多巴絲肼片聯(lián)合銀杏葉提取物對(duì)老年帕金森病病人黑質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞因子、血管活性物質(zhì)及抗氧化物的影響

徐浩剛 陳正平 夏秋鈺 桑穆惠

帕金森?。≒arkinson's disease，PD）是由于錐體外系功能紊亂而引起的一種慢性中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾?。?］，主要發(fā)病機(jī)制為中腦黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元凋亡導(dǎo)致多巴胺（DA）合成減少，乙酰膽堿（Ach）相對(duì)亢進(jìn)，導(dǎo)致DA-Ach功能失衡［2］，其主要表現(xiàn)為震顫、肌強(qiáng)直、步態(tài)異常及運(yùn)動(dòng)遲緩等運(yùn)動(dòng)癥狀。除了運(yùn)動(dòng)功能障礙以外，大多數(shù)PD病人還容易患有抑郁、情感淡漠、焦慮、認(rèn)知功能障礙等非運(yùn)動(dòng)癥狀［3］。PD屬于老年人常見(jiàn)的神經(jīng)內(nèi)科疾病，隨著老齡化程度的加深，PD發(fā)病率也在不斷上升［4-5］。多巴絲肼是左旋多巴和芐絲肼組成的復(fù)方制劑，是治療PD的基礎(chǔ)藥物之一，其中芐絲肼能夠抑制腦外組織中左旋多巴減少，降低其不良反應(yīng)。銀杏葉提取物（ginko biloba extract，GBE）是從銀杏的干燥葉中提取的具有多種有效藥用成分的混合物，其最主要的活性成分為銀杏黃酮和銀杏內(nèi)脂類化合物，具有抗炎、抗氧化、擴(kuò)張血管、抑制血小板集聚、保護(hù)腦缺血／再灌注后腦組織及神經(jīng)系統(tǒng)等作用［6-7］。本研究旨在觀察GBE對(duì)PD病人黑質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞因子、血管活性物質(zhì)及抗氧化物的影響，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集我院神經(jīng)內(nèi)科門診就診的老年P(guān)D病人60例為研究對(duì)象，其中男35例，女25例，年齡66～82歲，平均（67.12±10.41）歲；病程 1～12年，平均（5.40±2.73）年。根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法將60例病人分為2組，每組各30例。其中觀察組男17例，女13例，年齡67～82歲，平均（67.06±9.17）歲，病程 1～11年，平均（5.23±2.67）年；對(duì)照組男 18 例，女 12 例，年齡66～81歲，平均（67.19±11.68）歲，病程 2～12年，平均（5.57±2.82）年。2組病人在性別、年齡、病程等方面差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，且所有病人均自愿簽署知情同意書(shū)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）所有病人均符合 PD診斷標(biāo)準(zhǔn)［8］，Hoehn and Yahr分級(jí)Ⅱ～ Ⅲ級(jí)；（2）病人意識(shí)清楚，能夠配合研究措施。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）腦血管疾病、腦炎及外傷等原因引起PD綜合征的病人；（2）肝腎功能不全及心血管疾病的病人；（3）高血壓及糖尿病病人；（4）伴有認(rèn)知功能嚴(yán)重障礙影響研究進(jìn)行的病人。

1.2 治療方法 2組病人均給予物理和功能鍛煉等基礎(chǔ)治療。對(duì)照組給予多巴絲肼片（上海羅氏制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字 H10930198），62.5 mg／次，1 次／d，口服5 d后改為125 mg／次，2次／d，口服 5 d后改為166.67 mg／次，3次／d；觀察組在對(duì)照組的基礎(chǔ)上給予GBE（注冊(cè)證號(hào)： H20090296），3 次／d，一次 2 片，口服。2組治療均持續(xù)4周。

1.3 檢測(cè)方法 所有病人于治療前后清晨空腹抽取靜脈血15 mL，置于抗凝管中備用。采用雙抗體夾心法檢測(cè)病人黑質(zhì)二價(jià)金屬離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（DMT1）及葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白 75（grp75）水平，試劑盒購(gòu)于上海寶曼生物科技有限公司；采用硝酸還原法檢測(cè)一氧化氮（NO）含量；采用放免法檢測(cè)內(nèi)皮素（ET）含量；采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過(guò)氧化酶（GSH-Px）及丙二醛（MDA）水平，相關(guān)試劑盒購(gòu)于南京建成生物工程研究所。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 13.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ˉx±s）表示，2組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組黑質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞因子水平比較 治療前，2組黑質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞因子水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；治療后，2組DMT1水平顯著降低，grp75水平顯著升高，且觀察組DMT1水平明顯低于對(duì)照組，grp75水平明顯高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 見(jiàn)表 1。

表1 2組黑質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞因子水平比較（ˉx±s，μmol／L，n=30）

2.2 2組血管活性物質(zhì)水平比較 治療前，2組血管活性物質(zhì)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；治療后，2組NO水平顯著升高，ET水平顯著下降，且觀察組NO水平明顯高于對(duì)照組，ET水平明顯低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 2組血管活性物質(zhì)水平比較（ˉx±s，n=30）

2.3 2組抗氧化物水平比較 治療前，2組抗氧化物水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；治療后，2組SOD、GSH-Px水平顯著升高，MDA水平則顯著降低，且觀察組SOD和GSH-Px水平明顯高于對(duì)照組，MDA水平明顯低于對(duì)照組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表3。

表3 2組抗氧化物水平比較（ˉx±s，n=30）

3 討論

目前我國(guó)有超過(guò)500萬(wàn)的PD病人，55歲以上人群PD患病率約為1%［9］，65歲以上老年人群PD患病率約為1.7%，且男性高于女性［10-11］，可以發(fā)現(xiàn)，隨著人口老齡化程度的加深，老年P(guān)D綜合征病人的患病率也在逐年升高。PD臨床主要特征為運(yùn)動(dòng)障礙，包括進(jìn)行性運(yùn)動(dòng)遲緩、肌強(qiáng)直、靜止性震顫和姿勢(shì)步態(tài)異常等，此外還可伴有大量非運(yùn)動(dòng)癥狀（NMS），如嗅覺(jué)減退、便秘、抑郁、睡眠障礙等［5］。

PD最主要的病理改變是中腦黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元的變質(zhì)死亡，而中腦黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元的變性死亡與過(guò)渡金屬鐵的關(guān)系密切［12］。PD病人腦內(nèi)鐵含量升高的主要部位一般是黑質(zhì)和蒼白球，其顯著升高的程度與PD的嚴(yán)重程度相關(guān)，且鐵代謝有賴于各種相關(guān)蛋白的調(diào)節(jié)，如DMT1。有研究認(rèn)為DMT1在PD病人黑質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞中重度高表達(dá)，且與鐵升高部位一致，認(rèn)為DMT1水平升高可能是腦內(nèi)鐵離子紊亂的原因之一。grp75作為一種主要存在于細(xì)胞線粒體中的熱休克蛋白，行使分子伴侶功能。研究認(rèn)為grp75與PD密切相關(guān)，其在PD病人黑質(zhì)線粒體中的表達(dá)顯著降低，且grp75的基因突變也會(huì)顯著影響到線粒體功能［13］。本研究結(jié)果顯示，與治療前相比，治療后，2組DMT1水平顯著下降（P＜0.05），grp75水平顯著上升（P＜0.05），且觀察組黑質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)作用優(yōu)于對(duì)照組。表明GBE能通過(guò)減少DMT1水平使腦內(nèi)鐵含量下降，對(duì) PD有較好的治療作用，與衛(wèi)飛等［13］研究一致。

NO和ET均為血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的血管活性物質(zhì)，主要作用于血管平滑肌以調(diào)節(jié)血管舒張或收縮，其中NO起到強(qiáng)烈舒張血管作用，能夠有效抑制血小板集聚和血栓形成，ET起到強(qiáng)烈收縮血管作用，能夠促進(jìn)血栓形成。本研究結(jié)果顯示，與治療前相比，治療后，2組病人血清中NO含量顯著增加（P＜0.05），ET含量顯著降低（P＜0.05），且觀察組血管活性物質(zhì)改善程度均優(yōu)于對(duì)照組，說(shuō)明GBE能夠作用于血管床，產(chǎn)生擴(kuò)血管作用，與周莉等［14］研究一致。

GBE化學(xué)成分種類較多，其中黃酮類化合物是GBE中主要的藥理活性成分，主要作用機(jī)制如下：黃酮類分子中多含有羥基團(tuán)（-OH），能夠直接清除H2O2、O-等氧自由基，并捕捉其他代謝過(guò)程中產(chǎn)生的自由基，同時(shí)通過(guò)提供氫離子終止自由基連鎖反應(yīng)，阻止和抑制氧自由基反應(yīng)及脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，抑制MDA，并參與調(diào)節(jié)SOD、GSH-Px等酶活性，降低氧自由基和脂質(zhì)過(guò)氧化損傷。SOD活性能夠反映機(jī)體清除自由基的能力，GSH-Px則能夠清除 H2O2和MDA［14］。本研究結(jié)果顯示，與治療前相比，治療后，2組SOD、GSH-Px水平顯著升高，MDA水平顯著降低，且觀察組病人SOD、GSH-Px水平顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），MDA 水平顯著低于對(duì)照組（P＜0.05），說(shuō)明SOD、GSH-Px水平的升高會(huì)進(jìn)一步抑制機(jī)體內(nèi)MDA的水平，GBE能夠降低氧自由基和脂質(zhì)過(guò)氧化損傷，與周莉等［14］研究一致。

綜上所述，GBE能顯著降低老年P(guān)D病人黑質(zhì)DMT1水平，升高grp75水平，改善血管收縮舒張功能以及機(jī)體氧化應(yīng)激水平。