三種不同試劑盒對新型隱球菌的檢測效果分析

閆興輝 張加雄 唐莉（通訊作者)

（中國人民解放軍32280部隊 四川 夾江 614100）

新型隱球菌（Cryptococcus neoformans）又名溶組織酵母菌(Torula Histolytica)。一般染料不易著色難以發(fā)現(xiàn)，稱隱球菌，主要侵犯免疫缺陷以及免疫低下人群，如器官移植患者、AIDS患者等。自從1981年以來，從報道首例艾滋病病例至2011年，短短30年間，艾滋病在全球迅速蔓延。在此期間，我國存活艾滋病病毒感染者和艾滋病病人78萬人，其中AIDS病人15.4萬人，當(dāng)年新發(fā)HIV感染者4.8萬人。目前主要檢測手段墨汁負(fù)染對新型隱球菌的實(shí)驗(yàn)診斷為一種有效的診斷方法[1]。 分離培養(yǎng)法為新型隱球菌檢測的基本方法。乳膠凝集試驗(yàn)以乳膠顆粒作為載體的一種間接凝集試驗(yàn)。有研究認(rèn)為，膠體金法比LA法和ELISA法有更高的可信度[2]。近年來，臨床上應(yīng)用膠體金法進(jìn)行隱球菌感染的診斷得到推廣，具有檢測樣本少，穩(wěn)定性高的優(yōu)點(diǎn)。IMMY公司研發(fā)的膠體金方法試劑盒，操作簡單，檢測時間短，結(jié)果判定簡單。金山川公司試劑盒優(yōu)點(diǎn)在于增強(qiáng)瓶間穩(wěn)定性，提高重復(fù)性與準(zhǔn)確性。為評價目前新型隱球菌檢測方法，以墨汁染色檢測方法和分離培養(yǎng)為診斷標(biāo)準(zhǔn)，比較分析IMMY、丹娜、金山川三種不同試劑盒的敏感度和特異性。

1.材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 標(biāo)本 15例臨床血液標(biāo)本。

1.1.2 試劑 Immy、丹娜、金山川三種檢測試劑盒。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 膠體金方法 將1滴LF Specimen Diluent加入到離心管中，加入40μl血清標(biāo)本，將試紙條浸入混懸液靜置10min后讀取結(jié)果。質(zhì)控線和檢測線都顯示時為陽性；只有一條質(zhì)控線時為陰性；質(zhì)控線和檢測線都未顯示，表明結(jié)果不可信，應(yīng)重復(fù)檢測。

1.2.2 分離培養(yǎng) 為提高檢測準(zhǔn)確性，確保墨汁染色結(jié)果的可靠性，將可疑血清標(biāo)本進(jìn)行分離增菌培養(yǎng)后再進(jìn)行墨汁染色，避免假陰性。

1.2.3 墨汁染色 墨汁染色（負(fù)染色法），背景著色而菌體本身不著色的染色法稱負(fù)染色法。在黑色印度墨水的背景下，可觀察到酵母細(xì)胞周圍環(huán)繞著一圈明亮的區(qū)域，即粘多糖莢膜。用無菌針頭取出培養(yǎng)瓶內(nèi)的血液標(biāo)本均勻涂布于潔凈玻上，然后加印度墨汁1小環(huán)（或更少）混勻，加上蓋玻片在低倍鏡下尋找有莢膜的菌細(xì)胞，找到后換高倍鏡確認(rèn)。鏡下背景呈黑褐色，菌體無色。

1.2.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS11.0統(tǒng)計軟件，計數(shù)資料用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 培養(yǎng)結(jié)果與墨汁染色結(jié)果一致，用膠體金方法對標(biāo)本原液進(jìn)行檢測時，丹娜試劑盒出現(xiàn)較高的假陽性。對原液不進(jìn)行稀釋處理而直接檢測時，丹娜試劑盒與墨汁染色有顯著差異，均具有較高的假陽性，易造成誤診。血液標(biāo)本為原液時，丹娜試劑盒可以檢測出墨汁染色陽性的標(biāo)本，但同時14例墨汁染色陰性的標(biāo)本中，有4例標(biāo)本為陽性，2例為弱陽性，靈敏度為100%，特異性為57.15%，假陽性為42.85%，假陰性為0%（表1）。

表1 丹娜試劑盒與墨汁染色結(jié)果對比

2.2 采用膠體金方法對標(biāo)本原液進(jìn)行檢測時，金山川試劑盒出現(xiàn)較高的假陽性。對原液不進(jìn)行稀釋處理，金山川試劑盒與墨汁染色有顯著差異，有假陽性，易造成誤診。血液標(biāo)本為原液時，金山川試劑盒可以檢測出墨汁染色陽性的標(biāo)本，但同時14例墨汁染色陰性的標(biāo)本中，有3例標(biāo)本為陽性，8例為弱陽性，靈敏度為100%，特異性為21.43%，假陽性為78.57%，假陰性為0%（表2）。

表2 采用膠體金方法對標(biāo)本原液進(jìn)行檢測結(jié)果陽、陰性比較

2.3 采用膠體金方法對標(biāo)本原液進(jìn)行檢測時，IMMY試劑盒與墨汁染色結(jié)果基本一致。說明對原液不進(jìn)行稀釋處理而直接檢測時IMMY試劑盒與墨汁染色結(jié)果基本一致。血液標(biāo)本為原液時IMMY試劑盒可以檢測出墨汁染色陽性的標(biāo)本，且14例墨汁染色陰性的標(biāo)本中，有0例標(biāo)本為陽性，8例為弱陽性，靈敏度為100%，特異性為100%，假陽性為0%，假陰性為0%（表3）。

表3 immy陽、陰性采用膠體金方法對標(biāo)本原液進(jìn)行檢測結(jié)果比較

3.討論

本研究以血培養(yǎng)和墨汁染色方法相結(jié)合為診斷標(biāo)準(zhǔn)，分析了三種不同膠體金方法的敏感度和特異性及其分別與墨汁染色方法的一致性。結(jié)果表明，當(dāng)樣品為原液時，丹娜和金山川膠體金具有較高的假陽性；膠體金方法與墨汁染色方法有較好的一致性，因此建議臨床檢測時采用標(biāo)本原液進(jìn)行檢測分析。IMMY膠體金方法用于血標(biāo)本的檢測，且標(biāo)本處理簡單，檢測只需約8min 就可完成，結(jié)果判定簡單，因此膠體金方法可取代乳膠凝集法用于新型隱球菌的檢測。