異葉茴芹總黃酮抗氧化活性研究

趙良輝 王張英 王志新

摘? ? 要：為研究異葉茴芹總黃酮的抗氧化活性，以異葉茴芹為原材料，以超聲波輔助提取法提取總黃酮。以Vc為對照，通過羥基自由基、超氧陰離子、還原力、FRAP法測定異葉茴芹總黃酮抗氧化活性，采用分光光度法測定異葉茴芹總黃酮對亞硝酸鈉的清除率，利用紫外光解法及比色法測定異葉茴芹總黃酮對亞硝胺的合成阻斷率。結(jié)果表明：在羥基自由基的清除上，異葉茴芹總黃酮優(yōu)于同等濃度的Vc，其他3種方法的測定結(jié)果顯示，Vc的抗氧化活性優(yōu)于異葉茴芹總黃酮。此外，異葉茴芹總黃酮在較低pH值、一定的濃度和時(shí)間內(nèi)，能夠有效地清除亞硝酸鈉，在pH值為3.0時(shí)，異葉茴芹總黃酮在試驗(yàn)濃度范圍內(nèi)，能有效地抑制亞硝胺的合成。異葉茴芹總黃酮具有較強(qiáng)的抗氧化活性以及抑制亞硝化反應(yīng)的作用。

關(guān)鍵詞：異葉茴芹;總黃酮;抗氧化;抑制亞硝化反應(yīng)

中圖分類號：S567.23+9? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A? ? ? ? ?DOI 編碼：10.3969/j.issn.1006-6500.2019.07.002

Abstract： In order to determine the antioxidant activity of total flavonoids of Pimpinella diversifolia DC.， the total flavonoids were extracted by ultrasonic-assisted extraction method using Pimpinella diversifolia DC. as the raw material. The antioxidant activity of total flavonoids of Pimpinella diversifolia DC. was determined by hydroxyl radical， superoxide anion， reducing power and FRAP method with Vc as the positive control， the scavenging rate of sodium nitrite was determined for the total flavonoids of Pimpinella diversifolia DC.. Furthermore， nitrosamine synthesis inhibition rate of total flavonoids of Pimpinella diversifolia DC. was examined by UV photolysis and colorimetry. The results showed that the total flavonoids of Pimpinella diversifolia DC. were better than Vc of the same concentration on the elimination of hydroxyl free radicals. The measurement results of other three methods showed that the antioxidant activity of Vc was better than Pimpinella diversifolia DC.. In addition， the total flavonoids of Pimpinella diversifolia DC. could effectively clear sodium nitrite at low pH， certain concentration and effect time. At pH 3.0， the total flavonoids of Pimpinella diversifolia DC.could effectively inhibit the synthesis of nitrosamines within the experimental concentration range. The total flavonoids of Pimpinella diversifolia DC. had strong antioxidant activity and inhibition ability of nitrification.

Key words： Pimpinella diversifolia DC.; total flavonoids; anti-oxidation; inhibition ability of nitrification

異葉茴芹（Pimpinella diversifolia DC.）是傘形科茴芹屬植物[1]，傳統(tǒng)上常用于治療偏頭痛、蛇蟲咬傷等疾病[2]。其含有糖類、皂苷、酚類、香豆素以及油性揮發(fā)物質(zhì)，具有抗菌、平喘及一定的抗炎、凝血、止血作用[3-5]。

在正常生物體內(nèi)，氧化與抗氧化系統(tǒng)處于相對穩(wěn)定的動態(tài)平衡中，若失去平衡，體內(nèi)氧自由基含量升高，便會引發(fā)機(jī)體產(chǎn)生各種病變和老化，危害身體健康[6]。黃酮類化合物因其具有良好的抗氧化活性，毒副作用小，在自然界的植物中普遍存在而引起人類的關(guān)注，其具有止咳、護(hù)肝、降低血清膽固醇、抑制腫瘤增長等作用[7-9]。此外，由于自然界中廣泛存在著硝酸鹽和亞硝酸鹽，人體攝入后可以在體內(nèi)合成亞硝胺，其具有一定的致癌作用，會使多種器官產(chǎn)生惡性腫瘤[10]。很多試驗(yàn)研究表明，黃酮類化合物還能有效的清除亞硝酸鹽和阻斷亞硝胺合成[11-16]。目前已有研究人員對異葉茴芹總黃酮的最佳提取方法進(jìn)行了探究[17]，但沒有對它的功能進(jìn)一步研究。為了綜合利用異葉茴芹資源，本課題對異葉茴芹總黃酮抗氧化活性及拮抗亞硝酸鈉能力進(jìn)行研究，為進(jìn)一步挖掘異葉茴芹的藥用價(jià)值提供試驗(yàn)及理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

異葉茴芹從福建省壽寧縣購得，取地上部剪碎后用粉碎機(jī)粉碎，過直徑為0.25 mm的篩。粉末在電熱鼓風(fēng)干燥箱中60 ℃干燥后用密封袋密封，貼標(biāo)簽置于干燥處備用。

1.2 試劑與儀器

36%鹽酸、30%過氧化氫、焦性沒食子酸、三氯乙酸、無水乙醇、硝酸鋁、鐵氰化鉀、氫氧化鈉、氯化鐵、三水合醋酸鈉、磷酸二氫鈉、水楊酸、磷酸氫二鈉、七水合硫酸亞鐵、檸檬酸、亞硝酸鈉、三羥甲基氨基甲烷、36%乙酸、磺胺酸、N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽、抗壞血酸，此外40%二甲胺溶液、1-萘胺、三吡啶基三嗪（TPTZ）從衡陽市博生生物科技有限公司購得，以上試劑均為分析純。

101-1AB型電熱鼓風(fēng)干燥箱電熱鼓風(fēng)干燥箱（天津市泰斯特儀器有限公司）;HH-S恒溫水浴鍋（國勝實(shí)驗(yàn)儀器廠）;JA2603B電子天平（上海精科天美科學(xué)儀器有限公司）;SB-5200D超聲波清洗機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司）;722SP可見分光光度計(jì)（上海棱光技術(shù)有限公司）;SW-CJ-1FD凈化工作臺（上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司）;TDL-40B-II離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器）;KC-100高速粉碎機(jī)（北京開創(chuàng)同和科技發(fā)展有限公司）等。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 異葉茴芹總黃酮提取及含量測定 根據(jù)文獻(xiàn)所述，取除雜干燥后的異葉茴芹地上部粉末，用無水乙醚洗脫葉綠素，取1 g處理后的粉末用60%乙醇溶液以液料比30∶1混合，200 W超聲處理40 min，離心后取上清液，放置待測[17]。用蕓香葉苷作對照品建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，平行取3次異葉茴芹提取液0.1 mL測吸光度，取平均值，計(jì)算異葉茴芹提取液總黃酮濃度及提取率。計(jì)算公式如下：

異葉茴芹總黃酮提取率=×100%（1）

式中，C為稀釋后異葉茴芹總黃酮的濃度（μg·mL-1），V為提取液的體積（mL），M為處理后異葉茴芹粉末的質(zhì)量（g）。

1.3.2 異葉茴芹總黃酮抗氧化活性的測定 （1）水楊酸法測定羥基自由基清除能力。將異葉茴芹總黃酮提取液稀釋濃度至2.0 mg·mL-1，放置備用。分別取0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 mL的稀釋液加入相對應(yīng)的試管中，用60%乙醇溶液補(bǔ)至1.0 mL，再按照表1所示依次添加試劑，靜置7 min后，于510 nm處測量吸光度，記為Xi。另取7支試管，1支以60%乙醇代替樣品稀釋液測吸光度，計(jì)為X0;5支以蒸餾水代替過氧化氫溶液測吸光度，記為Xj;1支加入1.0 mL 相同濃度的硫酸亞鐵溶液和水楊酸-無水乙醇溶液及2.0 mL蒸餾水，并用所得的混合溶液調(diào)零[18]。同時(shí)拿相同質(zhì)量分?jǐn)?shù)的Vc為對比，按此方法計(jì)算樣品溶液對羥基自由基的清除能力，計(jì)算公式如下：

羥基自由基清除率=×100%? ? ? ? ? ? ? ? ? （2）

（2）測定超氧陰離子自由基清除率。在試管中，依次加入1.0 mL不同濃度的異葉茴芹總黃酮稀釋液，4.5 mL pH值為8.2的Tris-HCl緩沖液，0.5 mL 2.5 mmol·L-1的焦性沒食子酸溶液，迅速搖勻后在420 nm波長處每隔0.5 min測吸光度并記錄，以60%乙醇溶液調(diào)零，測定時(shí)間為4 min[14]。其他條件不變，以蒸餾水代替異葉茴芹總黃酮溶液測吸光度，計(jì)算吸光值隨時(shí)間的變化率K。

將Vc用60%乙醇配制成與異葉茴芹總黃酮相同濃度梯度的溶液作為對照，試驗(yàn)操作同上，按照下式計(jì)算異葉茴芹總黃酮、Vc對超氧陰離子自由基的清除率。

超氧陰離子自由基清除率=×100% （3）

式中，K0為不加樣液時(shí)超氧陰離子隨時(shí)間的變化率，Ki為加入樣液后超氧陰離子隨時(shí)間的變化率。

（3）還原力的測定。將適量蒸餾水倒入250 mL燒杯中置冰箱冷藏備用，取1.0 mL不同濃度的異葉茴芹總黃酮稀釋液于試管中，再依次加入2.5 mL pH值為6.6的PBS緩沖液，2.5 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1% 的鐵氰化鉀溶液，搖勻后置于恒溫水浴鍋中50 ℃水浴20 min，將試管迅速取出，放入已預(yù)冷的蒸餾水中冷卻，加入1.0 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的三氯乙酸溶液，搖勻后取2.5 mL于離心管中，加入2.5 mL蒸餾水，0.5 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的三氯化鐵溶液，混勻后靜置5～6 min，4 000 r·min-1離心10 min[19]。用60%乙醇溶液調(diào)零，在700 nm波長處測吸光度，記為A，其他條件不變，以60%乙醇溶液代替樣液于700 nm處測吸光度，記為A0。以Vc作對照，操作步驟同上，比較異葉茴芹總黃酮與Vc的還原力，平行做3次，計(jì)算公式如下：

還原力=A-A0 （4）

（4）FRAP法測定抗氧化活性。在試管中分別加入0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 mL 1 mmol·L-1的硫酸亞鐵溶液，再加入一定量的蒸餾水補(bǔ)充體積至1 mL，取4.5 mL FRAP試劑加入試管，搖勻后于37 ℃下水浴10 min，在593 nm波長處測吸光度[20]。以硫酸亞鐵濃度（mmol·L-1）為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

分別取不同體積的異葉茴芹總黃酮稀釋液，用60%乙醇溶液補(bǔ)至1 mL，其余操作如上。平行做3次，同時(shí)用60%乙醇溶解的Vc溶液作對照。樣品的抗氧化性以混合溶液的吸光度達(dá)到與標(biāo)準(zhǔn)曲線中相同吸光度時(shí)所代表的硫酸亞鐵濃度（mmol·L-1）表示，其所代表的硫酸亞鐵濃度越高，說明其抗氧化活性越高。

1.3.3 不同條件下異葉茴芹總黃酮對亞硝酸鈉清除率的測定 （1）不同pH值下亞硝酸鈉回歸曲線的建立。取5組試管，分別移取0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 mL 5 μg·mL-1的亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液于試管中。每組試管再各加入2.0 mL 不同pH值的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液，放入恒溫水浴鍋中37 ℃水浴60 min，取出后立即加入2.0 mL用20%鹽酸溶解的0.4%磺胺酸溶液，搖勻后放置4 min，加入1.0 mL 0.1% N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽溶液，用移液管移取蒸餾水補(bǔ)充體積至25 mL，保鮮膜封試管口，上下?lián)u晃至顏色均勻[14]。放置15 min，于538 nm波長下測吸光度，以亞硝酸鈉濃度（μg·mL-1）為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制回歸曲線。

（2）不同pH值下異葉茴芹總黃酮對亞硝酸鹽清除率的測定。取5組試管，每組試管分別加入2.0 mL不同pH值的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液，1.0 mL質(zhì)量濃度為0.3 mg·mL-1的異葉茴芹總黃酮溶液，2.0 mL 5 μg·mL-1的亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液，用保鮮膜封口后，于37 ℃下水浴60 min，其余與1.3.3（1）中描述的操作步驟一致，最后在538 nm波長下測吸光度，記作Qi，在相同pH值下亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)曲線中，計(jì)算出不加提取液時(shí)亞硝酸鈉濃度的吸光度記作Q0，每組平行做3次，計(jì)算亞硝酸鈉清除率的公式如下：

亞硝酸鈉清除率=×100% （5）

（3）不同反應(yīng)時(shí)間條件下異葉茴芹總黃酮對亞硝酸鈉清除率的測定。取9支試管，加入2.0 mL pH值為3.0的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液，其余操作與1.3.3（2）一致，用保鮮膜將試管口封住，放置在恒溫水浴鍋中37 ℃分別水浴10，20，30，40，50，60，80，

100，120 min，取出后，操作步驟同1.3.3（1），平行做3次，于538 nm波長下測吸光度，根據(jù)公式（5）計(jì)算亞硝酸鈉清除率。

（4）不同濃度異葉茴芹總黃酮對亞硝酸鈉清除率的測定。取試管若干，分別加入1 mL不同濃度的異葉茴芹總黃酮溶液，2.0 mL pH值為3.0的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液，2 mL 5 μg·mL-1亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液，放置于恒溫水浴鍋中37 ℃水浴60 min，取出后操作步驟同上，計(jì)算亞硝酸鈉清除率。

1.3.4 不同濃度異葉茴芹總黃酮的亞硝胺合成阻斷率的測定 分別精密移取一定濃度梯度的異葉茴芹總黃酮稀釋液于試管中，加入10.0 mL pH值為 3.0 的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液，1.0 mL 1 mmol·L-1 的亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液，1.0 mL摩爾濃度為1 mmol·L-1的二甲胺溶液，在 37 ℃下恒溫水浴60 min，用蒸餾水稀釋至25 mL并搖勻，用移液槍吸取1.0 mL上述溶液加到小燒杯中，加入0.5 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%的無水碳酸鈉溶液，放置于超凈工作臺中，用紫外光照射15 min，取出后加入1.5 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的磺胺酸溶液，再加入1.5 mL用30%乙醇溶液溶解的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 0.1%的1-萘胺，蒸餾水 0.5 mL，搖勻后靜置 15 min[21]。用可見分光光度計(jì)在525 nm波長處測吸光度，根據(jù)下式計(jì)算亞硝胺合成阻斷率。

亞硝胺合成阻斷率=×100% （6）

式中，W0是未加樣液時(shí)的吸光度，Wy是加入樣液后的吸光度。

2 結(jié)果與分析

2.1 異葉茴芹提取液中總黃酮的含量與提取率

蕓香葉苷標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立：以蕓香葉苷對照品濃度（μg·mL-1）為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1，回歸方程為：y = 0.01x + 0.015，R2 = 0.997 6，具有良好的線性關(guān)系。

異葉茴芹提取液測得的吸光度平均值為0.310，標(biāo)準(zhǔn)差為0.003，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線得出總黃酮濃度為29.5 μg·mL-1，代入公式（1）可知異葉茴芹提取液中總黃酮的提取率為8.85%。

2.2 異葉茴芹總黃酮的抗氧化活性

2.2.1 羥基自由基的清除率 Fenton反應(yīng)體系中產(chǎn)生的羥基自由基可以被水楊酸捕獲，生成的物質(zhì)在510 nm波長處有強(qiáng)吸收。若加入具有清除羥基自由基能力的抗氧化劑，便會與水楊酸產(chǎn)生競爭，利用分光光度計(jì)測其吸光度，便可根據(jù)公式計(jì)算被測物對羥基自由基的清除能力。

圖2結(jié)果表明，異葉茴芹總黃酮和Vc對羥自由基具有一定的清除作用。異葉茴芹總黃酮和Vc在質(zhì)量濃度為2.0 mg·mL-1時(shí)的羥基自由基清除率分別達(dá)到了18.88%和8.76%。從總體的走勢來看，異葉茴芹總黃酮比Vc具有更強(qiáng)的羥基自由基清除能力，且隨著濃度的升高而不斷增大。

2.2.2 超氧陰離子自由基清除率 焦性沒食子酸在pH值大于7.0時(shí)，會產(chǎn)生有色中間物與超氧陰離子，而超氧陰離子會進(jìn)一步促進(jìn)焦性沒食子酸產(chǎn)生更多的有色中間物，該有色中間物在420 nm處有最大吸收峰。黃酮類物質(zhì)中的酚羥基會與超氧陰離子形成穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)，從而使超氧陰離子失去氧化能力，因此，可以利用有色中間物產(chǎn)生的多少來判斷待測液的抗氧化活性[23]。

由圖3可知，異葉茴芹總黃酮對超氧陰離子自由基具有一定的清除能力，且濃度與清除力呈正相關(guān)關(guān)系，剛開始時(shí)增幅較大，后趨于平緩。當(dāng)濃度達(dá)到0.1 mg·mL-1時(shí)，異葉茴芹總黃酮和Vc的超氧自由基清除率分別達(dá)到了16.23%和31.09%，由此說明，異葉茴芹總黃酮具有較強(qiáng)的抗氧化活性，但低于同濃度Vc的抗氧化性。

2.2.3 還原力 抗氧化劑能將鐵氰化鉀還原為亞鐵氰化鉀，后者與三氯化鐵反應(yīng)生成普魯士藍(lán)，其在700 nm波長處有強(qiáng)吸收。從這個(gè)角度來講，吸光度越高，說明待測液抗氧化活性越好。

由圖4可知，異葉茴芹總黃酮及Vc都有一定的還原力，且隨著樣液濃度的增加而增大，初始時(shí)，在濃度相同的情況下，異葉茴芹總黃酮提取液的還原力稍低于Vc溶液，之后異葉茴芹總黃酮的還原力增長平緩，而Vc的還原力增長較快，兩者差距逐漸增大?？偟膩碚f，Vc的還原力強(qiáng)于異葉茴芹總黃酮，這與同屬傘形科的小茴香測出的還原力與Vc的比較結(jié)果一致[24]。

2.2.4 FRAP法測定抗氧化活性 硫酸亞鐵濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖5所示：y = 5.847 1x + 0.005 1，R2 = 0.997 8。

從圖6可以看出，異葉茴芹總黃酮與Vc都具有一定的還原性，在0.4～2 mg·mL-1的濃度范圍內(nèi)，兩者的FRAP值隨著濃度的增加而增高，且在相同濃度下，Vc的抗氧化效果優(yōu)于異葉茴芹總黃酮，其原因?yàn)閬嗚F離子能夠減弱黃酮類化合物的抗氧化性[24]。此外，異葉茴芹總黃酮及Vc的濃度與FRAP值呈一定的線性回歸關(guān)系，其回歸方程分別為y = 0.026 9x-0.027 5，R2=0.999 9;y=0.078 2x-0.091 7，R2= 0.987 7。

2.3 異葉茴芹總黃酮在不同條件下對亞硝酸鈉的清除率

2.3.1 不同pH值下亞硝酸鈉的標(biāo)準(zhǔn)曲線 在pH值小于7.0的條件下，亞硝酸鹽與磺胺酸反應(yīng)后會與N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽偶合形成紫紅色物質(zhì)，在538 nm處用分光光度法建立標(biāo)準(zhǔn)曲線測得亞硝酸鹽含量。

不同pH值下亞硝酸鈉的標(biāo)準(zhǔn)曲線見表2，從斜率角度看，當(dāng)pH值在2.2～4.6時(shí)，亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率是不斷增大的，當(dāng)pH值為5.4時(shí)，斜率又降為0.028 5。

2.3.2 不同pH值下異葉茴芹總黃酮對亞硝酸鈉的清除率 由圖7可知，在加入濃度為0.3 mg·mL-1異葉茴芹總黃酮后，亞硝酸鈉的清除率隨著pH值的升高顯著降低。其原因是在較低的pH值條件下，亞硝酸鈉可轉(zhuǎn)化為亞硝胺，然后生成N2O2，其可被總黃酮還原為NO，而在pH值較高時(shí)，亞硝酸鈉不容易被還原[26-27]。故在低pH值條件下，有利于異葉茴芹總黃酮對亞硝酸鈉的清除。

2.3.3 不同反應(yīng)時(shí)間下異葉茴芹總黃酮對亞硝酸鈉的清除率 由圖8可知，在加入相同濃度的異葉茴芹總黃酮后，亞硝酸鈉清除率在20～80 min范圍內(nèi)不斷增加，在80 min時(shí)清除率達(dá)到了65.16%，在100 min時(shí)略有下降，之后在120 min時(shí)又有上升的趨勢，而且清除率達(dá)到了70.69%，高于80 min時(shí)的亞硝酸鈉清除率。

2.3.4 不同濃度異葉茴芹總黃酮對亞硝酸鈉的清除率 由圖9可知，在總體趨向上，亞硝酸鈉的清除率隨著異葉茴芹總黃酮濃度的增加稍有上升，異葉茴芹總黃酮濃度為1.2 mg·mL-1時(shí)，亞硝酸鈉的清除率達(dá)到最高，為61.69%。

2.4 不同濃度異葉茴芹總黃酮的亞硝胺合成阻斷率

在pH值小于7.0的環(huán)境條件下，二甲胺與亞硝酸鈉反應(yīng)生成的產(chǎn)物在紫外光燈下照射后分解出的亞硝酸鹽，其與磺胺酸發(fā)生重氮化后會與1-萘胺反應(yīng)生成紫紅色產(chǎn)物。當(dāng)在樣液中加入二甲胺與亞硝酸鈉時(shí)，總黃酮與二甲胺對亞硝酸根的反應(yīng)產(chǎn)生競爭，以此達(dá)到阻斷亞硝胺的合成的目的。

由圖10可以看出，隨著異葉茴芹總黃酮濃度與亞硝胺合成阻斷率呈正相關(guān)，開始時(shí)稍有上升，之后上升平緩，在其濃度為1 mg·mL-1時(shí)，亞硝胺合成阻斷率達(dá)到了50.69%。

3 結(jié)論與討論

在試驗(yàn)中，異葉茴芹的提取率低于文獻(xiàn)中的提取率16.98%[17]，這可能與異葉茴芹的來源、洗脫葉綠素的時(shí)間和試劑生產(chǎn)廠家等不同有關(guān)。在羥基自由基的清除中，異葉茴芹總黃酮優(yōu)于Vc，其原因?yàn)槿齼r(jià)鐵離子與黃酮類化合物中的羥基或鄰位羥基及鄰位酮基配位，穩(wěn)定了中間產(chǎn)物，有利于異葉茴芹總黃酮對羥基自由基的清除[22]。對于Vc的還原力高于異葉茴芹總黃酮，這可能是由于Vc為單一物質(zhì)，而總黃酮中含有多種不同結(jié)構(gòu)的黃酮類化合物，他們之間可能存在相互作用，致使其還原力不如Vc [25]。

本試驗(yàn)采用超聲輔助乙醇浸提法提取異葉茴芹總黃酮，得到的總黃酮濃度為2.95 mg·mL-1，提取率為8.85%。在抗氧化性方面，異葉茴芹總黃酮具有較好的抗氧化活性。在羥基自由基的清除上，異葉茴芹總黃酮優(yōu)于同等濃度的Vc，另外三種測抗氧化活性的方法中，Vc的抗氧化活性好于異葉茴芹總黃酮。此外，異葉茴芹總黃酮在較低pH值、一定的濃度和作用時(shí)間內(nèi)，能夠有效的清除亞硝酸鈉，在pH值為3.0的時(shí)候，異葉茴芹總黃酮在試驗(yàn)濃度范圍內(nèi)，能有效地抑制亞硝胺的合成。與本次試驗(yàn)中所用到的化學(xué)抗氧化方法相比，以細(xì)胞為反應(yīng)主體的CAA法更接近人體的生理?xiàng)l件，生物相關(guān)性也更強(qiáng)，具有一定的實(shí)際意義[28]。但該方法也有一些困難需要克服，例如，如何將CAA的結(jié)果與動物體內(nèi)試驗(yàn)的結(jié)果相聯(lián)系，試驗(yàn)方法復(fù)雜等問題，這些需要進(jìn)一步探討[29]。有研究發(fā)現(xiàn)異葉茴芹中還含有香豆素、鞣質(zhì)、皂苷等成分[3]，所以應(yīng)該進(jìn)一步探究其各個(gè)成分的功能，以期更好地利用和開發(fā)異葉茴芹。

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