強(qiáng)直性脊柱炎患者血清DKK-1、VEGF-A、IL-17水平變化及其臨床意義

劉大棟

周口市中心醫(yī)院骨科，河南 周口 466000

強(qiáng)直性脊柱炎(ankylosing spondylitis，AS)是以骶髂關(guān)節(jié)和脊柱附著點(diǎn)炎癥為主要病理改變的疾病[1]。病變特點(diǎn)為四肢大關(guān)節(jié)、椎間盤(pán)纖維環(huán)及其附近結(jié)締組織出現(xiàn)纖維化和骨化，或者出現(xiàn)關(guān)節(jié)強(qiáng)直等，是一種慢性炎性疾病[2]。該病起病比較隱匿，早期可無(wú)任何臨床癥狀，導(dǎo)致病情延誤，容易錯(cuò)過(guò)最佳治療時(shí)機(jī)[3]。Dickkopf-1蛋白(DKK-1)不僅存在于扁骨中，在管狀骨中也有表達(dá)，其含量與骨密度呈負(fù)相關(guān)，血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子-A(VEGF-A)作為促進(jìn)血管生成的物質(zhì)，也參與軟骨生成，白細(xì)胞介素-17則主要與炎癥反應(yīng)相關(guān)[4]。本研究選取我院收治的AS患者(AS組)、健康體檢對(duì)象(健康組)，分析血清DKK-1、VEGF-A、IL-17與AS患者紅細(xì)胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate，ESR)、C-反應(yīng)蛋白(C-reactive protein，CRP)、強(qiáng)直性脊柱炎疾病活動(dòng)指數(shù)(BASDAI)、巴氏強(qiáng)直性脊柱炎功能指數(shù)(BASFI)的關(guān)系。

1 材料和方法

1.1 臨床資料

選取我院2016年2月至2017年9月收治的AS患者40例(AS組)、健康體檢對(duì)象40名(健康組)。AS組：年齡18～65歲，平均(35.5±13.0)歲，男28例、女12例，平均病程(7.8±2.9)年。健康組：年齡18～65歲，平均(37.2±15.1)歲，男25例、女15例。兩組研究對(duì)象的年齡、性別比較，差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)強(qiáng)直性脊柱炎患者的診斷標(biāo)準(zhǔn)參考1997年美國(guó)風(fēng)濕病協(xié)會(huì)制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)；(2)患者年齡范圍18～65歲；(3)入院后經(jīng)X線、CT診斷檢測(cè)及病理學(xué)檢查確診；(4)患者未接受抗腫瘤壞死因子藥物治療；(5)本研究獲得醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。

排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)結(jié)核、腫瘤；(2)血液系統(tǒng)疾病；(3)免疫功能缺陷性疾??；(4)嚴(yán)重的骨質(zhì)疏松；(5)肝腎功能疾??；(6)近3個(gè)月使用糖皮質(zhì)激素、抗骨質(zhì)疏松藥物。

1.2 各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的檢測(cè)方法

檢測(cè)兩組的血清DKK-1、VEGF-A、IL-17、ESR、CRP水平。AS患者和健康體檢對(duì)象均于清晨取靜脈血5 mL，血樣離心后于-80 ℃條件下保存。DKK-1、VEGF-A、IL-17使用ELISA方法統(tǒng)一檢測(cè)，DKK-1 ELISA試劑盒來(lái)自于南京森貝伽生物科技有限公司，VEGF-A ELISA試劑盒則來(lái)自上海江萊生物科技有限公司。IL-17 ELISA試劑盒采購(gòu)自上海樊克生物科技有限公司。DKK-1、VEGF-A、IL-17檢測(cè)步驟相同，首先解凍血清，用ELISA試劑盒里的稀釋液稀釋后，將其分別加入預(yù)包被96孔板內(nèi)(ELISA試劑盒提供)，再分別加入100 μL稀釋后的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品，37 ℃條件下孵育90 min。除去上清液后，清洗3次左右，每孔加入100 μL親和素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物，于37 ℃條件下孵育30 min，再次除去上清液，清洗5次后。每孔均加入100 μL TMB顯色液，在37 ℃避光反應(yīng)30 min后，加入TMB終止液。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中相應(yīng)指標(biāo)的濃度。

ESR采用溫氏法測(cè)定，枸櫞酸鈉(4∶1)抗凝血2 mL，用LENA血沉儀測(cè)定紅細(xì)胞沉降率。CRP通過(guò)膠體金法測(cè)定，即CRP檢測(cè)試劑盒(生產(chǎn)廠家：基蛋生物科技股份有限公司)測(cè)定，取少量血清樣本，通過(guò)產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)操作后，與上海凱創(chuàng)醫(yī)藥生物科技有限公司KD-I型金標(biāo)讀數(shù)儀配套使用進(jìn)行測(cè)定。

1.3 強(qiáng)直性脊柱炎疾病活動(dòng)指數(shù)、巴氏強(qiáng)直性脊柱炎功能指數(shù)

BASDAI：該量表主要是對(duì)患者過(guò)去一周脊柱疼痛、疲勞感、關(guān)節(jié)疼痛感、肌腱附著點(diǎn)局限性壓痛、晨僵5種癥狀的持續(xù)時(shí)間、疼痛程度進(jìn)行評(píng)估，評(píng)分越高表示疾病活動(dòng)程度越強(qiáng)。

BASFI：主要采用視覺(jué)模擬評(píng)分法，對(duì)患者完成日常生活活動(dòng)的情況進(jìn)行自主評(píng)分。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 兩組研究對(duì)象的血清DKK-1、VEGF-A、IL-17水平比較

AS組患者的血清DKK-1、VEGF-A、IL-17水平顯著高于健康組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表1。

組別例數(shù)DKK-1VEGF-AIL-17AS組401663.9±182.0328.1±23.332.8±8.9健康組401310.4±121.7292.4±19.512.6±4.1t值10.212 7.431 13.038 P值0.000 0.000 0.000

2.2 兩組研究對(duì)象的ESR、血清CRP水平比較

AS組患者的ESR、血清CRP水平顯著高于健康組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表2。

組別例數(shù)ESR/(mm/h)CRP/(mg/L)AS組4029.5±7.827.9±14.8健康組4011.0±4.23.8±1.2t值13.208 10.265 P值0.000 0.000

2.3 AS患者血清DKK-1、VEGF-A、IL-17水平與患者疾病活動(dòng)程度的關(guān)系

AS組患者的BASDAI評(píng)估值為(52.91±10.62)分、BASFI評(píng)估值為(55.81±9.70)分。AS患者血清DKK-1、IL-17水平與ESR、血清CRP水平BASDAI評(píng)分、BASFI評(píng)分呈顯著正相關(guān)關(guān)系(P<0.05)；AS患者血清VEGF-A水平與ESR、血清CRP水平BASDAI評(píng)分、BASFI評(píng)分無(wú)顯著的相關(guān)性(P<0.05)，見(jiàn)表3。

表3AS患者血清DKK-1、VEGF-A、IL-17水平與患者疾病活動(dòng)程度的關(guān)系

Table3Relationship between serum DKK-1, VEGF-A and IL-17 levels and disease activity in AS patients

指標(biāo)BASDAIBASFIESRCRPDKK-1 r值0.671 0.704 0.663 0.528 P值0.000 0.000 0.000 0.000VEGF-A r值0.204 0.152 0.091 0.127 P值0.084 0.291 0.421 0.336IL-17 r值0.711 0.615 0.639 0.577 P值0.000 0.000 0.000 0.000

3 討論

強(qiáng)直性脊柱炎屬于風(fēng)濕病的范疇，是一種慢性疾病，也是自身免疫疾病，該病主要以脊柱為病變部位，病變涉及骶髂關(guān)節(jié)，引起脊柱僵硬和纖維化，并引起眼、肺、肌肉和骨骼的病理變化[5]?；颊咴缙诓灰欢〞?huì)有癥狀出現(xiàn)，也有部分病人早期出現(xiàn)乏力、消瘦、長(zhǎng)期或間斷低熱、厭食、輕度貧血等現(xiàn)象[6]。早期病變部位關(guān)節(jié)存在炎性疼痛，伴有關(guān)節(jié)周?chē)∪獐d攣、僵硬，在清晨較為明顯，它也可以表現(xiàn)為夜間疼痛，隨著疾病發(fā)展，關(guān)節(jié)的疼痛減輕，脊柱節(jié)段和關(guān)節(jié)的運(yùn)動(dòng)受到限制和變形，并且后期整個(gè)脊柱和下肢出現(xiàn)僵硬和向前屈曲[7]。AS治療的目的在于控制炎癥，進(jìn)而起到減輕或者緩解癥狀的作用，同時(shí)為了防止畸形，要注意在日常生活中保持正確姿勢(shì)，治療的藥物主要包括非甾體類(lèi)抗炎藥、柳氮磺胺吡啶、甲氨蝶呤、腎上腺皮質(zhì)激素、雷公藤多甙、生物制劑，使用何種藥物主要根據(jù)患者的實(shí)際情況，對(duì)脊柱嚴(yán)重變形的患者，在其情況穩(wěn)定后可采取手術(shù)治療[8]。

經(jīng)典型的Wnt信號(hào)通路是成骨細(xì)胞增殖、分化以及成熟的必需通路，而DKK-1是一種抑制骨形成過(guò)程相關(guān)通路的關(guān)鍵性因子，在抑制Wnt信號(hào)通路中具有重要意義[9]。VEGF-A是一種體內(nèi)含量較多且功能強(qiáng)大的促血管生長(zhǎng)因子，該因子參與軟骨和骨的生成，其水平還與脊柱病變程度存在關(guān)聯(lián)，其含量越高提示脊柱病變?cè)絿?yán)重[10]。IL-17是T細(xì)胞誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)的早期啟動(dòng)因子，主要通過(guò)促進(jìn)釋放前炎性細(xì)胞因子來(lái)激發(fā)炎癥反應(yīng)，IL-17與受體結(jié)合后可通過(guò)MAP激酶途徑和NF-kB途徑發(fā)揮其生物學(xué)作用，加劇體內(nèi)炎癥程度[11]。AS組患者的血清DKK-1、VEGF-A、IL-17水平顯著高于健康組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，該結(jié)果說(shuō)明DKK-1、VEGF-A、IL-17與骨的形成、脊椎病變及炎癥反應(yīng)之間存在密切聯(lián)系，因AS患者的脊柱病變和體內(nèi)炎癥反應(yīng)明顯強(qiáng)于正常人群，因此各指標(biāo)較正常人群高。

機(jī)體受到感染或組織損傷時(shí)血漿中CRP會(huì)急劇上升，進(jìn)而激活補(bǔ)體和加強(qiáng)吞噬細(xì)胞功能，除去體內(nèi)的病原微生物及損傷、壞死及凋亡的細(xì)胞，在機(jī)體的天然免疫過(guò)程中發(fā)揮重要的作用[12]。臨床上常用ESR作為紅細(xì)胞間聚集性的指標(biāo)，可用來(lái)反映身體內(nèi)部的某些疾病，當(dāng)機(jī)體出現(xiàn)炎癥反應(yīng)時(shí)，其含量呈現(xiàn)上升趨勢(shì)[13]。AS組患者的ESR、血清CRP水平顯著高于健康組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，因AS患者體內(nèi)含有較多的炎癥因子，使機(jī)體出現(xiàn)強(qiáng)烈的炎癥反應(yīng)及免疫應(yīng)答，故與炎癥反應(yīng)相關(guān)的ESR、CRP較正常人群高。

AS組患者的BASDAI評(píng)估值為(52.91±10.62)分、BASFI評(píng)估值為(55.81±9.70)分，上述評(píng)估值代表了患者其疾病活動(dòng)程度處于較高的水平；AS患者血清DKK-1、IL-17水平與ESR、血清CRP水平BASDAI評(píng)分、BASFI評(píng)分呈顯著正相關(guān)關(guān)系，提示可通過(guò)血清DKK-1、IL-17水平反映疾病活動(dòng)程度，檢測(cè)上述指標(biāo)有助于判斷治療后的療效；AS患者血清VEGF-A水平與ESR、血清CRP水平BASDAI評(píng)分、BASFI評(píng)分無(wú)顯著的相關(guān)性，可能是因?yàn)閂EGF-A水平的影響因素較多，故未明顯顯示各指標(biāo)之間的相關(guān)性。

綜上所述，AS患者血清DKK-1、VEGF-A、IL-17的水平較健康人群顯著升高，其中血清DKK-1、IL-17水平還能反映患者的疾病活動(dòng)程度，可將其用于患者的臨床病情判斷。