種公豬精液偽狂犬病野毒的篩查

陳鵬強 福建南星動物保健品有限公司 福建南平 353000

偽狂犬?。≒seudorabies）是由偽狂犬病病毒引起家畜和野生動物共患的一種急性傳染病，可感染豬的神經系統、繁殖系統及呼吸系統，導致妊娠母豬流產或死胎、公豬不育、新生仔豬大量死亡、育肥豬呼吸困難、生長停滯等[1]。

2013年以來，該病開始了新一輪的流行暴發(fā)，且傳播速度快、發(fā)病急。臨床一般先發(fā)生在后期育肥豬，出現類似流感癥狀，按照流感方案治療無效，反復出現呼吸道癥狀，后續(xù)在母豬和哺乳仔豬中傳播[2-3]。其中母豬出現高燒、流產、木乃伊胎增多、返情率升高；哺乳仔豬出現急性死亡、神經癥狀[4]。

種公豬若攜帶偽狂犬病病毒，可通過精液迅速在豬群中傳播。因此，進行種公豬精液的篩查是對疫病凈化的先決條件。農業(yè)部規(guī)定偽狂犬病病毒的篩查及檢測標準是通過檢測血清PRV-gE抗體，若種豬檢測為陽性應嚴格淘汰，但機體需要一定的時間來對感染形成免疫反應（需要10～15 d），因此，在感染前期是無法通過抗體檢測進行診斷[5-6]，需要再結合精液PCR檢測。本文通過將ELSIA檢測與PCR診斷相結合，優(yōu)勢互補，精確實現種公豬偽狂犬病的帶毒篩查。

1 材料與方法

1.1 樣品來源 前腔靜脈采集公豬血液，精液收集至輸精瓶。

1.2 試劑與儀器 偽狂犬病gE抗體檢測試劑盒（PRV-gE-Ab），購自愛德士；偽狂犬病病毒熒光定性PCR檢測試劑，購自POCKIT；美國寶特酶標儀，POCKIT便攜式熒光定性PCR儀。

1.3 試驗方法 公豬血液偽狂犬病gE抗體檢測按照愛德士操作說明進行，樣本S/N值≥0.7判定為陰性，樣本S/N值＜0.6判定為陽性；精液偽狂犬病病毒檢測按照POCKIT檢測說明書操作，樣本A520/B520值≥1.4判定為陽性，樣本A520/B520值＜1.2判定為陰性。

表1 公豬血清抗體檢測及精液病原檢測結果

2 結果與分析

本試驗采集全場公豬14頭，其中杜洛克公豬12 頭（D1～D12）、長白公豬 2 頭（L13～L14）的血液及精液，進行血清抗體檢測和偽狂犬病病原學診斷。該規(guī)模場在2018年10～11月返情率達到25%以上，經系列排查，由于使用偽狂犬病帶毒公豬的精液配種，導致母豬群返情率升高。

通過公豬血清抗體、精液病原檢測結果顯示：（1）D10、L13雖然偽狂犬病gE抗體為陰性，但是病原學檢測其精液為陽性，說明這2頭公豬目前正處于感染的前期且正在排毒，公豬的精液不能作配種使用；（2）公豬 D2、D3、D7、D8、D9 偽狂犬病 gE 抗體為陽性，且精液病原學檢測偽狂犬病病毒為陽性，說明這5頭公豬歷史上曾感染過偽狂犬病野毒且正在排毒；（3）公豬 D1、D5、D6、D12、L14 偽狂犬病 gE 抗體及精液病原學檢測均為陰性，說明使用其精液不存在感染風險；（4）公豬D4、D11雖然偽狂犬病gE抗體為陽性，但精液病原學檢測偽狂犬病病毒為陰性，說明其歷史上曾感染過偽狂犬病病毒但目前沒有排毒，該精液暫時可以使用但有風險，應定期進行精液病原學檢測。

由于該場歷史上為偽狂犬病陽性場，新引進的部分后備公豬也隨之轉陽，結合本次系統檢測結果，建議全場公豬一年免疫4次偽狂犬病弱毒疫苗，同時結合滅活疫苗免疫；公豬精液偽狂犬病病毒檢測陽性的公豬暫不作生產使用 （原則上建議偽狂犬病陽性豬應淘汰），另外購偽狂犬病雙陰精液（血清gE抗體及精液病原）補充本場使用。半個月后返情率下降至15%以下。

3 討 論

偽狂犬病病毒為DNA病毒，基因組相對保守，變異率低[7]。目前國內流行的新毒株與2011年前分離的老毒株之間，序列差異并不大，個別存在的基因標記與毒力間的關系尚未得到驗證[8]。

ELISA法是目前最為實用的血清學檢測方法，能夠快速鑒定出感染過偽狂犬病病毒的種公豬，但機體需要一定的時間來對感染形成免疫反應，因此，血清學檢測在感染早期發(fā)揮的作用十分有限[9]。PCR診斷檢測能夠直接檢測出偽狂犬病病毒，因此，可以在感染初期，還未產生抗體時檢測到感染[10]。在實際應用中，關鍵在于了解每一種方法各自的優(yōu)勢和劣勢，在不同情況下選擇最適合的技術。通常，2種檢測方法結合應用是最為準確而且經濟的方案，保護和提升畜群的健康水平。

本文通過熒光定性PCR方法檢測公豬精液的偽狂犬病排毒情況，優(yōu)勢互補了血清學檢測的遺漏，實現精確高效的公豬精液篩查，快速有效地減少疫病傳播風險，提高生產成績。