）試劑盒、谷胱甘肽（GSH）試劑盒、總抗氧化能力（T-AOC）試劑盒和丙二醛（MDA）試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供。

儀器：SH4型紫外線(xiàn)光療儀（上海希格碼高技術(shù)有限公司，光譜范圍UVB為280～330 nm，輻射強(qiáng)度為13 mW／cm2）；紫外線(xiàn)強(qiáng)度檢測(cè)儀（世駿電子股份有限公司）；毛細(xì)采血管（揚(yáng)州市金環(huán)醫(yī)療器械廠(chǎng)）；UV-6100型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海元析儀器有限公司）；7DZ5-WS型離心機(jī)（上海盧湘儀離心機(jī)儀器有限公司）。

1.2 方法

分組：將實(shí)驗(yàn)小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組（Ⅰ組，生理鹽水）、模型對(duì)照組（Ⅱ組）、模型對(duì)照組維生素C 5 g／L（Ⅲ組），3 個(gè)劑量丹參酮組（2.5，5.0，10.0 g／L，Ⅳ ～Ⅵ組），各5只。實(shí)驗(yàn)期間自由進(jìn)食、飲水。

小鼠模型建立：各組小鼠用脫毛劑將背部脫毛，暴露皮膚面積2 cm×3 cm。用模擬UVB光源照射，UVB輻照強(qiáng)度13 mW／cm2，距離小鼠約20 cm垂直高度處照射，每天照射10 min。實(shí)驗(yàn)期間每5 d脫毛1次。

給藥方法：Ⅰ組每日給予0.5 mL生理鹽水灌胃，不予照射；Ⅱ組每日上午給予0.5 mL生理鹽水灌胃，下午給予紫外線(xiàn)照射10 min；Ⅲ組上午給予5 g／L維生素C注射液0.5 mL，下午給予紫外線(xiàn)照射10 min；Ⅳ組上午給予2.5 g／L丹參酮液0.5 mL，下午給予紫外線(xiàn)照射10 min；Ⅴ組下午給予紫外線(xiàn)照射10 min；Ⅵ組下午給予紫外線(xiàn)照射10 min。均連續(xù)給藥14 d。

1.3 標(biāo)本采集與指標(biāo)檢測(cè)

樣本采集：按上述實(shí)驗(yàn)方法照射14 d后，取30只10 mL裝有1%肝素2 mL的離心管，用毛細(xì)血管取眼眶血后裝入上述離心管中，將裝有血液的離心管在離心機(jī)上4 000 r／min離心10 min，取上清液，備用。

小鼠血清GR，GSH，T-AOC，MDA檢測(cè)：嚴(yán)格按相關(guān)試劑盒（南京建成生物工程研究所）操作流程檢測(cè)小鼠血清中GR活力、T-AOC能力、GSH含量及MDA含量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析。計(jì)量資料以表示，組間比較行t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

結(jié)果見(jiàn)表1及圖1。與Ⅰ組相比，Ⅱ組血清GR活力、T-AOC能力、GSH含量均明顯下降，MDA含量明顯上升（P＜0.05）；與Ⅱ組相比，Ⅲ～Ⅵ組血清GR活力、T-AOC能力、GSH含量均明顯上升，MDA含量明顯下降（P＜0.05）；Ⅲ組與Ⅳ～Ⅵ組相比，血清GR活力、T-AOC能力、GSH含量、MDA含量差異不大。

表1 各組小鼠抗氧化物質(zhì)的含量／能力比較（±s）

表1 各組小鼠抗氧化物質(zhì)的含量／能力比較（±s）

注：與Ⅱ組比較，*P ＜0.05。圖 1 同。

?

圖1 各組小鼠各抗氧化物的含量／能力

3 討論

紫外線(xiàn)被皮膚吸收后可通過(guò)多種途徑誘發(fā)光化學(xué)反應(yīng)及級(jí)聯(lián)反應(yīng)，往往產(chǎn)生活性氧（ROS），主要包括氧離子、過(guò)氧化物和處于激發(fā)態(tài)的氧、羥基化合物等。有些活性氧是自由基，屬于體內(nèi)高活性分子，包括超氧陰離子（O2·-）、羥自由基（·OH）和過(guò)氧化氫（H2O2）等[6]。UVB作為太陽(yáng)光紫外線(xiàn)的一部分，是產(chǎn)生機(jī)體氧自由基的主要成分，這些氧自由基可引發(fā)不飽和脂肪酸脂質(zhì)過(guò)氧化而使細(xì)胞損傷[7]。ROS生成和消除失衡對(duì)細(xì)胞生理學(xué)的某些影響被稱(chēng)為氧化應(yīng)激[8]。生物機(jī)體在面對(duì)上述威脅時(shí)，通過(guò)提升自身的抗氧化防御體系，包括抗氧化酶系和抗氧化因子水平，對(duì)氧自由基進(jìn)行清除及催化、分解有毒、有害物質(zhì)，以達(dá)到防輻射的效果。這種機(jī)體防御體系的抗氧化能力的強(qiáng)弱與健康程度密切相關(guān)，該防御體系的抗氧化作用主要通過(guò)3條途徑：清除自由基和活性氧以免引發(fā)脂質(zhì)過(guò)氧化；分解過(guò)氧化物，阻斷過(guò)氧化鏈；除去起催化作用的金屬離子。氧自由基不但通過(guò)生物膜中多不飽和脂肪酸（PUFA）的過(guò)氧化引起細(xì)胞損傷，且還能通過(guò)脂質(zhì)過(guò)氧化物的分解產(chǎn)物引起細(xì)胞損傷，其中毒性最大的就是MDA，其產(chǎn)生的量與氧自由基的量及脂質(zhì)過(guò)氧化的程度呈正相關(guān)，故檢測(cè)含量可反映氧自由基的水平及脂質(zhì)過(guò)氧化的程度。GR是一種黃素酶，廣泛存在于各臟器的組織細(xì)胞中，在體內(nèi)可催化氧化型谷胱甘肽（GSSG），還原成還原型谷胱甘肽（GSH），后者可使含巰基（—SH）酶處于還原狀態(tài)及活性狀態(tài)，維持紅細(xì)胞膜的完整性，防止血紅蛋白氧化。GSH是由谷氨酸、甘氨酸和半胱氨酸組成的三肽，是組織中主要的非蛋白質(zhì)巰基化合物，是體內(nèi)的一種低分子清除劑，可清除O2-及H2O2等，GSH量的多少是衡量機(jī)體抗氧化能力大小的重要指標(biāo)[9]。

有實(shí)驗(yàn)研究了丹參酮對(duì)不同疾病動(dòng)物模型的抗氧化作用，丹參酮ⅡA衍生物對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷模型中MDA含量的影響[10-11]。結(jié)果表明，丹參酮ⅡA衍生物預(yù)處理能顯著減少大鼠心肌缺血再灌注損傷引起的心肌炎性浸潤(rùn)氧化損傷，減少M(fèi)DA的活性。表明丹參酮ⅡA衍生物具有保護(hù)心肌缺血再灌注損傷的作用，其作用機(jī)制與其顯著抑制炎癥與氧化損傷有關(guān)。李澤等[12]研究發(fā)現(xiàn)，丹參酮ⅡA磺酸鈉（STS）呈劑量依賴(lài)性地減輕AngⅡ誘導(dǎo)的心肌纖維化，提高抗氧化酶及Ⅱ相解毒酶的表達(dá)，增強(qiáng)抗氧化應(yīng)激反應(yīng)，降低心肌組織脂質(zhì)過(guò)氧化水平。高文強(qiáng)等[13]發(fā)現(xiàn)，利用丹參酮Ⅰ（T- Ⅰ）預(yù)處理可降低X射線(xiàn)導(dǎo)致的膀胱上皮細(xì)胞活力下降，且可減少細(xì)胞內(nèi)的活性氧水平；在體內(nèi)試驗(yàn)中，T-Ⅰ能顯著減輕早期膀胱組織損傷，降低組織內(nèi)氧化應(yīng)激水平。本研究結(jié)果與前期研究結(jié)果一致，在丹參酮預(yù)處理中，相對(duì)于模型對(duì)照組，丹參酮實(shí)驗(yàn)組小鼠血清GR活力、T-AOC能力、GSH含量明顯上升，MDA含量明顯下降（P＜0.05），丹參酮的不同濃度組與維生素C組小鼠的血清GR活力、T-AOC能力、GSH含量、MDA含量差異不大。總之，丹參酮能清除氧自由基，減輕紫外線(xiàn)輻射對(duì)機(jī)體的損傷。