禽流感病毒H₇N₉亞型實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展

莊金秋 梅建國(guó) 張穎 苗立中 王玉茂

摘? 要：H7N9亞型禽流感病毒是我國(guó)于2013年3月首次從人群中發(fā)現(xiàn)的一種新亞型禽流感病毒。該病毒在家禽中無(wú)明顯致病性，卻能感染人類并引起較高的病死率。因此，H7N9病毒的早期的快速檢測(cè)對(duì)于疫情的控制至關(guān)重要。本文對(duì)H7N9病毒實(shí)驗(yàn)室最新研究進(jìn)展進(jìn)行了綜述，以期為科研工作者和廣大養(yǎng)殖場(chǎng)戶更好地研究和防治本病提供參考。

關(guān)鍵詞：禽流感病毒;H7N9;檢測(cè);研究進(jìn)展

中圖分類號(hào)：S858.31? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A? ? ?文章編號(hào)：1673-1085（2019）06-0053-07

禽流感是由禽流感病毒（Avian Influenza Virus，AIV）引起的一種急性呼吸道傳染病，具有傳染性強(qiáng)、傳播速度快、抗原易變異等特點(diǎn)。禽流感病毒是甲型流感病毒的一種，依據(jù)流感病毒表面血凝素（HA）和神經(jīng)氨酸酶（NA）蛋白抗原性不同，理論上HA與NA的不同組合可形成多達(dá)144種不同亞型的禽流感病毒。H7N9亞型禽流感病毒是我國(guó)于2013年3月首次從人群中發(fā)現(xiàn)的一種新亞型禽流感病毒[1]。H7N9病毒最顯著的特征之一是在家禽中無(wú)明顯致病性，卻能感染人類并引起較高的病死率。雖然H7N9病毒在禽類身上呈現(xiàn)弱毒性，但攜帶病毒[2]。因此，H7N9病毒早期的快速檢測(cè)對(duì)于疫情的控制至關(guān)重要。本文對(duì)H7N9病毒的實(shí)驗(yàn)室最新研究進(jìn)展進(jìn)行了綜述，以期為科研工作者和廣大養(yǎng)殖場(chǎng)戶更好地研究和防治本病提供參考：

1? 病毒分離與鑒定

病毒分離鑒定是禽流感病毒H7N9亞型病原學(xué)診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”。采集新鮮標(biāo)本接種到SPF雞胚、MDCK或LLC～MKZ細(xì)胞中進(jìn)行培養(yǎng)，根據(jù)細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE）、血凝和血凝抑制試驗(yàn)（HA&HI）來(lái)判定培養(yǎng)液中是否含有流感病毒。楊式芹等[3]（2013）利用SPF雞胚從H7N9流感病毒患者的咽拭子標(biāo)本中分離出該病毒。病毒分離鑒定由于培養(yǎng)耗時(shí)長(zhǎng)，操作繁瑣，不利于快速診斷，而且H7N9病毒分離需在經(jīng)過(guò)批準(zhǔn)的BSL-3級(jí)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展，一般基層實(shí)驗(yàn)室不具備這種試驗(yàn)條件，不易實(shí)施。

2? 血清學(xué)方法

2.1? 血凝抑制試驗(yàn)（HI）? HI試驗(yàn)是測(cè)定禽流感病毒血清抗體最常用的方法。H7N9亞型禽流感病毒血清學(xué)檢測(cè)對(duì)于雞群H7N9亞型禽流感病毒的感染情況和免疫水平的監(jiān)測(cè)具有重要意義。在我國(guó)，高致病性禽流感病毒的免疫防控策略是通過(guò)滅活疫苗的免疫維持雞群中高抗體水平，國(guó)家規(guī)定雞群個(gè)體H7N9亞型禽流感HI抗體效價(jià)≥4log2、群體免疫合格個(gè)體數(shù)量占群體總數(shù)的70%（含）以上的標(biāo)準(zhǔn)[4]。HI對(duì)檢驗(yàn)者專業(yè)要求高且工作量大，不利于開(kāi)展大規(guī)?？贵w水平監(jiān)測(cè)。

2.2? 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）? ELISA方法具有靈敏、快速、高效、簡(jiǎn)便、高通量等優(yōu)點(diǎn)，并且待檢血清不需要進(jìn)行前處理，因此更加適合實(shí)驗(yàn)室和田間大批樣本抗體水平監(jiān)測(cè)，對(duì)雞群及時(shí)、精準(zhǔn)的免疫提供指導(dǎo)。王洋等[5]（2017）建立了一種基于H7N9流感病毒H7-53TM HA蛋白為抗原的間接ELISA方法，能夠檢測(cè)不同分支疫苗株免疫的H7N9亞型禽流感病毒抗體，檢測(cè)結(jié)果與HI試驗(yàn)結(jié)果具有強(qiáng)相關(guān)性。范俊青等[6]（2019）用H7N9標(biāo)準(zhǔn)抗原包被ELISA板，將HRP標(biāo)記的單克隆抗體作為競(jìng)爭(zhēng)抗體，建立了檢測(cè)禽流感病毒H7N9亞型抗體的競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法并制成試劑盒。應(yīng)用該方法對(duì)150份血清樣品進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果與HI試驗(yàn)有99.3%的符合率。

2.3? 免疫膠體金技術(shù)? 免疫膠體金技術(shù)具有簡(jiǎn)便快速、特異性高、實(shí)用性強(qiáng)等特點(diǎn)，非常適于基層和現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)使用，為H7N9亞型禽流感病毒的快速檢測(cè)提供了一個(gè)極好的檢測(cè)方法，也為生物安全工作提供了極大便利。Chan等[7]（2013）利用7種不同試劑廠家的免疫膠體金試劑與兩種分子生物學(xué)檢測(cè)試劑對(duì)H7N9流感病毒安徽株和浙江株進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)免疫膠體金技術(shù)與分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)靈敏度相似。Jin等[8]（2014）通過(guò)對(duì)35例H7N9流感病毒感染患者的140份咽拭子、唾液和糞便標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，分析發(fā)現(xiàn)新型的膠體金快速免疫層析技術(shù)比RT-PCR具有高特異性。鄭騰等[9]（2017）以熒光納米顆粒為標(biāo)記物，采用免疫層析法制備H7N9熒光納米顆粒試紙條。應(yīng)用該熒光試紙條與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)禽流感RT-PCR方法同時(shí)對(duì)200份樣品進(jìn)行檢測(cè)，符合率達(dá)到93.5%。

3? 分子生物學(xué)方法

3.1? RT-PCR? RT-PCR具有特異、敏感、快速等優(yōu)點(diǎn)，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于H7N9亞型禽流感病毒核酸檢測(cè)。莫秋華等[10]（2013）針對(duì)H7N9亞型禽流感病毒的HA和NA基因設(shè)計(jì)特異性引物，建立一步法四重RT-PCR方法，對(duì)30份核酸樣品經(jīng)盲法試驗(yàn)評(píng)價(jià)與實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)結(jié)果符合率為100%。王云鶴等[11]（2015）也根據(jù)H7N9亞型禽流感病毒HA和NA核苷酸序列，設(shè)計(jì)并合成2對(duì)引物，建立了快速檢測(cè)H7N9亞型禽流感病毒的一步法RT-PCR方法，可以從陽(yáng)性棉拭子浸出液中擴(kuò)增出目的基因片段。蔣文明等[12]（2015）也針對(duì)H7N9亞型禽流感病毒的HA基因和NA基因保守序列，在建立H7亞型和N9亞型單項(xiàng)RT-PCR的基礎(chǔ)上，建立了同時(shí)檢測(cè)H7亞型和N9亞型的雙重RT-PCR。利用該方法對(duì)30份臨床樣品進(jìn)行H7N9病毒檢測(cè)，與病毒分離的符合率為100%。劉根梅等[13]（2018）根椐H7亞型禽流感病毒的HA基因、N9亞型禽流感病毒的NA基因和所有亞型禽流感病毒M基因的保守序列，分別設(shè)計(jì)了3對(duì)特異性引物，建立了檢測(cè)H7N9亞型禽流感病毒的三重RT-PCR方法。該方法為快速鑒別和監(jiān)測(cè)H7N9亞型禽流感病毒提供了技術(shù)手段，特別是對(duì)于尚不具備熒光定量RT-PCR檢測(cè)條件的實(shí)驗(yàn)室，該方法是一種鑒別H7N9病毒的重要檢測(cè)方法。

3.2? 熒光定量RT-PCR? 實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR比常規(guī)RT-PCR具有更高的敏感性和特異性，而且可以對(duì)樣品進(jìn)行定量分析，已大規(guī)模應(yīng)用于禽流感監(jiān)測(cè)網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室。Zhu等[14]（2013）針對(duì)1例安徽株和2例上海株H7N9亞型禽流感病毒的HA、NA基因序列設(shè)計(jì)特異性引物和探針，建立了SYBR GreenⅠ熒光定量RT-PCR方法，其最低檢測(cè)限為10拷貝。Wong等[15]（2013）設(shè)計(jì)的一步法實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR對(duì)H7N9亞型禽流感病毒檢測(cè)，整個(gè)檢測(cè)過(guò)程只需要3h，檢出限達(dá)到0.04 TCID50。羅思思等[16]（2013）、羅寶正等[17]（2014）、周其偉等[18]（2015）先后根據(jù)H7N9亞型禽流感病毒HA和NA的基因序列，設(shè)計(jì)兩套特異性的引物和探針，建立了基于TaqMan探針的熒光定量RT-PCR。其方法不但能夠?qū)⒘鞲胁《綡7亞型與其他亞型區(qū)分開(kāi)，而且可將新型N9亞型流感病毒與原有的N9亞型區(qū)分開(kāi)。葉惠儀等[19]（2015）建立的熒光定量RT-PCR方法檢測(cè)H7N9亞型禽流感抗原，H7體系可以檢測(cè)到10-10抗原稀釋度，N9體系能檢測(cè)到10-9抗原稀釋度，且對(duì)H9亞型禽流感抗原、H5亞型禽流感抗原及新城疫抗原無(wú)交叉反應(yīng)。王國(guó)政[20]（2014）根據(jù)H7N9亞型禽流感保守區(qū)M基因、H7基因、N9基因、W及內(nèi)參RP基因分別設(shè)計(jì)高度特異性的引物與TaqMan探針，建立了四重?zé)晒舛縍T-PCR方法，采用一步法可同時(shí)檢測(cè)上述各基因。張杰等[21]（2018）根據(jù)禽流感病毒H7N9亞型HA保守基因、HA裂解位點(diǎn)和NA基因?yàn)闄z測(cè)靶標(biāo)，設(shè)計(jì)特異性引物和MGB-TaqMan探針，建立了三重?zé)晒舛縍T-PCR方法，能夠同時(shí)檢測(cè)禽流感病毒H7N9經(jīng)典毒株和新型變異毒株。由于熒光定量RT-PCR需要特殊的儀器擴(kuò)增儀，無(wú)法滿足基層和現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)的需求。

3.3? PCR-ELISA? PCR-ELISA通過(guò)普通PCR擴(kuò)增，以ELISA作為最終結(jié)果判定手段。章倩云等[22]（2016）針對(duì)禽流感病毒M基因、H7基因、N9基因3個(gè)基因片段的保守序列，設(shè)計(jì)特異性引物，通過(guò)生物素與地高辛的特異性標(biāo)記，建立了PCR-ELISA聯(lián)合檢測(cè)禽流感病毒的方法。其敏感度比普通PCR提高了100倍。相比于實(shí)時(shí)熒光定量PCR，此方法不需要昂貴的儀器，操作也更加簡(jiǎn)單，更易于普及使用，為禽流感病毒的流行病學(xué)調(diào)查和早期診斷提供了新的方法。

3.4? 等溫核酸擴(kuò)增技術(shù)? 近年來(lái)新型等溫核酸擴(kuò)增技術(shù)極大縮短了核酸擴(kuò)增檢測(cè)時(shí)間，得到了快速的發(fā)展，逆轉(zhuǎn)錄-環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（RT-LAMP）、依賴核酸序列的等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（NASBA）、重組酶聚合酶介導(dǎo)的等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（RPA）、解旋酶依賴性等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（HDA）等已被成功應(yīng)用于禽流感病毒的檢測(cè)。

3.4.1? 逆轉(zhuǎn)錄-環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（RT-LAMP）? ?RT-LAMP技術(shù)具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、簡(jiǎn)便快速、檢測(cè)結(jié)果可視化，無(wú)需特殊設(shè)備等優(yōu)點(diǎn)，非常適合基層H7N9亞型禽流感病毒的早期快速檢測(cè)，在禽流感病原監(jiān)測(cè)上具有較好的應(yīng)用前景。董志珍等[23]（2013）利用RT-LAMP檢測(cè)H7N9亞型禽流感病毒安徽株，其靈敏度達(dá)到10個(gè)拷貝，靈敏度與實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR一致，但從檢測(cè)時(shí)間上看RT-LAMP完成1次檢測(cè)可在1.5h內(nèi)，而實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR則需要3h。Zhang等[24]（2013）利用RT-LAMP對(duì)135份H7N9亞型流感病毒臨床樣本進(jìn)行檢測(cè)，H7亞型基因的檢出限度為10拷貝，N9基因檢測(cè)限度為5拷貝，靈敏度是實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR的100倍。張錦海等[25]（2015）成功建立了檢測(cè)H7N9亞型禽流感病毒的HA基因、NA基因的RT-LAMP方法。對(duì)142份臨床標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)HA基因、NA基因的敏感性分別達(dá)到10拷貝/反應(yīng)、5拷貝/反應(yīng)。崔淑娟等[26]（2015）針對(duì)H7N9亞型禽流感病毒HA基因的7個(gè)區(qū)域設(shè)計(jì)5條特異性引物，建立RT-LAMP方法，最低檢出限為0.01pg。對(duì)69份臨床疑似標(biāo)本利用該RT-LAMP方法和實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR方法同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，其檢測(cè)結(jié)果的靈敏度、特異度和總符合率均為100%。

3.4.2? 依賴核算序列的擴(kuò)增技術(shù)（NASBA）? ? NASBA技術(shù)具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、反應(yīng)迅速和操作簡(jiǎn)單等特點(diǎn)，特異性和靈敏性均高于PCR，使用的過(guò)程當(dāng)中不需要PCR儀等特殊的設(shè)備，只使用恒溫水浴鍋就可以完成整個(gè)擴(kuò)增反應(yīng)過(guò)程，更適合基層實(shí)驗(yàn)室使用。Collins等[27]（2003）基于M基因和H7亞型禽流感病毒的HA基因已成功開(kāi)發(fā)出可檢測(cè)禽流感群特異性H7亞型（NASBA-H7）的NASBA/ECL檢測(cè)試劑盒，比商品化的免疫檢測(cè)試劑盒敏感性至少高1000倍，比常規(guī)PCR方法也敏感許多，與現(xiàn)行病毒培養(yǎng)的檢測(cè)方法的靈敏度相當(dāng)，只需6h就可準(zhǔn)確無(wú)誤地檢測(cè)出病毒。該方法的優(yōu)點(diǎn)是RNA分子不易對(duì)實(shí)驗(yàn)儀器和環(huán)境造成污染，避免了試驗(yàn)結(jié)果的假陽(yáng)性，缺點(diǎn)是檢測(cè)成本過(guò)高。

3.4.3? 重組酶聚合酶介導(dǎo)的等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（RPA）? RPA被稱為是可以替代PCR的新型核酸檢測(cè)技術(shù)，具有操作簡(jiǎn)便、反應(yīng)快速、特異性好、靈敏度高等特點(diǎn)，為H7N9亞型禽流感病毒的現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)提供了新的分子工具。趙康辰等[28]（2016）根據(jù)H7N9亞型禽流感病毒HA基因和NA基因的保守區(qū)序列，分別設(shè)計(jì)引物及探針，建立RT-RPA方法。結(jié)果顯示，H7反應(yīng)體系和N9反應(yīng)體系的最低檢出限分別為10拷貝/μl和100拷貝/μl，與實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR一致性較高。王瀟等[29]（2018）根據(jù)禽流感病毒H7亞型的HA保守序列，并按照RPA引物探針的要求，設(shè)計(jì)多對(duì)引物及探針，建立RT-RPA方法。該方法與實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR方法相比，靈敏性稍差，但該方法的檢測(cè)快速，僅需要20min。

3.4.4? 解旋酶依賴性等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（HDA）? HDA技術(shù)是模擬體內(nèi)DNA復(fù)制機(jī)制的體外等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)，原理簡(jiǎn)單、操作方便、適用范圍廣，特別適合診斷產(chǎn)品開(kāi)發(fā)，在H7N9亞型禽流感病毒現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)方面也具有很大的應(yīng)用空間。方斌等[30]（2018）根據(jù)H7N9亞型禽流感病毒HA基因作為靶標(biāo)區(qū)域設(shè)計(jì)引物，采用FITC和Biotin標(biāo)記上下游引物，通過(guò)RT-HDA技術(shù)擴(kuò)增病毒RNA，輔以膠體金免疫層析試紙檢測(cè)核酸擴(kuò)增產(chǎn)物，建立了檢測(cè)H7N9亞型禽流感病毒的等溫?cái)U(kuò)增方法。該方法病毒最低檢測(cè)限20個(gè)拷貝數(shù)/μl，具有較好的靈敏度、特異性和重復(fù)性，無(wú)需大型PCR儀設(shè)備和凝膠電泳檢測(cè)，便于現(xiàn)場(chǎng)和基層簡(jiǎn)單快速檢測(cè)H7N9亞型禽流感病毒。

3.5? 測(cè)序技術(shù)

3.5.1? 高通量測(cè)序技術(shù)（HTS）? HTS技術(shù)又名下一代測(cè)序，該方法不需要進(jìn)行PCR擴(kuò)增，具有準(zhǔn)確性高、周期短、可同時(shí)對(duì)多個(gè)樣本進(jìn)行檢測(cè)且成本相對(duì)較低等優(yōu)點(diǎn)，使大規(guī)模H7N9流感病毒基因組檢測(cè)變?yōu)楝F(xiàn)實(shí)。趙康辰等[31]（2013）、裴廣倩等[32]（2014）先后以U12引物反轉(zhuǎn)錄cDNA，通用流感病毒全基因擴(kuò)增引物混合物生成雙鏈cDNA制備高通量測(cè)序模板對(duì)H7N9流感病毒樣本進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示不同CT值的樣本用高通道測(cè)序都能檢測(cè)到流感病毒，從模板制備、文庫(kù)構(gòu)建到序列及數(shù)據(jù)分析等在2d內(nèi)可完成。王楷宬等[33]（2016）研究顯示在一次測(cè)序中完成了H7N9禽流感病毒全部8個(gè)基因的序列，能夠滿足對(duì)H7N9亞型流感監(jiān)測(cè)、全基因分析和溯源研究的要求。

3.5.2? 焦磷酸測(cè)序技術(shù)（Pyrosequencing）? 焦磷酸測(cè)序技術(shù)是一種新型的酶聯(lián)級(jí)聯(lián)測(cè)序技術(shù)。以H7N9流感病毒NA焦磷酸測(cè)序檢測(cè)方法，可用于H7N9禽流感病毒的檢測(cè)和鑒定。趙永剛等[34]（2014）建立H7N9流感病毒NA基因分子標(biāo)簽的焦磷酸測(cè)序檢測(cè)方法，對(duì)3株H7N9流感病毒分離株的檢測(cè)，結(jié)果表明3株H7N9流感病毒的NA基因均存在15個(gè)核苷酸缺失的分子標(biāo)簽。

3.6? 芯片技術(shù)

3.6.1? 基因芯片（Gene Chip）? 又稱DNA芯片、生物芯片。王秀榮等[35]（2005）依據(jù)M蛋白進(jìn)行基因型鑒定和HA基因亞型鑒定，用Cy5熒光標(biāo)記在基因芯片平臺(tái)上構(gòu)建檢測(cè)H7亞型禽流感病毒的實(shí)驗(yàn)技術(shù)模型，檢測(cè)H7亞型的cDNA，雜交達(dá)到預(yù)期結(jié)果。韓雪清等[36]（2008）根據(jù)H7亞型的基因序列，設(shè)計(jì)特異性引物和探針，制備了H7亞型禽流感病毒鑒定基因芯片，利用收集自49個(gè)地區(qū)的2653分標(biāo)本進(jìn)行評(píng)價(jià)，顯示該病毒基因芯片具有良好的特異性和敏感性。王慧煜等[37]（2009）對(duì)29份H7亞型陽(yáng)性標(biāo)本進(jìn)行正向雜交基因芯片檢測(cè)，結(jié)果與病毒分離的結(jié)果符合率達(dá)100%?；蛐酒夹g(shù)具有特異性好、檢測(cè)時(shí)間短等優(yōu)點(diǎn)，但因其存在檢測(cè)成本高、硬件要求高，一般的實(shí)驗(yàn)室無(wú)法開(kāi)展等缺點(diǎn)，在禽流感病毒檢測(cè)中的應(yīng)用還遠(yuǎn)低于其他檢測(cè)方法。

3.6.2? 液相芯片（MASA）? 液相芯片，也稱為懸浮陣列、流式熒光技術(shù)。該技術(shù)具有高通量、敏感性高、速度快的特點(diǎn)，已經(jīng)在基因分型、組織分型、感染性疾病的檢測(cè)等方面得到了廣泛應(yīng)用。張曉娜等[38]（2013）針對(duì)H7亞型禽流感保守基因，設(shè)計(jì)特異性引物和探針，將多重不對(duì)稱RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物與偶聯(lián)熒光微球的探針進(jìn)行雜交，建立多重液相芯片檢測(cè)方法，對(duì)50份已知病毒的樣品進(jìn)行液相芯片方法和禽流感檢測(cè)試劑盒雙盲試驗(yàn)，兩者符合率為100%。袁靜等[39]（2015）建立了一種同時(shí)對(duì)H5N1和H7N9亞型流感病毒進(jìn)行快速檢測(cè)的液相芯片新方法，可以對(duì)含有5個(gè)拷貝的樣本進(jìn)行有效的基因分型，同時(shí)檢測(cè)速度快，從樣本RNA的提取到最后結(jié)果的判斷可在8h內(nèi)完成。

3.7? 高分辨率熔解曲線（HRM）? HRM高分辨率熔解曲線是一種基于單核苷酸熔解溫度不同而形成不同形態(tài)熔解曲線的基因分析新技術(shù)。該技術(shù)具有靈敏度高、特異性好、成本低廉、高通量檢測(cè)、閉管操作等優(yōu)點(diǎn)，已廣泛應(yīng)用于突變掃描、單核苷酸多態(tài)性分析、甲基化研究、基因分型、序列匹配等方面。劉志成等[40]（2016）針對(duì)H7N9亞型禽流感病毒HA和NA基因的保守區(qū)域，分別設(shè)計(jì)2對(duì)特異性引物，建立了基于HRM分析H7N9亞型禽流感病毒的檢測(cè)方法。臨床樣本檢測(cè)與某商品化H7N9亞型禽流感病毒熒光定量RT-PCR檢測(cè)試劑盒符合率為100%。表明該方法可用于H7N9亞型禽流感病毒的臨床篩查和監(jiān)測(cè)。

4? 結(jié)語(yǔ)

綜上所述，由于我國(guó)嚴(yán)格的生物安全管理規(guī)定，高致病性的流感病毒和禽流感病毒分離等操作被嚴(yán)格限定在生物安全三級(jí)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行[41]。因此，一般基層常規(guī)實(shí)驗(yàn)室對(duì)疑似標(biāo)本的病原學(xué)鑒定只能進(jìn)行分子生物學(xué)檢測(cè)。分子生物學(xué)技術(shù)具有敏感性高、特異性強(qiáng)、簡(jiǎn)便、快速等優(yōu)點(diǎn)，為H7N9亞型禽流感病毒提供了快速準(zhǔn)確的檢測(cè)，為疫情的有效防控提供了準(zhǔn)確的流行病學(xué)信息，避免了疫情的大規(guī)模蔓延[42]。但分子生物學(xué)技術(shù)也各有優(yōu)缺點(diǎn)和實(shí)用性。相信隨著現(xiàn)代分子生物學(xué)、微生物學(xué)及免疫學(xué)等學(xué)科的發(fā)展，以及同其它學(xué)科間的相互滲透，H7N9亞型禽流感病毒的傳統(tǒng)檢測(cè)技術(shù)將與現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)有機(jī)結(jié)合，取長(zhǎng)補(bǔ)短，推進(jìn)禽流感病毒分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)進(jìn)入新的發(fā)展階段。

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Abstract：The H7N9 subtype avian influenza virus is a new subtype of avian influenza virus that was first discovered in China from people in March 2013.The virus has no obvious pathogenicity in poultry， but it can infect humans and cause a high mortality rate.Therefore， the early rapid detection of the H7N9 virus is critical for the control of the epidemic.This paper reviews the latest research progress of H7N9 virus laboratory， in order to provide reference for researchers and farmers to better study and prevent this disease.

Key Words：Avian Influenza Virus;H7N9;Detection;Research progress□