基于無節(jié)幼體干重產(chǎn)出的五種產(chǎn)地豐年蟲卵的孵化質(zhì)量分析

李炳乾，張?jiān)茲?，?禮，鄭秀潔，辛乃宏，楊俊濤，王新磊

(1.中鹽工程技術(shù)研究院有限公司，天津 300450；2.新疆湖鹽工程技術(shù)研究中心，新疆 精河 833300)

豐年蟲卵是指由豐年蟲所產(chǎn)生的休眠卵，其孵化產(chǎn)生的無節(jié)幼體約含蛋白質(zhì)60%、脂肪15%[1]，具有很高的營養(yǎng)價(jià)值，是魚、蝦和蟹等幼體極好的餌料[2-5]?，F(xiàn)有豐年蟲卵的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《SC/T2001-2006》從水分、孵化率和雜質(zhì)三方面闡述了豐年蟲卵的質(zhì)量和檢測方法，并規(guī)定了其質(zhì)量等級。由于目前來自于不同產(chǎn)地的豐年蟲卵眾多，僅使用水分、孵化率和雜質(zhì)來評價(jià)豐年蟲卵的質(zhì)量越來越顯示出其局限性，不能全面客觀地反映豐年蟲卵的質(zhì)量。近幾年，描述豐年蟲卵的質(zhì)量指標(biāo)及檢測方法越來越多，例如孵化效率、孵化速率、出蟲量[6-10]等。國內(nèi)豐年蟲卵交易中，只有極少數(shù)用戶檢測孵化率、孵化效率、孵化速率、水分等指標(biāo)。目前國內(nèi)最普遍的檢測方法為出蟲量[11-16]，即豐年蟲卵在規(guī)定條件下孵化一定時(shí)間(通常為24 h～36 h)后所孵出的無節(jié)幼體經(jīng)分離脫水后的濕重來評價(jià)蟲卵質(zhì)量，但濕重法受幼體中水分含量的影響比較大，不能真實(shí)反映豐年蟲卵的營養(yǎng)價(jià)值。豐年蟲無節(jié)幼體的營養(yǎng)價(jià)值取決于豐年蟲卵的孵化條件和孵化時(shí)間，剛孵化出的無節(jié)幼體營養(yǎng)價(jià)值最高，孵化后的幼體在水中游動的時(shí)間越長，消耗的自身營養(yǎng)越多，雖然個(gè)體逐漸變大，但其相對干重越小，營養(yǎng)價(jià)值越低?？刂曝S年蟲卵的孵化條件和幼體收獲時(shí)間能夠獲得最有營養(yǎng)價(jià)值的無節(jié)幼體，可以更有效地使用豐年蟲卵，降低育苗成本，提高水產(chǎn)幼苗的成活率。

實(shí)驗(yàn)選取具有代表性的五個(gè)產(chǎn)地的豐年蟲卵進(jìn)行質(zhì)量評價(jià)研究，以豐年蟲卵孵化出無節(jié)幼體的干物質(zhì)量來評價(jià)豐年蟲卵孵化質(zhì)量，即在特定的時(shí)間內(nèi)，一定重量的豐年蟲卵能孵化出無節(jié)幼體的干重，以期獲得最有營養(yǎng)價(jià)值的豐年蟲無節(jié)幼體。

1 材料與方法

1.1 材料

實(shí)驗(yàn)選擇五個(gè)產(chǎn)地的豐年蟲卵作為研究對象，分別是：渤海灣(水分含量14.12%，2016年)、新疆巴里坤(水分含量12.8%，2016年)、新疆艾比湖(水分11.53%，2016年)、西藏雙湖(水分含量13.28%，2015年)、俄羅斯庫倫達(dá)湖(水分含量12.98%，2015年)。

1.2 方法

實(shí)驗(yàn)將五種產(chǎn)地的豐年蟲卵分別孵化18 h、24 h、36 h、48 h，檢測其孵化率、出蟲量、無節(jié)幼體水分、無節(jié)幼體體長。

(1)孵化率檢測。將2 g豐年蟲卵放入1 L的透明孵化管中孵化，孵化管安放在恒溫水浴箱內(nèi)，孵化管周圍采用日光燈連續(xù)光照，光照強(qiáng)度在2 000 lx以上，孵化管底部連續(xù)充氣，保持豐年蟲卵在孵化液中均勻分布，孵化一定時(shí)間后，從每個(gè)孵化管中取樣放入樣品盤中，總?cè)芋w積大于1 000 μL，加入1滴～2滴魯哥氏碘液，將無節(jié)幼體固定并染色。在解剖顯微鏡下計(jì)數(shù)每一樣品盤中無節(jié)幼體的數(shù)量(N)及傘狀幼體的數(shù)量(U)；在每個(gè)樣品盤中加入一定量的次氯酸鈉溶液，待空殼溶解后，在解剖顯微鏡下記錄未孵化的胚胎數(shù)(C)。孵化百分率(H)計(jì)算如下：

(2)出蟲量檢測。用40 L自制圓柱圓錐孵化桶(亞克力透明材料)，放入100 g豐年蟲卵孵化，孵化結(jié)束后，用0.1 mm篩絹收集底部的無節(jié)幼體，清洗、濾干、稱重。參照5個(gè)鹽湖豐年蟲卵最優(yōu)孵化條件的研究[12-14]，實(shí)驗(yàn)孵化條件見表1。

表1 五種產(chǎn)地豐年蟲卵的孵化條件Tab.1 The hatching conditions of Artemia cysts from five origins

注：孵化劑為過氧化鈣，試驗(yàn)選用的其中三個(gè)產(chǎn)地的豐年蟲卵需要加入孵化劑時(shí)孵化率最優(yōu)

(3)無節(jié)幼體干物質(zhì)量檢測方法。無節(jié)幼體干物質(zhì)量是在出蟲量檢測的基礎(chǔ)上利用水分分析儀或烘箱來檢測無節(jié)幼體的水分含量，然后換算其干物質(zhì)量。

(4)無節(jié)幼體水分檢測。取5 g～6 g無節(jié)幼體用奧豪斯水分分析儀(MB-25)檢測(溫度參數(shù)130 ℃；時(shí)間參數(shù)：AUTO)。

(5)無節(jié)幼體體長檢測方法。利用計(jì)算機(jī)西格圖像采集系統(tǒng)測量。

2 結(jié)果與分析

2.1 渤海灣豐年蟲卵孵化不同時(shí)間的指標(biāo)

渤海灣豐年蟲卵孵化特征見表2。從表2可見，渤海灣豐年蟲卵在24 h內(nèi)孵化率已基本到達(dá)最高值，且在48 h內(nèi)穩(wěn)定。出蟲量、無節(jié)幼體體長和無節(jié)幼體水分隨著孵化時(shí)間的延長逐漸增加。24 h無節(jié)幼體體長達(dá)到622.1 μm，48 h達(dá)885.3 μm。

表2 100 g渤海灣豐年蟲卵孵化特征Tab.2 The hatching characteristics of 100 g Artemia cysts from Bohai bay

2.2 新疆巴里坤豐年蟲卵孵化不同時(shí)間的指標(biāo)

從表3可見新疆巴里坤豐年蟲卵在24 h內(nèi)孵化率就穩(wěn)定在高值。出蟲量、無節(jié)幼體體長和無節(jié)幼體水分隨著孵化時(shí)間的延長逐漸增加。24 h無節(jié)幼體體長為604.5 μm，48 h達(dá)818.8 μm。

表3 100 g新疆巴里坤豐年蟲卵孵化特征Tab.3 The hatching characteristics of 100 g Artemia cysts from Balikun lake of Xinjiang

2.3 新疆艾比湖豐年蟲卵孵化不同時(shí)間的指標(biāo)

從表4可見新疆艾比湖豐年蟲卵在24 h內(nèi)孵化率就穩(wěn)定在高值。出蟲量、無節(jié)幼體體長和無節(jié)幼體水分隨著孵化時(shí)間的延長逐漸增加。24 h無節(jié)幼體體長為555.2 μm，48 h達(dá)929.1 μm。

表4 100 g新疆艾比湖豐年蟲卵孵化特征Tab.4 The hatching characteristics of 100 g Artemia cysts from Aibi lake of Xinjiang

2.4 西藏雙湖豐年蟲卵孵化不同時(shí)間的指標(biāo)

從表5可見西藏雙湖豐年蟲卵在24 h內(nèi)孵化率就穩(wěn)定在高值。出蟲量、無節(jié)幼體體長和無節(jié)幼體水分隨著孵化時(shí)間的延長逐漸增加。24 h無節(jié)幼體體長為585.3 μm，48 h達(dá)807.1 μm。

表5 100 g西藏雙湖豐年蟲卵孵化特征Tab.5 The hatching characteristics of 100 g Artemia cysts from Shuang lake of Tibet

2.5 俄羅斯庫倫達(dá)湖豐年蟲卵孵化不同時(shí)間的指標(biāo)

從表6可見俄羅斯庫倫達(dá)湖豐年蟲卵在24 h內(nèi)孵化率就穩(wěn)定在高值。出蟲量、無節(jié)幼體體長和無節(jié)幼體水分隨著孵化時(shí)間的延長逐漸增加。24 h無節(jié)幼體體長為568.8 μm，48 h達(dá)871.2 μm。

表6 100 g俄羅斯庫倫達(dá)湖豐年蟲卵孵化特征Tab.6 The hatching characteristics of 100 g Artemia cysts from Kulunda lake of Russia

2.6 五種產(chǎn)地的豐年蟲卵在孵化不同時(shí)間所得無節(jié)幼體的干重情況

從表7可見渤海灣、新疆艾比湖、西藏雙湖、俄羅斯庫倫達(dá)湖豐年蟲卵在孵化24 h得到的無節(jié)幼體干重最多，隨著孵化時(shí)間延長到36 h，干重?fù)p失分別為7.3%、10%、13.5%、24.8%。孵化時(shí)間延長到48 h，干重?fù)p失分別為23.9%、20.7%、25.1%、27.8%。

新疆巴里坤豐年蟲卵在孵化18 h得到無節(jié)幼體干重最多，隨著孵化時(shí)間延長到24 h，干重?fù)p失為11.6%；孵化時(shí)間延長到36 h，干重?fù)p失為15.4%；孵化時(shí)間延長到48 h，干重?fù)p失為24.1%。

表7 100 g豐年蟲卵孵化不同時(shí)間所得無節(jié)幼體的干重Tab.7 The dry weight (g) of nauplii at different hatching time of 100 g Artemia cysts

注：以上結(jié)果為實(shí)驗(yàn)用樣品所得，僅用于反映干重趨勢

3 討論

3.1 五種產(chǎn)地豐年蟲卵孵化得到無節(jié)幼體的情況

近年來，國內(nèi)豐年蟲卵的質(zhì)量是以出蟲量(無節(jié)幼體濕重)來評價(jià)，大部分用戶以孵化24 h作為標(biāo)準(zhǔn)，也有的用戶以36 h或48 h作為標(biāo)準(zhǔn)。用出蟲量作為判斷標(biāo)準(zhǔn)有一定的弊端，例如：過濾脫水標(biāo)準(zhǔn)無法統(tǒng)一，無節(jié)幼體瀝水會因網(wǎng)兜孔徑、操作手法等差異而無法達(dá)成一致；同時(shí)該方法也不能確定不同品系的豐年蟲卵的真實(shí)營養(yǎng)成分含量等。從實(shí)驗(yàn)的五個(gè)產(chǎn)地豐年蟲卵的結(jié)果來看，孵化時(shí)間不同，孵化率、出蟲量、無節(jié)幼體水分、無節(jié)幼體體長和干物質(zhì)重均有較大差異。

從表2～表6的數(shù)據(jù)可以得到，五種產(chǎn)地的豐年蟲卵孵化率在24 h內(nèi)基本可以達(dá)到最高值。24 h無節(jié)幼體體長均不相同，在555.2 μm～622.1 μm(有的品系豐年蟲卵孵化24 h后可達(dá)690 μm)，無節(jié)幼體體長隨著時(shí)間的延長逐漸增加，同時(shí)無節(jié)幼體體內(nèi)水分含量也逐漸增加，從而導(dǎo)致出蟲量在48 h內(nèi)隨著時(shí)間的延長逐漸增加，因此用出蟲量作為豐年蟲卵質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)時(shí)應(yīng)重點(diǎn)考慮孵化時(shí)間的問題。

豐年蟲無節(jié)幼體從大小、形態(tài)上還分為“Ⅰ期幼體”和“Ⅱ期幼體”。通常情況下，經(jīng)過孵化的無節(jié)幼體從卵殼中出來，此時(shí)還沒有形成口、腸道以及肛門，這個(gè)階段的幼體被稱為“Ⅰ期幼體”。一段時(shí)間后，幼體發(fā)育形成口、腸道、肛門，體長也明顯增加(大部分在700 μm以上)，這時(shí)被稱作“Ⅱ期幼體”。由于運(yùn)動耗能“Ⅱ期幼體”較“Ⅰ期幼體”體內(nèi)的營養(yǎng)成分大幅度降低。生產(chǎn)上，應(yīng)該用營養(yǎng)豐富的“Ⅰ期幼體”，但在實(shí)際情況下，大多數(shù)技術(shù)人員不具備從形態(tài)上鑒定“Ⅰ期幼體”和“Ⅱ期幼體”的能力，只能從時(shí)間上大致判斷，因此，用“Ⅰ期幼體”和“Ⅱ期幼體”來判斷豐年無節(jié)幼體的營養(yǎng)情況，操作性不高。

無節(jié)幼體干重即無節(jié)幼體的營養(yǎng)物質(zhì)重量。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，在實(shí)驗(yàn)的五種豐年蟲卵中，僅新疆巴里坤豐年蟲卵的最高干重在18 h出現(xiàn)，但其孵化率并未到達(dá)最高值，孵化24 h時(shí)，孵化率雖然達(dá)到最高值，但干物質(zhì)重量反而降低，說明最佳的孵化時(shí)間在18 h～24 h。其他四種產(chǎn)地的豐年蟲卵孵化24 h所得無節(jié)幼體的干重最多，且孵化率均在最高值附近。實(shí)驗(yàn)用五種產(chǎn)地的豐年蟲卵在24 h后隨著時(shí)間延長，所得的無節(jié)幼體干重均越來越少。雖然有部分品系蟲卵的最佳孵化時(shí)間大于或小于24 h，但均在24 h附近得到最佳結(jié)果。在實(shí)際應(yīng)用中24 h作為一個(gè)時(shí)間周期，可操作性強(qiáng)。因此，用24 h作為孵化時(shí)間是比較理想的。

用無節(jié)幼體的干物質(zhì)量來評價(jià)豐年蟲卵質(zhì)量是比較準(zhǔn)確的標(biāo)準(zhǔn)，該指標(biāo)可以規(guī)避瀝水程度、孵化率、雜質(zhì)、水分、孵化速率等指標(biāo)的影響。

3.2 判斷豐年蟲卵質(zhì)量的其他指標(biāo)

除從豐年蟲卵本身的特征和孵化的無節(jié)幼體作為判斷標(biāo)準(zhǔn)外，豐年蟲卵還因品系不同具有自己獨(dú)特的特性，從而決定其質(zhì)量的優(yōu)劣。如是否需要加入孵化劑、是否耐高溫、孵化后分離效果、無節(jié)幼體活力、克卵數(shù)等。

正是由于豐年蟲卵還具有上述的特殊特征，因此在市場上還存在一部分品系的蟲卵，其價(jià)格不能用普通豐年蟲卵的標(biāo)準(zhǔn)來判斷。例如：渤海灣周邊的鹽田豐年蟲卵(孵化時(shí)不需要添加孵化劑、耐高溫、孵化后無節(jié)幼體活力好)、西藏雙湖豐年蟲卵(孵化時(shí)不需要添加孵化劑、分離好、營養(yǎng)豐富)等因其自身特有的優(yōu)勢，其價(jià)格與大部分鹽湖蟲卵的標(biāo)準(zhǔn)有所差異，有時(shí)差異還較大。

豐年蟲卵因其特殊性，判斷其質(zhì)量的指標(biāo)較多，且不同用戶關(guān)注的指標(biāo)也不盡相同，因此，制定豐年蟲卵完美的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)困難較大。實(shí)驗(yàn)主張以無節(jié)幼體的干物質(zhì)量作為評價(jià)豐年蟲卵質(zhì)量的基礎(chǔ)指標(biāo)，再配合其他指標(biāo)來微調(diào)其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

4 結(jié)論

豐年蟲卵孵化出的無節(jié)幼體干物質(zhì)重量直接關(guān)系到豐年蟲卵在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用價(jià)值，單位重量豐年蟲卵孵出的無節(jié)幼體干物質(zhì)重量與豐年蟲卵的品系、孵化率、水分、孵化時(shí)間等密切相關(guān)。不同品系的豐年蟲卵通過控制孵化條件可以獲得最優(yōu)營養(yǎng)價(jià)值的無節(jié)幼體。豐年蟲卵孵化出無節(jié)幼體的干物質(zhì)量作為豐年蟲卵質(zhì)量的評價(jià)指標(biāo)，具有全面性和科學(xué)性。