多重實(shí)時(shí)熒光PCR在診斷學(xué)齡前期CAP中應(yīng)用價(jià)值樊旭成 薛娜 韓志國(guó) 等（160）

樊旭成 薛娜 韓志國(guó) 高楓

摘要：目的? 探討多重實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）在學(xué)齡前期社區(qū)獲得性肺炎（CAP）診斷中的應(yīng)用價(jià)值。方法? 篩選2018年1月～12月到烏魯木齊市某社區(qū)服務(wù)門診就診的206例CAP患兒，給予常規(guī)采血檢測(cè)降鈣素原（PCT）和C-反應(yīng)蛋白（CRP）水平，同時(shí)所有患兒均接受多重實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)感染病原體并比較。結(jié)果? 常規(guī)采血方法檢測(cè)結(jié)果呈陽(yáng)性有116例患兒，占56.31%;采用多重實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)結(jié)果呈陽(yáng)性共有201例患兒，占97.57%。采用多重實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)的結(jié)果陽(yáng)性率高于常規(guī)采血檢測(cè)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論? 多重實(shí)時(shí)熒光PCR在學(xué)齡前期社區(qū)獲得性感染中的應(yīng)用效果良好，具有很高的靈敏度，方便快捷，能夠提供較高價(jià)值的診療參考。

關(guān)鍵詞：多重實(shí)時(shí)熒光PCR;學(xué)齡前期;社區(qū)獲得性感染

中圖分類號(hào)：R446? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.13.051

文章編號(hào)：1006-1959（2019）13-0160-02

Abstract：Objective? To investigate the value of multiple real-time fluorescent polymerase chain reaction （PCR） in the diagnosis of pre-school community-acquired pneumonia（CAP）. Methods? A total of 206 children with CAP who were admitted to a community outpatient clinic in Urumqi from January to December 2018 were enrolled. The routine blood sampling was performed to detect procalcitonin （PCT） and C-reactive protein （CRP） levels. Multiple real-time fluorescent PCR was performed to detect infectious pathogens and compare them. Results? The results of routine blood collection were positive in 116 cases， accounting for 56.31%. The results of multiple real-time fluorescent PCR were positive in 201 cases， accounting for 97.57%. The positive rate of multiple real-time fluorescent PCR was higher than that of conventional blood sampling，the difference was statistically significant （P<0.05）. Conclusion? Multiple real-time fluorescent PCR has a good effect in pre-school community acquired infections. It has high sensitivity， is convenient and fast， and can provide high-value diagnosis and treatment reference.

Key words：Multiplex real-time fluorescent PCR;Preschool;Community acquired infection

社區(qū)獲得性肺炎（community-acquired pneumonia，CAP）是指在醫(yī)院外患上感染性肺炎，包括感染了病原體在入院后潛伏期內(nèi)發(fā)病的肺炎，屬于一種感染性疾病，嚴(yán)重威脅人類健康，也是造成兒童死亡的重要疾病之一。世界衛(wèi)生組織等機(jī)構(gòu)的報(bào)道，2016年5歲以下兒童的死亡人數(shù)有560萬(wàn)，其中肺炎是造成死亡的重要傳染病[1]。據(jù)文獻(xiàn)研究顯示，中國(guó)每年有大約2000萬(wàn)兒童肺炎患者，其中大約35萬(wàn)5歲以下患兒死于肺炎，肺炎是造成我國(guó)嬰幼兒死亡的第1位疾病[2]。因此，減少肺炎的發(fā)生，及早診斷感染病因并給與相應(yīng)的治療，提高治愈率，是一項(xiàng)急迫的任務(wù)。目前常規(guī)檢測(cè)方法是采血檢測(cè)，但是此類方法存在一定的局限性，明確CAP病原比較困難。有研究顯示，與傳統(tǒng)的檢測(cè)方法相比，多重實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）技術(shù)具有取樣少、靈敏度高、簡(jiǎn)單快捷等優(yōu)點(diǎn)[3]。本文旨在探討多重實(shí)時(shí)熒光PCR在診斷學(xué)齡前期社區(qū)獲得性感染中的應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)告如下。

1資料與方法

1.1一般資料? 篩選2018年1月～12月到烏魯木齊市某社區(qū)服務(wù)門診就診的CAP患兒。納入標(biāo)準(zhǔn)：①依據(jù)最新《兒童社區(qū)獲得性肺炎管理指南》確診的CAP患兒;②年齡28 d～7歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：①先天性免疫缺陷的患兒;②肺結(jié)核病患兒;③合并其他基礎(chǔ)疾病患兒。最終入選206例患兒作為研究對(duì)象，其中男105例，女101例，年齡28 d～7歲，中位年齡3.26歲。患兒家屬知情且簽署自愿書。

1.2方法

1.2.1常規(guī)采血檢測(cè)? 對(duì)患兒進(jìn)行手指末梢采血（須空腹），采集15 μl立即送檢驗(yàn)，檢測(cè)降鈣素原（PCT）和C-反應(yīng)蛋白（CRP）水平。檢測(cè)儀器為武漢天澤偉業(yè)醫(yī)療設(shè)備有限公司生產(chǎn)的BC-3000puls分析儀，其余的儀器如試劑盒等均為該公司的配套設(shè)施。

1.2.2多重實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)檢測(cè)? 在常規(guī)采血檢測(cè)基礎(chǔ)上，所有患兒均再接受多重實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)。操作方法：在采血完畢后，工作人員左手以壓舌板壓住舌根，右手用消毒長(zhǎng)棉簽輕柔而靈敏地拭擦扁桃體、咽及兩側(cè)腭弓，將棉簽插入病毒采樣管的試管內(nèi)，送至烏魯木齊市疾病預(yù)防控制中心病毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。采用多重實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)檢測(cè)病原體感染情況。

1.3觀察指標(biāo)? 常規(guī)采血檢測(cè)患兒血清PCT和CRP水平，PCT≥0.5 ng/ml或者CRP≥10.0 mg/L顯示為陽(yáng)性;多重實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)檢測(cè)出病原體感染顯示陽(yáng)性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法? 采用SPSS 20.0處理本研究數(shù)據(jù)。以（x±s）表示計(jì)量資料，用t檢驗(yàn);以（%）表示計(jì)數(shù)資料，用？字2檢驗(yàn)。P<0.05顯示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1常規(guī)采血檢測(cè)結(jié)果? 有86例患兒PCT≥0.5 ng/ml，98例患兒CRP≥10.0 mg/L，其中兩項(xiàng)指標(biāo)都升高的有68例。該種方法檢測(cè)結(jié)果呈陽(yáng)性有116例患兒，占56.31%。

2.2多重實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)檢測(cè)結(jié)果? 有175例患兒是病毒性感染，有121例患兒是細(xì)菌性感染，混合型感染的有95例。該種方法檢測(cè)結(jié)果呈陽(yáng)性共有201例患兒，占97.57%。

2.3兩種方法檢測(cè)結(jié)果對(duì)比? 采用多重實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)的結(jié)果陽(yáng)性率高于常規(guī)采血檢測(cè)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

3討論

PCT是一種蛋白質(zhì)，當(dāng)受到嚴(yán)重細(xì)菌性感染等炎癥刺激或者膿毒癥時(shí)，會(huì)引起其在血清中濃度的會(huì)升高，但是輕微的感染、局部性細(xì)菌感染或患有慢性炎癥時(shí)，不會(huì)引起PCT在血清中水平升高，而且過(guò)敏、自身免疫或者病毒性感染時(shí)它的血清水平只是輕度升高水平或者不會(huì)升高[4]。CRP是一種急性反應(yīng)蛋白，很多因素都可以導(dǎo)致它在血清中水平升高，在臨床診斷時(shí)存在局限性。而且，病毒感染也不會(huì)導(dǎo)致CRP的升高。因此，PCT、CRP只是對(duì)于細(xì)菌性感染有一定的靈敏度且不能明確病原，明顯存在不足。

多重實(shí)時(shí)熒光PCR是一種在DNA擴(kuò)增反應(yīng)中，每次PCR循環(huán)后，以熒光物質(zhì)檢測(cè)其產(chǎn)物總量的方法，一種定量分析樣品中特定DNA序列的方法。其技術(shù)原理是將標(biāo)記有熒光素的Taqman探針與模板DNA混合后，完成高溫變性，低溫復(fù)性，適溫延伸的熱循環(huán)，并遵守PCR規(guī)律，與模板DNA互補(bǔ)配對(duì)的Taqman探針被切斷，熒光素游離于反應(yīng)體系中，在特定光激發(fā)下發(fā)出熒光，隨著循環(huán)次數(shù)的增加，被擴(kuò)增的目的基因片段呈指數(shù)規(guī)律增長(zhǎng)，通過(guò)實(shí)時(shí)檢測(cè)與之對(duì)應(yīng)的隨擴(kuò)增而變化熒光信號(hào)強(qiáng)度，得出數(shù)據(jù)，同時(shí)利用數(shù)個(gè)已知模板濃度的標(biāo)準(zhǔn)品作對(duì)照，即可得出待測(cè)標(biāo)本目的基因的拷貝數(shù)。多重實(shí)時(shí)熒光PCR廣泛用于基因表達(dá)研究、病原體檢測(cè)、轉(zhuǎn)基因研究等諸多領(lǐng)域[5]。

多重實(shí)時(shí)熒光PCR在學(xué)齡前期社區(qū)獲得性感染中，無(wú)論是病毒性感染、細(xì)菌性感染還是非典型病原體感染，都能夠準(zhǔn)確的檢測(cè)出是何種病原體，明確兒童社區(qū)獲得者感染的病原，對(duì)其診療有非常重大的意義[6]。根據(jù)多重實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)出的病原體，在臨床上能夠幫助醫(yī)生快速做出診斷，從而給與患兒更具有針對(duì)性的治療措施。當(dāng)患兒屬于病毒性感染時(shí)，可采取相應(yīng)的抗病毒治療，避免了抗生素濫用的情況，減少患兒副作用甚至是細(xì)菌耐藥性的影響;而在對(duì)細(xì)菌性感染進(jìn)行治療時(shí)，便可合理使用抗菌性的藥物。隨著經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展，食品安全、環(huán)境污染、藥物濫用等問(wèn)題日益嚴(yán)重，兩種病原體或者多種病原體的混合感染在社區(qū)獲得性感染中的占比越來(lái)越大，造成的危害不言而喻。對(duì)于混合性感染，臨床上容易出現(xiàn)漏診，從而出現(xiàn)治療不當(dāng)、反復(fù)治療、導(dǎo)致患兒久治不愈的惡性循環(huán)，對(duì)患兒的生長(zhǎng)發(fā)育造成影響，甚至給患兒留下了心理陰影，對(duì)其家屬精神造成了嚴(yán)重傷害。而通過(guò)多重實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)技術(shù)能夠快速得到明確的病原，給臨床提供有針對(duì)性參考，讓患兒得到有利的治療，快速康復(fù)，提高治愈率，減少患兒和家屬的痛苦，有利于患兒的生長(zhǎng)發(fā)育。

本研究結(jié)果顯示，采用多重實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)檢測(cè)出有175例患兒是病毒性感染，有121例患兒是細(xì)菌性感染，混合型感染的有95例，陽(yáng)性率為97.57%，高于常規(guī)采血檢測(cè)的56.31%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

綜上所述，多重實(shí)時(shí)熒光PCR在診斷學(xué)齡前期社區(qū)獲得性感染中的應(yīng)用效果良好，具有較高的靈敏度，方便快捷。

參考文獻(xiàn)：

[1]社區(qū)獲得性肺炎可增加長(zhǎng)期發(fā)病率和死亡率[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2016，34（9）：2180.

[2]馮長(zhǎng)松.2016年兒科病區(qū)社區(qū)獲得性肺炎病原譜分析[D].新疆醫(yī)科大學(xué)，2018.

[3]歐陽(yáng)敏秀，黃宇輝.PCR法和細(xì)菌培養(yǎng)法在陰道細(xì)菌檢驗(yàn)中的對(duì)比分析[J].臨床檢驗(yàn)雜志（電子版），2019（2）：160-161.

[4]崔霞.降鈣素原在感染性疾病中的臨床應(yīng)用價(jià)值[J].中國(guó)醫(yī)藥指南，2019，17（4）：70.

[5]安娜，柳方方，董美，等.基于PCR技術(shù)的DNA分析測(cè)試關(guān)鍵要素[J].基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué)，2019，38（2）：624-629.

[6]范向平.實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)對(duì)常見重癥肺炎病原體的檢測(cè)[J].實(shí)用醫(yī)技雜志，2018，25（9）：972-974.

收稿日期：2019-3-15;修回日期：2019-3-25

編輯/張建婷