宮頸SIgA聯(lián)合血清LncRNA-ROR與miR-29檢測(cè)對(duì)女性慢性盆腔炎的診斷價(jià)值

(鄂州市中心醫(yī)院婦產(chǎn)科，湖北 鄂州 436000)

慢性盆腔炎(pelvic inflammatory disease，PID)指女性?xún)?nèi)生殖器及其周?chē)Y(jié)締組織、盆腔腹膜的慢性炎癥[1]。PID起病多隱匿，且易反復(fù)發(fā)作導(dǎo)致疾病遷延不愈，甚至誘發(fā)不孕[2-3]。研究等指出，肝炎、肺炎等多種炎癥組織中長(zhǎng)鏈非編碼RNA (long non-coding RNA，lncRNA)-ROR呈顯著上升趨勢(shì)，此外還有研究指出微小RNA-29(microRNA-29，miR-29)參與白介素2和白介素6等多種細(xì)胞因子的分泌，被認(rèn)為是調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)的重要基因[4]。機(jī)體炎癥免疫失調(diào)、巨噬細(xì)胞和上皮細(xì)胞等細(xì)胞分泌免疫效應(yīng)因子功能紊亂被認(rèn)為是PID疾病發(fā)展的重要因素[5-6]。宮頸分泌型IgA(secretory IgA，SIgA)、lncRNA-ROR和miR-29在機(jī)體處于炎癥狀態(tài)時(shí)可有異常表達(dá)[7-9]。本文收集了150例PID患者與150例健康女性，旨在探究宮頸SIgA、血清LncRNA-ROR與miR-29對(duì)PID的診斷價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

選取鄂州市中心醫(yī)院婦產(chǎn)科2015年6月至2018年6月確診的PID患者150例為病例組。包括輸卵管炎(腹腔鏡下表現(xiàn)為一側(cè)或雙側(cè)輸卵管增粗)合并卵巢炎(腹腔鏡下表現(xiàn)為一側(cè)或雙側(cè)卵巢組織腫大)65例、輸卵管炎合并卵巢炎與慢性盆腔結(jié)締組織炎(腹腔鏡下表現(xiàn)為盆腔腹膜后方，子宮兩側(cè)及膀胱前間隙處結(jié)締組織積膿)共51例、單純輸卵管炎11例、慢性盆腔結(jié)締組織炎11例、子宮體炎12例(腹腔鏡下表現(xiàn)為子宮體水腫、充血)。各種PID的診斷依據(jù)均來(lái)自腹腔鏡檢查結(jié)果[10]。患者平均年齡(32.5±3.4)歲。病例組納入標(biāo)準(zhǔn)為：(1)經(jīng)腹腔鏡檢查確診為PID；(2)入院前未經(jīng)治療；(3)語(yǔ)言表達(dá)能力正常，能與調(diào)查人員進(jìn)行正常的溝通；(4)研究對(duì)象自愿參與本研究。對(duì)照組納入標(biāo)準(zhǔn)為：(1)既往無(wú)盆腔慢性疼痛病史；(2)月經(jīng)規(guī)律；(3)婦科B超未見(jiàn)異常；(4)婦檢無(wú)宮頸舉痛、下腹部未捫及包塊。所有研究對(duì)象均排除：(1)其他腫瘤史；(2)未簽署知情同意書(shū)者。對(duì)照組為同期在本院行健康體檢的健康女性150例，平均年齡(33.9±3.8)歲。本項(xiàng)目由本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 宮頸SIgA檢測(cè)

由專(zhuān)業(yè)醫(yī)師經(jīng)陰道窺器用一次性無(wú)菌注射器抽取宮頸黏液0.5 mL，放入密封標(biāo)本瓶中，于1 h內(nèi)在4 ℃條件下以3 500 g離心力(離心半徑為10 cm)離心10 min(離心機(jī)購(gòu)自中國(guó)湘儀集團(tuán)H-1850R型)，吸取上清進(jìn)行SIgA檢測(cè)。宮頸黏液的抽取時(shí)間均在研究對(duì)象黃體期。宮頸SIgA采用放射免疫分析法檢測(cè)，檢測(cè)儀器為美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司AU5800生化儀，檢測(cè)試劑盒來(lái)源于上海華大科技有限公司。

1.3 血清LncRNA ROR與miR-29水平檢測(cè)

使用含促凝劑采血管抽取PID患者治療前和健康體檢者的空腹外周靜脈血5 mL。血液標(biāo)本在1 h內(nèi)于4 ℃條件下以12 000 g離心力離心15 min，收集上層血清進(jìn)行LncRNA ROR與miR-29水平檢測(cè)。

應(yīng)用RNA提取試劑盒(中國(guó)Bioteke公司)提取總RNA，使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(中國(guó)Takara公司)將總RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Quantitative Real-time PCR，RT-PCR)。循環(huán)條件：95 ℃變性5 min；95 ℃ 30 s，60 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，45個(gè)循環(huán)。LncRNA-ROR、miR-29與GAPDH引物序列見(jiàn)表1。采用2-ΔCt法計(jì)算各基因的相對(duì)表達(dá)量。

表1 LncRNA-ROR、miR-29與GAPDH的引物序列

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 20.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。對(duì)于正態(tài)分布資料，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。正態(tài)分布數(shù)據(jù)兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析。率的比較采用卡方檢驗(yàn)。二元Logistic回歸分析計(jì)算血清LncRNA-ROR、miR-29與宮頸SIgA預(yù)測(cè)PID的比值比(odds ratio，OR)，受試者工作特征曲線(receiver operating characteristic curve，ROC)分析計(jì)算三者鑒別PID患者的曲線下面積(area under ROC curve，AUC)。P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 基本資料與宮頸SIgA、血清LncRNA-ROR及miR-29水平比較

兩組研究對(duì)象在年齡、吸煙、飲酒等方面的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。相比于對(duì)照組，病例組宮頸SIgA、血清LncRNA-ROR及miR-29水平均增高，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表2。此外，病例組宮頸SIgA、血清LncRNA-ROR及miR-29水平在不同部位PID患者中的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表3。

表2 基本資料與宮頸SIgA、血清LncRNA-ROR及miR-29水平比較

(n=150)

表3 各類(lèi)型PID患者宮頸SIgA、血清LncRNA-ROR及miR-29水平比較

2.2 宮頸SIgA、血清LncRNA-ROR及miR-29對(duì)PID的鑒別診斷

ROC曲線分析顯示，宮頸SIgA、血清LncRNA-ROR及miR-29在區(qū)分PID與健康女性的AUC分別為：0.664(95%CI：0.573～0.762，P=0.003)、0.814(95%CI：0.783～0.902，P<0.001)和0.846(95%CI：0.797～0.925，P<0.001)；靈敏度/特異度分別為74.9%/48.7%、76.5%/83.3%和78.1%/92.3%；診斷界值分別為74.6 μg/mL、34.6(-log)和16.2(-log)。聯(lián)合宮頸SIgA、血清LncRNA-ROR及miR-29區(qū)分PID與健康女性的AUC為0.924(95%CI：0.882～0.989，P<0.001)，靈敏度為88.8%，特異度為91.6%，見(jiàn)圖1。

圖1 宮頸SIgA、血清LncRNA-ROR及miR-29對(duì)PID的鑒別診斷

2.3 宮頸SIgA、血清LncRNA-ROR及miR-29對(duì)PID的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

單因素分析結(jié)果顯示，高宮頸SIgA、血清LncRNA-ROR及miR-29水平是PID發(fā)病的危險(xiǎn)因素。多因素分析結(jié)果表明，在校正年齡、BMI、吸煙、飲酒等因素影響后，高宮頸SIgA、血清LncRNA-ROR及miR-29水平仍是PID發(fā)病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，見(jiàn)表4。

3 討 論

LncRNA和miR是近年研究的熱點(diǎn)，這兩類(lèi)屬于非編碼RNA且均廣泛表達(dá)于單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、T細(xì)胞和B細(xì)胞中，并可誘導(dǎo)這些免疫細(xì)胞向病灶遷移，吞噬或殺滅病原體，參與機(jī)體炎癥反應(yīng)過(guò)程[11-12]。Yang等[8]指出，肝炎、肺炎等多種炎癥組織中LncRNA-ROR呈顯著上升趨勢(shì)，提示LncRNA-ROR水平與炎癥疾病相關(guān)。多個(gè)研究指出miR-29參與白介素2和白介素6等多種細(xì)胞因子的分泌，被認(rèn)為是調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)的重要基因[4]。機(jī)體炎癥免疫失調(diào)、巨噬細(xì)胞和上皮細(xì)胞等細(xì)胞分泌免疫效應(yīng)因子功能紊亂被認(rèn)為是PID疾病發(fā)展的重要因素[5-6]。在本次研究中，相比于健康女性，PID患者的血清LncRNA-ROR及miR-29水平均顯著增高，該結(jié)果與前期多個(gè)基礎(chǔ)研究結(jié)果相符[4,8]，二者對(duì)PID的診斷具有較高的敏感性。

表4 宮頸SIgA、血清LncRNA-ROR及miR-29對(duì)PID的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

SIgA是存在于人體黏膜的一種重要免疫球蛋白，當(dāng)黏膜受到炎癥刺激時(shí)，其水平會(huì)迅速增高[13]。在本次研究中，發(fā)現(xiàn)宮頸SIgA水平在PID患者中顯著增高，推測(cè)這是由于PID時(shí)，所產(chǎn)生的SIgA更容易被檢測(cè)到。宮頸SIgA診斷PID的敏感性較高，當(dāng)聯(lián)合血清LncRNA-ROR、miR-29與宮頸SIgA，診斷PID的靈敏度為88.8%，特異度為91.6%，顯著優(yōu)于單項(xiàng)指標(biāo)的診斷價(jià)值。此外，本研究還對(duì)血清LncRNA-ROR、miR-29與宮頸SIgA對(duì)PID的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行評(píng)估，結(jié)果表明三者均是PID發(fā)病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，提示該三項(xiàng)指標(biāo)的聯(lián)合檢測(cè)對(duì)PID發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的預(yù)測(cè)也具有一定價(jià)值。

然而，本次研究仍有如下不足：(1)由于PID的確診依賴(lài)于腹腔鏡檢查，因而對(duì)照中無(wú)法完全排除PID，但本研究的對(duì)照排除了慢性盆腔痛，宮頸舉痛、腹部包塊的女性，此種情況下，對(duì)照中PID所占比例極低，不足以對(duì)研究結(jié)果造成影響；(3)本次研究中采用的血清LncRNA-ROR、miR-29與宮頸SIgA多個(gè)指標(biāo)的聯(lián)合模型雖然較各單獨(dú)指標(biāo)有較高的臨床價(jià)值，但該模型的應(yīng)用仍有待進(jìn)一步的驗(yàn)證；(4)本次納入的150例PID患者均來(lái)自于本院，這可能會(huì)造成一定的選擇偏倚，后期需要更多的多中心隊(duì)列研究來(lái)進(jìn)一步證實(shí)；(5)本研究中宮頸黏液的抽取時(shí)間均在研究對(duì)象的黃體期，但是PID患者的發(fā)病時(shí)間可能不一定處在黃體期，未來(lái)需要進(jìn)一步分析不同月經(jīng)周期時(shí)宮頸SIgA水平是否對(duì)結(jié)果產(chǎn)生影響。

綜上所述，本研究首次探究了聯(lián)合檢測(cè)血清LncRNA-ROR、miR-29與宮頸SIgA三項(xiàng)指標(biāo)對(duì)PID的診斷與發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)價(jià)值，并發(fā)現(xiàn)聯(lián)合該三項(xiàng)指標(biāo)診斷PID具有較高的靈敏度，且三者均是PID發(fā)病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，有望為PID的臨床診療提供新思路。

致謝：向給予我教誨和幫助的人們致以崇高的敬意和真誠(chéng)的感謝!承蒙領(lǐng)導(dǎo)和同事的幫助，尤其是文章的第二作者，對(duì)我的大力支持，謝謝！