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    BenchMark Special Stains全自動(dòng)染色機(jī)與手工方法在腎臟PAS染色中的比較

    2019-08-01 02:50:46楊眉雷松陳昱羅添友
    醫(yī)藥前沿 2019年17期
    關(guān)鍵詞:染色機(jī)封蓋染液

    楊眉 雷松 陳昱 羅添友

    (四川大學(xué)華西醫(yī)院病理科 四川 成都 610041)

    過(guò)碘酸雪夫染色(PAS染色)是腎穿刺活檢病理常用的組織化學(xué)染色之一,主要用于顯示腎小球系膜區(qū)范圍和基底膜的厚度,也可顯示腎小球內(nèi)某些滲出性蛋白、節(jié)段性硬化和結(jié)節(jié)性病灶[1-2]。手工染色易受人為環(huán)境因素影響,質(zhì)量不易控制。我科引進(jìn)全自動(dòng)特殊染色機(jī)一年多來(lái),已做腎臟PAS染色1400余例取得良好效果,現(xiàn)介紹如下。

    1.材料與方法

    1.1 石蠟組織標(biāo)本

    隨機(jī)選取四川大學(xué)華西醫(yī)院病理科2018年6月腎臟穿刺標(biāo)本30例,其中本院15例、外院標(biāo)本15例。

    1.2 儀器與試劑

    BenchMark Special Stains全自動(dòng)特殊染色機(jī),PAS Stain Kit染液套裝(包括PAS PERIOD.ACID,PAS HEMATOXYLIN,PAS NEUTRALIZER,PAS SCHIFFS)、脫蠟液、清洗液、液體封蓋油膜。手工染色試劑均由科室自行配置。

    1.3 樣本制備

    腎臟穿刺組織石蠟切片2μm,65℃烤箱烤片15~20min。

    1.4 實(shí)驗(yàn)方法:

    1.4.1 BenchMark Special Stains全自動(dòng)特殊染色機(jī)染色步驟如下:65℃烤片4min,75℃烤片4min;76℃加1000μL脫蠟液和液體封蓋油膜脫蠟×4次,6min;37℃加清洗液清洗×2次;37℃加液體封蓋油膜和2000μL PAS PERIOD.ACID染色4min;45℃加清洗液和液體封蓋油膜清洗×2次;45℃加液體封蓋油膜和2000μLPAS SCHIFFS染色,20min;45℃加清洗液和液體封蓋油膜清洗×2次,9min;45℃加液體封蓋油膜和2000μLPAS HEMATOXYLIN染色,8min;沖洗;手工脫水透明,儀器染色時(shí)長(zhǎng)80min。

    1.4.2 手工PAS染色方法,切片脫蠟至水,蒸餾水洗3次,入1%過(guò)碘酸液10min,蒸餾水洗3次,入Schiff試劑40~60min,熱水返紅5min,自來(lái)水洗,入蘇木素染液3min,自來(lái)水洗,入1%鹽酸酒精分化數(shù)秒,自來(lái)水沖洗3min,染色時(shí)長(zhǎng)100~120min,脫水透明封片。

    2.結(jié)果

    細(xì)胞核呈藍(lán)色,腎小球系膜、基底膜以及腎小管呈紫紅色。手工染色時(shí)在染色時(shí)間不延長(zhǎng)的情況下標(biāo)本著色鮮艷程度隨著染色次數(shù)的增加而降低,尤其外院標(biāo)本(兒童標(biāo)本)明顯。機(jī)器染色結(jié)果穩(wěn)定(圖1~4)。

    圖1,2本院標(biāo)本同一組織視野(PAS×400)圖1手工PAS染色結(jié)果,圖2機(jī)染PAS染色結(jié)果,腎小球和腎小管基底膜結(jié)構(gòu)清晰,中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)較圖1更明顯。圖1、圖2分別為手工和機(jī)器試劑的第一批次染色。圖3,4 均為外院標(biāo)本同一組織視野(PAS×400)圖3手工PAS染色結(jié)果,為手工染色試劑的第一批次染色。圖4機(jī)器染色結(jié)果,為機(jī)器套裝試劑的第一批次染色。

    3.討論

    手工PAS染色存在的主要問(wèn)題:(1)我科腎臟穿刺標(biāo)本包括本院腎內(nèi)科及外院標(biāo)本。由于標(biāo)本類型、前期處理等存在差異因素,手工染色時(shí)不同來(lái)源的標(biāo)本染色時(shí)間不同,非本院腎內(nèi)科標(biāo)本均需要延長(zhǎng)Schiff試劑染色時(shí)間。(2)Schiff液配制繁瑣、失效較快、保存條件較嚴(yán)格[3]。(3)染液是重復(fù)使用,染色時(shí)間需要逐步延長(zhǎng)。(4)很多實(shí)驗(yàn)室自行配制的蘇木素沒(méi)有純化,試劑里面有很多雜質(zhì)及蘇木精淀,且蘇木素在使用過(guò)程中與空氣接觸會(huì)繼續(xù)氧化,產(chǎn)生氧化膜,需要定期過(guò)濾蘇木素,避免染色效果差。

    BenchMark Special Stains全自動(dòng)特殊染色機(jī)具有更多優(yōu)勢(shì):(1)全程標(biāo)準(zhǔn)化。染色機(jī)有20個(gè)可獨(dú)立控溫、運(yùn)行的玻片位,切片后可直接獨(dú)立進(jìn)行烘烤、脫蠟和組織化學(xué)染色等工作。(2)操作簡(jiǎn)單,染色自動(dòng)化。機(jī)器根據(jù)標(biāo)簽信息自動(dòng)匹配完成染色全過(guò)程。(3)染色時(shí)間較手工染色時(shí)間短。染色機(jī)可針對(duì)不同來(lái)源的標(biāo)本個(gè)性化設(shè)置不同的染色程序,通過(guò)改變溫度等方式在相同時(shí)間里完成染色且著色鮮艷,對(duì)比度明顯。(4)商品化試劑盒,放4℃冰箱保存。一套試劑可染75張切片,我們科室4~5次用完一盒試劑,如此可避免多次復(fù)溫導(dǎo)致試劑失效。染色機(jī)采用單張滴染技術(shù),每張玻片均為新鮮試劑,保證染色質(zhì)量穩(wěn)定。

    全自動(dòng)染色機(jī)還具有以下特點(diǎn):(1)切片染色過(guò)程中滴加液體封蓋油膜,該油膜是一種低密度輕脂油,而染液多為水溶性試劑密度大于油膜,染色時(shí)油膜能夠包裹在反應(yīng)液和染液的外表層同時(shí)利用液體的張力,起到保溫的作用同時(shí)防止試劑揮發(fā),維持整張玻片反應(yīng)體系恒定。(2)工作量大,玻片數(shù)量多時(shí)可設(shè)置過(guò)夜程序,夜間也可染色從而提高工作效率。(3)儀器可自動(dòng)識(shí)別試劑量是否足夠。(4)染色機(jī)可進(jìn)行管道沖洗,避免真菌污染和不同染色的交叉污染。(5)噴射式清洗,降低染色背景。(6)廢液排入廢液桶,集中處理,避免污染環(huán)境。但是,全自動(dòng)染色機(jī)試劑成本較高。

    綜上,全自動(dòng)特殊染色機(jī)在腎臟PAS染色中流程標(biāo)準(zhǔn)化其效率、質(zhì)量、穩(wěn)定性等方面確實(shí)優(yōu)于手工操作,能夠?yàn)榕R床診斷提供可靠依據(jù)。

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